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高效液相色谱法测定盐酸倍他司汀片的有关物质

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  【摘要】使用高效液相色谱,采用KromasilC18分析柱,以水-乙腈为流动相,检测波长为261nm,测定盐酸倍他司汀片中的有关物质。盐酸倍他司汀样品溶液中有关物质色谱峰的面积之和和2%盐酸倍他司汀现行对照溶液中主成分的色谱峰面积都和盐酸倍他司汀的浓度呈线性关系,且相关的系数分别为0.9991和0.9997。
  【关键词】高效液相色谱;盐酸倍他司汀;测定;有关物质
  doi:10.3969/j.issn.1004-7484(s).2014.04.578文章编号:1004-7484(2014)-04-2260-01盐酸倍他司汀属于组胺类药物,化学名为N-甲基-2-吡啶乙胺二盐酸盐,对脑血管、心血管,特别是对椎底动脉系统有较明显的扩张作用,显著增加心、脑及周围循环血流量,改善血循环,并降低全身血压,此外能增加耳蜗和前底血流量,从而消除内耳性眩晕,耳鸣和耳闭感[1]。该药品在药典中没有有关物质的检查项,不利于对该药品进行质量控制。笔者试用高效液相色谱对该药品中的有关物质进行了测定,结果证明该方法准确可靠,而且灵敏度高,可以采用。1实验仪器与实验方法
  1.1主要的实验仪器和试剂高效液相色谱(日本岛津公司)、盐酸贝塔斯婷对照品(中国生物制品鉴定所)、盐酸贝塔斯婷片(意大利佛曼蒂有限公司)、乙腈(色谱纯)、盐酸倍他司汀样品溶液(自制)、空白溶液、水(二次蒸馏水)。
  1.2有关物质的测定方法①首先精密移取1ml盐酸倍他司汀样品溶液至试管中,用水稀释至50ml,当做2%盐酸倍他司汀的线性对照溶液;②取上述配好的溶液20ul注入色谱中,调整好仪器的灵敏度;③再取盐酸倍他司汀样品溶液20ul注入色谱仪中,当色谱图至主成分峰保留时间的2倍,记录好数据,盐酸倍他司汀样品溶液杂质峰的面积总和不能大于2%盐酸倍他司汀的对照溶液主成分色谱峰的面积[2]。2实验结果
  2.1盐酸倍他司汀分解的产物按照以下步骤对盐水倍他司汀片进行加热破坏、算破坏、碱破坏以及氧化破坏,并制得盐酸倍他司汀分解液。
  2.1.1加热破坏取浓度为0.4mg/ml的盐酸倍他司汀样品溶液1ml,置于10ml的容量瓶中,然后在电炉上加热5min左右,放冷,最后用水稀释至刻度。
  2.1.2酸破坏取浓度为0.4mg/ml的盐酸倍他司汀样品溶液1ml,置于10ml的容量瓶中,然后加入适量0.1mol/L的盐酸溶液,摇匀,在电炉上加热,直至沸腾,然后放冷,再用1.0mol/L的NaOH溶液将PH调至7,最后用水稀释至刻度。
  2.1.3碱破坏取浓度为0.4mg/ml的盐酸倍他司汀样品溶液1ml,置于10ml的容量瓶中,然后加入适量0.1mol/L的NaOH溶液,摇匀,再用1.0mol/L的盐酸溶液将PH调至7,最后用水稀释至刻度[3]。
  2.1.4氧化破坏取浓度为0.4mg/ml的盐酸倍他司汀样品溶液1ml,置于10ml的容量瓶中,再加入适量的0.5%的高锰酸钾溶液,摇匀,在电炉上加热沸腾,直至溶液全部都挥发完,放冷,加入少量的水,过滤,最后用水稀释至刻度。分别取以上盐酸倍他司汀分解物质的溶液20uL,注入色谱仪中,得到色谱图,该实验说明,盐酸倍他司汀的主成分和分解产物之间可以较好的分离。
  2.2线性关系
  2.2.1盐酸倍他司汀的线性关系取适量的浓度为0.4mg/mL的盐酸倍他司汀对照品溶液置于容量瓶中,然后精密量取0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml分别置于10ml的容量瓶中,并用水稀释至刻度;再精密量取1ml上述溶液置于50ml的容量瓶中,用水稀释至刻度摇匀,以此作为2%的盐酸倍他司汀的线性对照液;然后精密量取20ul上述溶液注入色谱仪中,记录好色谱图,上述溶液从低浓度到高浓度对应的色谱峰面积分别为21116、28495、35738、42203、49628.利用线性回归,求得相关系数为0.9997。说明盐酸倍他司汀溶液的浓度在0.4848-1.1312ug/mL时线性关系较好。
  2.2.2盐酸倍他司汀有关物质的线性关系取适量浓度为0.4mg/mL的盐酸倍他司汀对照品溶液,向其中加入适量的盐酸倍他司汀分解液,摇匀,然后精密量取0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml,分别置于10mL的容量瓶中,再用水稀释至刻度。然后精密量取20ul上述溶液注入色谱仪中,记录好色谱图,上述溶液从低浓度到高浓度对应的杂质色谱峰的闽籍之和分别为236、394、589、751、955。利用线性回归,求得相关系数为0.9991,说明杂质峰的面积之和与盐酸倍他司汀溶液之间具有良好的线性关系。
  2.3精密度取20uL浓度为40ug/mL的盐酸倍他司汀的对照品溶液注入色谱仪中,重复进样5次,并记录好色谱图以及主色谱峰的面积,分别为437748、432068、437864、438057、437964、437609,RSD值为0.54‰。
  2.4稳定性取浓度为40ug/mL的盐酸倍他司汀的对照品溶液分别在0、2、4、6、8h进行测定,峰面积A分别为437286、438629、435616、436041、435263,RSD值为0.32‰。说明盐酸倍他司汀溶液在8h内很稳定。
  2.5样品测定取3批盐酸倍他司汀片(自制)和市场上销售的意大利进口的盐酸倍他司汀片进行测定,见表1。
  表1盐酸倍他司汀片有关物质的测定结果
  样品1批号1有关物质(%)盐酸倍他司汀片(自制)102023210.6202023310.6202023410.64盐酸倍他司汀片(进口)101103611.123讨论
  采用高效液相色谱对盐酸倍他司汀片中的有关物质进行测定,精密度高、回收率理想、线性范围也符合测定的要求,是一种非常好的测定方法。参考文献
  [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京:中国医药科技出版社,2010:662-664.
  [2]陈自平.盐酸贝塔斯婷含量测定方法的研究.安徽医药,2010,6(4):62-64.
  [3]方金玲,孙进,陆榕,等.离子对-HPLC法测定盐酸贝塔斯婷注射液中药物与相关物质含量[J].沈阳药科大学报,2006,23(7):448-451.
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