大苞雪莲醇提物的抗缺氧作用及其初步机制研究

来源:用户上传      作者: 聂兰　张晴晴

　　[摘 要]大苞雪莲又名新疆雪莲、天山雪莲，系菊科风毛菊属多年生草本植物，是我国高山地区民间常用的一类名贵中草药。雪莲性温、味微苦、具有散寒除湿、强筋助阳、抗炎镇痛、调经补血、收缩子宫等功能，可治疗风湿性关节炎、月经不调、阳痿等，并具有抗衰老和抑制癌细胞增生等作用[1-4]。近年来，国内对雪莲药理的研究主要集中于提高机体免疫力、祛风除湿和终止妊娠等作用，而关于其抗缺氧作用的研究较少。
　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）24-0144-01
　　一、引言
　　缺氧是指组织得不到充足的氧， 或不能充分利用氧时， 组织的代谢、机能、甚至形态结构发生异常变化的病理过程。在密闭急性缺氧时， 由于机体来不及代偿而发生严重的缺氧性损伤， 产生大量的自由基， 引发机体的炎症反应和脂质过氧化反应， 对器官功能造成严重障碍， 出现急性脑水肿和肺水肿，最终导致机体因功能衰竭而死亡。
　　本研究利用常压密闭缺氧小鼠模型，系统研究了大苞雪莲乙醇提取物的抗缺氧作用，并初步探讨了其抗缺氧机制。
　　二、项目可行性
　　1.在本实验中应用的实验技术――建立常压密闭缺氧小鼠模型方法，SPSS17.0统计软件的应用，都已经发展成熟，是实验常用方法。实验过程的设计与一些理论的获得主要通过中国知网的论文检索，具有较高的科学性。
　　2.本项目的相关技术均可由项目成员在学校现有实验室的条件下及老师的指导下完成，相关试剂和药品均可在国内市场上买到，且价格适中，实验经费符合学生实验的要求。
　　3.实验指导老师吴萍，具有扎实的专业知识和独立工作能力，我们从基础理论到实验技能，均能受到良好的训练。参与人员皆已进行过基础课程的理论学习和实验课程，具备一定的理论知识和实验能力，并且都对科研有浓厚的兴趣，其中多名人员曾经参与过老师的课题研究，可以更好的进行自主实验研究。
　　三、实验步骤计划
　　1 材料
　　1.1实验动物 SPF级昆明小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由青海省西宁市地方病预防控制中心研究所提供
　　1.2 药品与试剂 大苞雪莲全草入药，药材购自青海省西宁市中药材市场。药品粉碎后先后加入20，15，10倍量70%乙醇回流3次，浸泡30min，加热煮沸回流提取2h，过滤取滤液，残渣继续按上述方法提取2次，弃去药渣，合并3次滤液，减压干燥，临用前加适量聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80），然后边研边加蒸馏水，配成50g・L-1的浓度的混悬液；氰化钾；盐酸异丙肾上腺素注射液；亚硝酸钠；乙酰唑胺；凡士林；碱石灰
　　1.3 实验仪器 250mL广口瓶（统一用注水法校准， 容积为（300±1）mL）；电子秤；烘箱
　　2 方法
　　2.1 常压密闭缺氧实验[9]取SPF级昆明小鼠18只，雌雄各半，随机分成3组，每组6只，单次腹腔注射（ip）给药，缺氧模型组注射等容积生理盐水加上适量吐温-80；大苞雪莲醇提物组ip大苞雪莲醇提物300mg・kg-1；阳性对照组ip乙酰唑胺300 mg・kg-1。给药30min后，将小鼠放入250mL广口瓶中，每瓶放1只小鼠，瓶口涂抹凡士林密封（ 瓶内放碱石灰5g以吸收CO2和H2O，垫滤纸以吸收尿液，广口瓶用前均盛水校正容量），以呼吸停止为指标，记录小鼠的存活时间。
　　2.2 化学物质中毒缺氧实验[10-12]
　　2.2.1 对氰化钾中毒小鼠存活时间的影响 取SPF级昆明小鼠18只，雌雄各半，分组与给药剂量同2.1。给药后20min，每只小鼠再ip氰化钾10mg・kg-1，记录小鼠从氰化钾注射完毕至停止呼吸的时间。
　　2.2.2 对亚硝酸钠中毒小鼠存活时间的影响 分组及给药方法同2.1。给药后20min，每只小鼠再ip亚硝酸钠10mg・kg-1，记录小鼠从亚硝酸钠注射完毕至停止呼吸的时间。
　　2.2.3 对盐酸异丙肾上腺素中毒小鼠存活时间的影响 分组及给药方法同2.1。给药后20min，每只小鼠再ip异丙肾上腺素10 mg・kg-1。10min后，放入250mL广口瓶中，每瓶放1只小鼠，瓶口涂抹凡士林密封（ 瓶内放碱石灰5g以吸收CO2和H2O，垫滤纸以吸收尿液，广口瓶用前均盛水校正容量），以呼吸停止为指标，记录小鼠的存活时间。
　　2.3 取材 取各组小鼠心脏、大脑和肺脏组织，洗净血液。
　　2.4 观察指标
　　2.4.1 观察记录各实验小组小鼠的存活时间
　　2.4.2 动物脏器含水量的测定 用干湿质量法测量大脑、心脏和肺脏的含水量，解剖脏器后，用滤纸吸干外部水分，称取湿质量，再将其置于50℃烘箱中烤至恒重，称取干质量。
　　含水量（%） = （湿质量-干质量）/湿质量×100%
　　2.4.3 脏器指数的测定 将小鼠心、脑、肺称定质量，以脏器湿质量/动物体质量计算脏器指数，单位为mg・g-1。
　　2.5 统计学方法 采用统计软件SPSS 17.0处理，实验数据以x±s表示。组间均数比较采用单因素方差分析。P<0.05有统计学意义。
　　3 技术路线
　　首先选取SPF级雌雄各半的昆明小鼠随机分组，分别分成四个小组：1常压密闭缺氧实验18只、2氰化钾中毒实验18只、3亚硝酸钠中毒实验18只、4盐酸异丙肾上腺素中毒实验18只。观察记录各实验小鼠存活时间；取各组实验小鼠大脑、心脏及肺脏称量，测定含水量及脏器指数。最后进行结果分析。
　　四.项目创新点
　　近年来，国内对雪莲药理的研究主要集中于提高机体免疫力、祛风除湿和终止妊娠等作用，而关于其抗缺氧作用的研究较少。本实验系统研究了其乙醇提取物的抗缺氧作用，并初步探讨了其抗缺氧机制，为临床用药提供科学依据。
　　五.预计结果
　　1.大苞雪莲醇提物和阳性对照药乙酰唑胺均可显著延长常压缺氧小鼠的存活时间。
　　2.大苞雪莲醇提物和阳性对照药乙酰唑胺均可延长小鼠氰化钾，亚硝酸钠和盐酸异丙肾上腺素中毒缺氧的存活时间。
　　3.大苞雪莲醇提物和阳性对照药乙酰唑胺均可降低小鼠大脑、心脏和肺脏的含水量，明显改善组织水肿。
　　4.大苞雪莲醇提物对不同条件下小鼠缺氧的保护作用及效果也不相同。
　　参考文献
　　[1] 胡熙明，张文康，朱庆生，等.中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999：931.
　　[2] 李君山，蔡少青.雪莲花类药材的化学和药理研究进展[J].中国药学杂志，1998，33（8）：449.
　　[3] Cho J Y，Baik K U，Jung J H，etal.In vitro antiinflammatoryeffects of cynar-opicrin，a sesquitterpene lactone，from Saussurea lappa [J].Eur J Pharmacol，2000，398（3） ：399.
　　[4] Lee H J，Kim N Y，Son H J，etal.A sesquiterpene，dehydrocostus lactone，inhibits the expression of inducible nitric oxide synthase and TNF-alpha in LPSactivated macrophages[J].Planta Med，1999，6（2）：104.
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