慢性乙型肝炎患者血清HBV―DNA定量检测及其临床意义的探讨
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摘要：目的 探讨慢性乙型肝炎血清HBV-DNA水平与HBV标志物（HBVM）表现模式、肝功能状态的关系并分析其临床意义。方法 对173例慢性乙型肝炎患者采用荧光定量PCR法检测血清中HBV-DNA含量，ELISA法检测血清HBVM，拜尔560全自动生物化学分析仪检测肝功能，并进行比较分析。结果 血清HBV-DNA水平与HBVM表现模式有一定关系，HBeAg阳性者HBV DNA均阳性，且为高水平复制，HBeAg阴性/抗-Hbe阳性者仍有HBV复制，且单抗-HBs阳性、单抗-HBc、抗-HBs和抗-HBc阳性均可检出低水平的HBVDNA，HBV DNA含量的高低与ALT无相关关系。结论 血清HBV DNA含量与HBeAg有一定的相关性，但HBeAg阴性者病毒未完全停止复制，HBV-DNA可真实反映HBV复制；血清HBV-DNA与ALT无相关关系。
关键词：肝炎病毒；乙型；DNA；PCR；荧光定量
近年建立的荧光PCR方法，为定量观察病毒提供了一个灵敏的检测方法，本院用这一方法检测了慢性乙型肝炎患者的血清HBV-DNA含量，现将临床资料齐全的血清HBV-DNA水平与HBVM标志物（HBVM）表现模式、肝功能状态的关系作一比较，报道如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 所有病例均为本院2013年3月～6月住院及门诊的各型肝炎患者，共173例，男128例，女45例，年龄12～62岁，平均（31.9±10.7）岁。诊断与分型均符合传染病与寄生虫学术会议修订的标准[1]，其中慢性肝炎143例，活动性肝炎肝硬化20例，慢性重型肝炎10例，排除重叠或混合感染的病例。
1.2方法
1.2.1 HBV-DNA定量检测 试剂盒购于深圳匹基生物工程有限公司，所有操作均由专人严格按说明书操作，试剂盒的灵敏度为103copies/ml，仪器采用罗氏公司定量PCR仪，依据Taqman原理对模板DNA进行实时在线定量检测。
1.2.2 HBVM检测 采用ELISA法，试剂由上海科华公司提供，由专人严格按说明书操作。
1.2.3肝功能检测 采用拜尔560全自动生物化学分析仪检测，以入院时第一次检查结果进行比较。其中血清ALT的正常参考值为<40U/L。
1.3数据处理与统计学方法 HBV-DNA数值取对数进行分析，统计学方法采用t检验。
2 结果
2.1 HBeAg与HBV-DNA含量及ALT的关系见表1。
2.2不同HBV-DNA含量与HBeAg及血清ALT的关系见表2。
2.3在173例患者中有2例单抗-HBs阳性、2例单抗-HBc、1例抗-HBs和抗-HBc阳性患者均检出HBV-DNA，其滴度为2.56×103～1.1×104copies/ml，呈低水平复制。
3 讨论
HBV感染的传统血清学诊断方法多采用ELISA法检测，该方法敏感性较PCR低，且还难以准确反映HBV的复制水平，更不能表达血清HBV的含量，我们采用实时荧光定量PCR法对173例慢性乙肝患者进行了血清HBV-DNA含量的检测，发现HBV-DNA含量与HBeAg的存在有一定的关系，与文献[2]报告一致，说明HBeAg在一定程度上反映了HBV-DNA的复制状态。
但同时我们也发现有42.6%的HBeAg阴性患者体内仍能检出较高水平的HBV-DNA，提示e系统转换后并不能说明HBV停止了复制，此可能与HBV前C区和C启动子等基因变异有关，这种HBeAg阴性并不是反映HBV复制减轻和消失，相反因有HBV变异的存在和复制使得HBeAg表达缺失，从而使误认为是HBeAg的血清转换，易造成诊断上的困难[3]。我们还发现HBeAg阴性组血清ALT水平显著高于HBeAg阳性组，这可能与失去了变异调节能力的前C变异株，血清病毒的复制更易造成肝功能损害有关。
有观点认为HBV-DNA水平的高低反映了病毒的复制强弱，且与肝脏炎症程度有关。本资料按HBV-DNA含量从高到低将慢性乙型肝炎患者分组，各组之间血清ALT没有显著差异，而且少部分高病毒血症患者并没有血清ALT的明显升高。肝细胞损伤的轻重主要取决于机体对肝炎病毒及其抗原的异常免疫反应、细胞毒性T细胞抗原攻击受感染的肝细胞，导致大量肝细胞溶解等，肝脏的炎性损伤是多种因素作用的结果。
一般认为HBsAb是一种保护性抗体，是HBV感染终止及机体具有免疫力的标志，抗-HBc也是HBV感染终止的标志。但本院在173例患者中有2例单抗-HBs阳性、2例单抗-HBc、1例抗-HBs和抗-HBc阳性患者均检出HBV-DNA，其滴度为2.56×103～1.1×104copies/ml，呈低水平复制。推断可能与S基因变异有关，提示临床上不能仅仅根据抗-HBs和抗-HBc的产生来判断患者体内HBV的完全清除和感染的终止。
本研究提示，临床上应把HBVM和HBV-DNA结合起来分析，将HBV-DNA列入常规检查，要辨证地看待HBVM及HBV-DNA含量与肝病的关系。乙肝患者血清HBV-DNA阳性率与血清标志物存在相关性，进行血清标志物的检测与HBV-DNA定量检测能较准确直接地反应病毒复制程度及传染强度[4]。只要HBV-DNA阳性就有传染性，但病毒的复制并不一定造成肝功能的损伤，只有这样才能更准确、全面地判断乙型肝炎患者的状况。
参考文献：
[1]中华医学会传染病与寄生虫病分会、肝病学分会联合修订.病毒性肝炎防治方案[J].中华肝脏病杂志，2000，8（4）：324.
[2]俊红.HBV-DNA定量的动态观察对慢性乙型肝炎抗病毒治疗的指导意义[J].中西医结合肝病杂志，2002，12（6）：336.
[3]周子成，刘重阳，杨建民.不同慢性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA定量检测及临床意义[J].中华实验和临床病毒学杂志，1998，12（2）：129-131.
[4]赵卫，周盛杰.乙型肝炎患者血清标志物与HBV-DNA含量的相关性研究[J].海南医学，2013，（1）；49-50.
编辑/哈涛
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