正常妊娠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞和雌二醇水平变化的研究

来源:用户上传      作者: 姜玲 程光敏 姜淑慧

　　作者单位：437500 湖北省崇阳县人民医院
　　通讯作者：姜玲
　　
　　【摘要】 目的 探讨外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和雌二醇水平在正常妊娠整个过程中的变化。方法 采用三色荧光标记流式细胞术检测正常非妊娠健康女性（对照组），早早孕组、早孕组、中孕组、晚孕组各35例妇女外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率；采用电化学发光酶免分析技术分别检测以上各对象外周血雌二醇水平。结果 对照组和早早孕组外周血雌二醇水平明显低于早孕组、中孕组、晚孕组（P＜0.05），并且随孕周增大而升高（P＜0.05）；对照组和早早孕组外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率明显低于早孕组、中孕组、晚孕组（P＜0.05），并且随孕周增大而升高（P＜0.05），晚孕组略低于中孕组，但无统计学意义（P＞0.05）。结论 正常妊娠过程孕8周左右之后CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和雌二醇水平均呈现明显升高，并且随孕周增大而升高，正常的CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和外周血雌二醇水平在维持正常妊娠过程中发挥重要作用。
　　【关键词】 妊娠； CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞； 雌二醇
　　
　　
　　
　　CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞是具有免疫调节功能的细胞群，通过直接免疫抑制或分泌抑制性细胞因子发挥间接免疫抑制功能，是维持机体外周免疫耐受的一个重要调控者。越来越多的研究认为，妊娠期孕妇体内CD4+CD25+FOXP3+Treg 调节性T细胞（Treg细胞）介导对胚胎产生保护性免疫应答是维持正常妊娠的重要保障，并在诱导和维持母胎免疫耐受中起重要作用［1,2］，而雌二醇则可能是让在耐受环境下激活的CD4+细胞转向FOXP3+Treg的信号［3］。因此，本研究就正常非妊娠女性及妊娠妇女各阶段外周血雌二醇水平和Treg细胞数量比例增殖和恢复展开讨论，探讨外周血Treg细胞数量和雌二醇水平变化与维持正常妊娠的关系。
　　
　　
　　1 资料和方法
　　1.1 一般资料 妊娠组分为早早孕组、正常早孕组、正常中孕组和正常晚孕组，各35例，孕周依次为7周以内、8～12周、13～23周和24周以上，孕妇年龄25～34岁，平均28岁，全部孕妇均选取来自笔者所在医院定期产检的孕妇，既往无死胎、自然流产、放射性职业、自身免疫性疾病史。同时排除内分泌、解剖结构、染色体异常病例。对照组即正常非妊娠组35例，年龄26～33岁，平均29岁，均随机选取来笔者所在医院正常体检女性，均有妊娠史，既往无死胎、自然流产、放射性职业、自身免疫性疾病史，同时排除内分泌、解剖结构、染色体异常病例。
　　1.2 主要仪器和试剂 采用德国ROCH公司2010型电化学发光仪和美国COULTER公司生产的EPICSXL型流式细胞仪，雌二醇试剂采用ROCH公司电化学发光配套试剂，eBioscience公司提供的小鼠抗人CD4、CD25和FOXP3荧光抗体和同型对照检测试剂。
　　1.3 试验方法
　　1.3.1 外周血雌二醇水平检测 取上述各研究对象静脉血2 ml置于无菌干燥管内，静置30 min后离心4000r/min，离心5 min分离出血清，严格按照ROCH公司2010型电化学发光仪操作规程检测雌二醇水平。
　　1.3.2 外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率检测 采用标准全血裂解法，取上述各研究对象静脉血2 ml置于肝素抗凝管，充分混匀后各取100 μl细胞悬液，分别加入CD4-FITC和CD25-PE各15 μl，混匀后避光孵育30 min，离心去上清，加入固定破膜剂，混匀后避光放置20 min，离心去上清，取100 μl Hank's液重悬、15 μl PE-Cy5-FOXP3单克隆体抗，混匀后避光放置30 min，严格按照COULTER EPICSXL型流式细胞仪操作规程检测CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞比例。同时分别用PE-IgG1、FITC-IgG1、PE-Cy5-IgG1抗体作同型对照实验。
　　1.4 统计学分析 采用SPSS 15.0软件包进行实验数据的统计分析。各妊娠组与对照组比较和早、中、晚孕组与早早孕组的比较均采用成组设计t检验，各妊娠组间比较采用方差分析和SNK-q检验，各组数据以均数±标准差（x±s）表示，P＜0.05表示差异有统计学意义。
　　
　　
　　2 结果
　　从结果比较发现，外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率，对照组（8.54%±2.90%）和早早孕组（9.32%±1.96%）明显低于早孕组（13.38%±3.35%）、中孕组（19.33%±4.49%）、晚孕组（18.51%±3.98%），差异有统计学意义（P＜0.05），并且随孕周增大而升高（P＜0.05）（图1）；外周血雌二醇水平，对照组（135.25±171.31） pmol/L和早早孕组（453.62±352.31 ）pmol/L明显低于早孕组（17107.28±16623.81）pmol/L、中孕组（80019.95±49210.01）pmol/L、晚孕组（121010.37±65799.32 ）pmol/L，差异有统计学意义（P＜0.05），并且孕周越大雌二醇水平越高（P＜0.05）（图2）。
　　
　　
　　3 讨论
　　近来研究表明，妊娠具有半同种移植的性状，介导母胎免疫耐受，对胎儿产生保护性免疫应答，对于维持整个妊娠，避免孕妇与胎儿半同种异体抗原产生排斥反应有重要的意义。在整个妊娠过程中，随着胎儿的发育，暴露于母体的抗原逐渐增多，而不被母体排斥产生免疫耐受是母体免疫系统包括某些激素水平（如E2、HCG、PRL等）有效调节的结果。目前研究认为，排除由胸腺输出增高而在外周发生扩增的CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞，是在维持机体外周免疫耐受的一个重要调控者，正常的CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞数量和功能可使母体对胎儿半同种异体抗原发挥免疫抑制保护作用，可能是通过细胞产生特异性封闭抗体和抑制性免疫细胞主动抑制自身免疫性T细胞活化的机制诱导母胎免疫耐受，使胚胎免遭攻击的原因，促使妊娠成功。

　　CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞具有的免疫调节作用，在维持内环境稳定、诱导移植免疫耐受也发挥着重要的作用［4,5］。Somerset等［6］研究发现，妊娠妇女在早期CD4+CD25+显著升高，中孕达到最高峰，FOXP3+Treg细胞是调控CD4+CD25+的重要因子。本研究发现，正常妊娠妇女外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率在孕8周左右开始明显升高，这与肇静娴等［7］报道相符，可能与胎盘绒毛植入和大量胎儿自身抗原产生有关。同时中孕组CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率明显高于早孕组，晚孕组略有下降趋势，CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率略低于中孕组，但无统计学意义。Sindram-Trujillo等［8］报道表示，CD4+CD25+下降与诱导分娩有相关性。本研究结果提示，正常妇女外周血中存在一定数量免疫抑制功能的CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞，并且在妊娠过程中可诱导和维持母体对具有半同种异体抗原胎儿的免疫耐受，从而保护正常的妊娠过程。
　　雌二醇是雌激素中生命活性最强的一种，主要作用于垂体，也是妊娠期重要的性激素之一。妊娠6周前E2主要来源于卵巢分泌，6周后则主要来源于胎盘。有研究发现，而E2则可能是让在耐受环境下激活的CD4+CD25+细胞转向FOXP3+Treg的重要信号，并通过促进CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的增殖来增强其免疫抑制功能。本研究结果认为，正常妊娠妇女外周血E2水平明显高于正常非妊娠妇女，并且随孕周增加而升高；同时又发现妊娠妇女外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞数量与其E2水平有相似的变化规律。结果提示，外周血E2规律性变化是有效妊娠的重要因素之一，可能通过促进CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的增殖在诱导妊娠免疫耐受中发挥重要作用，从而保证正常的妊娠过程。
　　综上所述，外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率与雌二醇水平的规律性变化对诱导母胎免疫耐受，维持正常妊娠有重要意义。
　　
　　
　　参 考 文 献
　　［1］ Stephens LA, Mottet C, Mason D, et al.Human CD4（+）CD25（+） thymocytes and peripheralT cells have immune suppressive ac-tivity in vitro.Eur J Immuno,2001,31（4）:1247-1254.
　　［2］ Aluvihare VR, Kallikourdis M, Betz AG. Tolerance, suppression and the fetal allograft.JMolMed, 2005,83（2）: 88-96.
　　［3］ Polanczyk MJ, Carson BD, Subramanian S, et al. Cuttingedge: estrogen drives expansion of the CD4+CD25+regula-tory T cell compartment. J Immunol, 2004, 173（4）:2227-2230.
　　［4］ Paust S, Cantor H. Regulatory T cells and autoimmune disease. ImmunolRev, 2005, 204: 195-207.
　　［5］ 刘清泉,黄长形.CD4+CD25+调节性T细胞和感染免疫.医学研究生学报, 2006, 19（8）: 741-744.
　　［6］ Somerset DA, Zheng Y, Kilby MD, et al Normalhuman pregnancy is associated with an elevation in the immune suppressive CD25+CD4+regulatory T-cell subset. Immunology, 2004, 112（1）: 38-43.
　　［7］ 肇静娴, 曾耀英，刘毅.妊娠期调节性T细胞介导保护性效应需要同种抗原的刺激.现代免疫学，2006，26（3）：226-230.
　　［8］ Sindram-Trujillo AP, Scherjon SA, van Hulst-van Miert PP, et al.Comparison of decidual leukocytes following spontaneous vaginal delivery and elective cesarean section in uncomplicated human termpregnancy. J Reprod Immunol, 2004, 62（1-2）:125-137.
　　（收稿日期：2011-04-21）
　　（本文编辑：王春芸）
　　

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