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NRG1促进Wharton’sjelly间充质干细胞表达VEGF

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  【摘要】目的 探讨NRG1可否促进Wharton’s jelly间充质干细胞表达VEGF。方法 提取人脐带Wharton’s jelly间充质干细胞;细胞分未转染组和转染组;NRG1转染三天后,ELISA方法检测上清液中VEGF的含量,免疫荧光方法检测细胞中VEGF的表达。结果 转染组上清液中VEGF的含量和免疫荧光阳性率与未转染组的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NRG1可促进Wharton’s jelly间充质干细胞表达VEGF。
  【关键词】Wharton’s jelly间充质干细胞;神经调节蛋白1;血管内皮生长因子
  【中图分类号】R329 【文献标志码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.9..02
  脐带Wharton’s jelly间充质干细胞(Wharton’s jelly mesenchymal stem cells,WJMSCs)被认为是理想的干细胞源[1]。但移植的细胞存在存活率低的问题。神经调节蛋白1(neuregulin-1,NRG-1)属于生长和分化因子家族,可参与血管新生[2]。在体外,BMP4可否通过上调WJMSCs表达血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF),进而促进血管新生改善细胞生存环境,未查见相关报道。
  1 材料与方法
  1.1  材料
  人脐带(牡丹江红旗医院);FBS、DMEM培养基(Hyclone);NRG-1质粒(牡丹江医学院干细胞研究所);ELISA试剂盒(Takara);VEGF抗體(Sigma)。
  1.2  方法
  1.2.1 细胞提取
  取剖腹产脐带,剪成直径约0.3 cm的组织块,用10% FBS-DMEM培养液培养组织块;每2 d换液一次;细胞融合至90%时传代。
  1.2.2 实验分组
  实验分为转染组和未转染组。
  1.2.3 细胞转染
  取第三代细胞,按Lipofectamine TM 2000说明书把VEGF质粒转染细胞。细胞转染3天后,进行VEGF检测。
  1.2.4 ELISA检测
  按ELISA试剂盒说明书检测上清液中VEGF的含量。用酶标仪在450 nm波长下检测样本OD值。
  1.2.5 免疫荧光检测
  4%多聚甲醛固定15 min后1%牛血清白蛋白封闭25 min;VEGF抗体孵育100 min;二抗孵育50 min;DAPI复染15 min。阳性率=红色荧光数/蓝色荧光数×100%。
  1.3  统计学方法
  统计分析采用SPSS 13.0软件,计量数据以x±s表示,组间比较采用单因素方差,差异显著的判断标准为P<0.05。
  2 结 果
  2.1  ELISA检测结果
  如表1所示,转染组上清液VEGF的含量与对照组的比较,具有统计学意义。
  2.2  免疫荧光检测结果
  阳性细胞的胞质和突起呈红色荧光;经非特异性染色的细胞核呈蓝色荧光(图1)。转染组的阳性细胞表达率与对照组的比较,具有统计学意义(表2)。
  3 讨 论
  NRG1可促进多种细胞表达VEGF。NRG1可使发育的心肌增强VEGF的表达 [3];还能增加VEGF在人冠状动脉平滑肌细胞中的表达[4]。在病理情况下,结肠癌患者的活检标本中,NRG1与VEGF表达呈正相关[5]。本研究发现,NRG1可促进WJMSCs表达VEGF。这些研究结果表明,NRG1可调控VEGF的表达,进而参与增生、抗凋亡和血管新生等多种生物学过程。
  NRG1的配体是酪氨酸激酶(Erythroblastic leukemia viral oncogene homologs,ErbB)受体。NRG1∕ErbB信号不仅通过促VEGF表达途径[5],还可通过直接作用血管内皮[2]和血管平滑肌[6]途径促进血管新生。
  参考文献
  [1] Dinesh B,Sharath BS,Park JK,et al.Comparative analysis of human Wharton’s jelly mesenchymal stem cells derived from different parts of the same umbilical cord [J].Cell Tissue Res,2018,372(1):51-65.
  [2] Alberto O,Laura DG,Azucena EO,et al. Neuregulin expression in solid tumors: Prognostic value and predictive role to anti-HER3 therapies [J]. Oncotarget,2016,7(29):45042-45051.
  [3] Wadugu B,Kühn B.The role of neuregulin/ErbB2 /ErbB4 signaling in the heart with special focus on effects on cardiomyocyte proliferation [J].Am J Physiol Heart Circ Physiol,2012,302(11):2143-2147.
  [4] 庞毅恒,桂   春,陈力铨.神经调理蛋白1对冠状动脉平滑肌细胞表达血管生成因子的影响[J].中国病理生理杂志,2016,32(11):1945-1948.
  [5] Yonezawa M,Wada K,Tatsuguchi A,et al.Heregulin-induced VEGF expression via the ErbB3 signaling pathway in colon cancer [J].Digestion,2009,80(4):215-225.
  [6] Clement CM,Thomas LK,Mou Y,et al.Neuregulin-1 attenuates neointimal formation  following vascular injury and inhibits the proliferation of vascular smooth muscle cells [J].J Vascular Res,2007,44(4):303-312.
  作者简介:赵永成(1984年-),男,牡丹江医学院在读硕士,研究方向:干细胞分化机制及临床应用的实验研究
  通讯作者:梁 军(1972年-),男,博士,教授,牡丹江干细胞研究所所长,
  研究方向:干细胞分化机制及临床应用的实验研究
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