PTEN在急性白血病中的表达意义
来源:用户上传
作者: 李安娜 刘婷婷 杨柳 柯波 金成豪
摘要：目的 研究急性白血病中PTEN表达意义，分析PTEN在急性白血病发病机制中作用。方法 收集2012年3月～2013年3月我院血液内科20例初治急性白血病（除外急性早幼粒细胞白血病）病例、14例骨髓正常造血（脾功能亢进、缺铁性贫血）病例。通过免疫组化实验方法半定量分析两组病例PTEN表达水平。结果 急性白血病组中PTEN表达水平明显低于正常组（P<0.05），具有统计学差异。结论 PTEN异常表达可能有参与了急性白血病发生发展。
关键词：急性白血病；PTEN；免疫组化
急性白血病是一种造血干细胞恶性克隆导致正常骨髓造血异常的恶性血液肿瘤[1]。PTEN基因是已知抑癌基因，本文将通过免疫组化半定量分析PTEN在急性白血病中表达，从而研究PTEN在急性白血病发病中的作用。
1 资料与方法
1.1一般资料 本研究选取2012年2月～2013年2月我院收治的20例初治急性白血病（除外急性早幼粒细胞白血病）患者作为研究对象，男14例，女6例，年龄25～86岁；包括6例急性髓系白血病M1型、8例急性髓系白血病M2型、4例急性髓系白血病M5型；所有病例均符合 MICM诊断标准。14例正常对照组包括9例缺铁性贫血、5例脾功能亢进病例。
1.2方法
1.2.1标本 所有标本均为骨髓活检组织石蜡，切成4μm组织切片
1.2.2 免疫组化 二甲苯（I、II）中脱蜡，浓度由高到低的乙醇脱苯，3% H2O2内源性过氧化物酶阻断，枸橼酸钠修复液高压修复5 min，一抗PTEN（北京中杉金桥，工作液），4℃冰箱孵育过夜，复温45 min后加通用型二抗，室温孵育15 min，滴加DAB显色液，显色10 s，自来水冲洗，滴加苏木素染色，使用1%盐酸酒精分化1～3 s，低浓度至高浓度酒精进行脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.3结果判定 PTEN蛋白表达于胞浆。采用半定量法分析免疫组化结果，每张骨髓病理切片随机挑选10个高倍视野（10×40），每个视野计数超过100个有核细胞，阳性细胞的数N/100即为阳性细胞百分比。根据阳性细胞所占比例及显色强度综合评分。A分为阳性细胞百分比：0～10%显色为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～100%为3分；B分为阳性细胞显色强度：未显色或蓝色为0分，浅黄色为1分， 棕黄色为2分，棕褐色为3分。A分+B分为标本积分，积分≥3分视为高表达，积分<3分视为低表达。
1.4统计学方法 用SPSS 19.0软件分析所有数据，计数资料以均数±标准差（x±s）表示，组间通过t检验分析PTEN在急性白血病组、正常表达差异。
2 结果
显微镜下观察PTEN表达阳性细胞的细胞胞浆内淡黄色至棕褐色颗粒。正常组及急性白血病组PTEN表达，见表1。计数两组PTEN表达积分，对两组平均值进行统计t检验，见表1。
急性白血病组病例PTEN表达积分平均值与标准差（0.8300±0.1865）与正常对照组（2.7670±0.4259）相比明显较低，P<0.05，两者在统计学上有显著性差异。
3 讨论
急性白血病是血液内科常见恶性肿瘤，是造血干细胞恶性克隆影响骨髓正常造血，从而引起感染、贫血、出血、外周浸润等症状。急性白血病平均生存期3个月左右。PTEN（phosphatase and tensin）基因是1997年被发现，是一个抑癌基因[1]。磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3）是PTEN的底物蛋白。PTEN具有蛋白磷酸酶和脂质磷酸酯酶双重活性，PTEN蛋白通过脂质磷酸酶活性使 PIP3去磷酸化为磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）从而抑制AKT介导磷脂酰肌醇三磷酸激酶（PI3K）信号通路活化，从而抑制细胞增殖[2]。有报道指出白血病中出现PTEN基因突变[3]。在对PTEN突变的斑马鱼研究发现，PTEN基因突变使斑马鱼中PTEN蛋白失活，造血干细胞可增殖但无法分化为成熟血细胞[4]。人类白血病发病可能与PTEN有关，本实验通过免疫组化发现PTEN在急性白血病表达较正常组低，支持PTEN失活参与急性白血病发病。PTEN可能可以帮助临床对急性白血病的诊断，同时为找出新的治疗提供新思路。
参考文献：
[1]Cristofano A D，Pesce B，Cordon-Cardo C，et al.Pten is essential for embryonic development and tumour suppression[J].Nature genetics，1998，19（4）：348-355.
[2]Cully M，You H，Levine A J，et al.Beyond PTEN mutations：the PI3K pathway as an integrator of multiple inputs during tumorigenesis[J].Nature Reviews Cancer，2006，6（3）：184-192.
[3]Zhang J，Grindley J C，Yin T，Jayasinghe S，et al.PTEN maintains haematopoietic stem cells and acts in lineage choice and leukaemia prevention[J].Nature，2006，441（7092）：518-522.
[4]Choorapoikayil S，Kers R，Herbomel P，et al.Pivotal role of Pten in the balance between proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells in zebrafish[J].Blood，2014，123（2）：184-190.
编辑/肖慧
转载注明来源:https://www.xzbu.com/1/view-7464774.htm
