蜂胶对感染根管常见菌抑菌活性的实验研究

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　　【摘要】根管内微生物感染导致牙齿根尖周炎。诸多学者认为厌氧菌是牙髓、根尖周病的优势菌，为其细菌总数的2/3以上。在临床治疗中一般采用药物消毒法对根管消毒。近年来，已有相关报道已经证实蜂胶对人体无毒、无刺激性、无致癌性，不产生耐药性等，并且可以安全的用于口腔疾病的治疗。本文针对国产水溶性蜂胶对中间普氏菌、具核梭杆菌及二者混合菌的抑菌活性进行了实验研究，可以作为临床推广应用的实验依据。
　　【关键词】蜂胶；抑菌；试验；临床研究
　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.04.163文章编号：1004-7484（2014）-04-1947-02牙髓病和根尖周病属于口腔常见疾病，根管治疗术是治疗牙髓和根尖周病最基本有效的方法，根管治疗的重要步骤是根管消毒。临床上根管消毒有很多种方法，包括药物消毒、电解治疗、高频电疗、微波治疗以激光治疗等，但临床最常用的消毒方法为药物消毒。近年来，在医疗保健上，天然药物引起了人们的广泛兴趣。在新药开发中天然药物已经成为重要策略之一。蜂胶作为天然产物具有广泛的药理作用，有抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、消炎、止痛等多种药物学作用，还能促进组织愈合和调节机体免疫力。目前，诸多学者已经对蜂胶做了大量的研究，但是针对蜂胶作为根管消毒药物方面研究报道较少。因此，本文针对国产水溶性蜂胶对中间普氏菌、具核梭杆菌及二者混合菌的抑菌活性进行了实验研究，可以作为临床推广应用的实验依据。1资料与方法
　　1.1实验材料①厌氧手套箱；②超净工作台；③高压蒸汽灭菌器；④电子天平；⑤试管、刻度吸管、培养皿、锥形瓶等；⑥水溶性固体蜂胶。
　　1.2实验方法
　　1.2.1蜂胶储存液的制备把蜂胶放于冰箱内冻存24h，使其呈不具粘性的固体状态。用电子天平精密称量并取其蜂胶固体11.8g，取75ml蒸馏水，将二者混合，并调整PH值为（6.8-7.0），经过98℃的水浴加热制备成浓度为15.4%的蜂胶水溶液。溶液冷却后，经滤纸过滤，将得到的滤渣烘干。再称取滤渣重量以计算蜂胶溶液的准确浓度。然后加蒸馏水使得蜂胶水溶液浓度达到1%，放于冰箱内保存备用。
　　1.2.2蜂胶实验液的制备取1ml已制备的1%蜂胶溶液，加入9mlBHI+Hemin培养基，制成0.1%的蜂胶实验用液。分别加入不同量的BHI+Hemin培养基将0.1%的蜂胶实验用液分别稀释成0.1%0.05%、0.025%、0.0125%、0.0062%等五个浓度的蜂胶溶液备用。
　　1.2.3药物平板的制备分别取备用的五个不同浓度的蜂胶实验液，且在保证无菌的条件下，分别加入温度在48℃-50℃融化状态的BHI血琼脂中，混合后注入直径为90mm平板中。每个平板为一个药物浓度，须标记清楚，每个浓度药液量为2ml、琼脂培养基量18ml。
　　1.2.4对照平板的制备在制作药物平板的同时，制作一个只加BHI血琼脂不加蜂胶的平板作为阳性对照平板。再制作一个只加蜂胶不加BHI+Hemin培养基的平板作为阴性对照平板。
　　1.2.5菌悬液的制备用BHI液体培养基分别将具核梭杆菌和中间普氏菌的干燥菌粉溶解，根据分区划线法分别将两种细菌接种于BHI血琼脂培养基上，在温度为37℃且厌氧环境（80%N2，10%H2，10%CO2）培养48h，在显微镜观察下将其分离，分别移取大小形态相当的菌落溶于BHI液体培养基中，再将其第二次接种在BHI血琼脂培养基上，在温度为37℃厌氧环境（80%N2，10%H2，10%CO2）培养48后，加入BHI+Hemin液体培养基配成1.5×108CFU/ml菌悬液，备用。
　　1.2.6体外抑菌实验实验药液配制采用琼脂稀释法。在含蜂胶琼脂平板以及阳性对照琼脂平板的底部划分并标记成12个区。用点种仪取实验菌液，分别接种于5种浓度的蜂胶琼脂平板表面的记号区内。分别在1-4、5-8、9-12记号区内接种6μl的具核梭杆菌菌液，6μl的中间普氏菌菌液，具核梭杆菌菌液和中间普氏菌菌液各3μl（使其形成混合液）。接种完毕后，将各琼脂平板放置于温度为37℃且厌氧环境中（80%N2，10%H2，10%CO2）培养48h。可以用肉眼直接观察细菌生长情况，没有细菌生长的最低药物浓度为杀菌的最低浓度（MBC）。重复6次上述实验。2实验结果
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