宜昌地区妇女人乳头瘤病毒感染状况分析

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　　摘要：目的  了解宜昌地区妇女不同亚型人乳头瘤病毒（HPV）的感染状况及感染人群特征，为该市HPV感染的筛查及相关疾病的防治提供流行病学依据。方法  选取2019年1～12月三峡大学附属仁和医院进行HPV检测的3354例患者，应用PCR反向点杂交检测扩增产物与包被有特异性探针膜杂交，采用碱性凝酸酶系统定性检测，对宫颈脱落细胞中21种HPV基因型进行分型，并分析不同年龄段HPV亚型感染情况。结果  3354份标本中，共检出HPV阳性标本742份，总感染率为22.12%。宜昌地区妇女易感人群平均年龄为（39.52±11.30）岁，不同年龄段均有HPV感染，以35～45岁年龄段的女性居多。HPV基因型以单一型感染为主（73.32%），排前3位HPV高危亚型为HPV52（16.19%）、HPV58（12.05%）、HPV16（10.07%）;低危亚型主要以HPVCP8304（6.47%）为主。结论  宜昌地区妇女HPV感染的年龄主要集中于35～45岁年龄段，以单一型感染为主，其中高危型HPV52、HPV58和HPV16为HPV感染的主要亚型。
　　关键词：人乳头瘤病毒;单一型感染;宫颈癌
　　Abstract：Objective  To understand the infection status of different subtypes of human papillomavirus （HPV） among women in Yichang and the characteristics of the infected population， so as to provide an epidemiological basis for the screening of HPV infection and the prevention and treatment of related diseases in the city.Methods  3354 patients who were tested for HPV in Renhe Hospital Affiliated to China Three Gorges University from January to December 2019 were selected. PCR reverse dot hybridization was used to detect the hybridization of the amplified product with the membrane coated with a specific probe， and the alkaline coagulase system was used for qualitative analysis detection， classification of 21 HPV genotypes in cervical exfoliated cells， and analysis of HPV subtype infection in different age groups.Results  Among the 3354 specimens， 742 HPV-positive specimens were detected， and the total infection rate was 22.12%. The average age of susceptible women in Yichang area was （39.52±11.30） years old， and HPV infections occur in different age groups， with the majority of women in the 35-45 age group. HPV genotypes were mainly single infection （73.32%）， and the top 3 high-risk HPV subtypes were HPV52 （16.19%）， HPV58 （12.05%）， HPV16 （10.07%）; the low-risk subtypes were mainly HPVCP8304 （6.47 %）.Conclusion  The age of HPV infection among women in Yichang area was mainly concentrated in the age group of 35 to 45 years old， and the single infection was the main type. Among them， high-risk HPV52， HPV58 and HPV16 were the main subtypes of HPV infection.
　　Key words：Human papillomavirus;Monotype infection;Cervical cancer
　　宮颈癌（cervical carcinoma）是我国女性第2常见恶性肿瘤，每年有20万新发宫颈癌患者和10多万患者死亡，严重危害我国女性健康。根据HPV致病性可分为高危型和低危型，高危型主要有16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68型等，低危型主要有6、11、42、43、44、和81型等。高危型HPV感染与宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）有关，低危型HPV感染则主要导致低度鳞状上皮内病变和良性生殖器疣，但致癌型在不同地区间有一定差异。本研究对我院就诊的3354份宫颈脱落细胞中21种HPV基因型进行分型检测，了解宜昌地区不同亚型HPV的感染状况及感染人群特征，为该市HPV感染的筛查及相关疾病的防治提供流行病学依据。 　　1对象与方法
　　1.1研究对象  选取2019年1～12月三峡大学附属仁和医院检验科检查的3354例患者，年龄17～70岁，其中<25岁161例、25～35岁1079例、35～45岁1076例、45～55岁834例、≥55岁204例。
　　1.2方法
　　1.2.1仪器试剂  检测所用试剂盒及仪器均由潮州凯普生物化学有限公司提供。
　　1.2.2标本采集  由医生以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，将宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针转5圈，慢慢取出宫颈刷，将其放入有患者编号的取样管中，取样管内已加有专用细胞保存液，拧紧瓶盖，送检样本，如不能马上送检样本，于4 ℃保存，并在2个星期内进行检测，可在-20 ℃长期保存。
　　1.2.3检测方法  ①DNA分离提取：首先，取保存有宫颈细胞的细胞保存液0.5 ml，以14000 rpm离心1 min，弃上清液后，利用潮州凯普生物化学有限公司的细胞裂解液提取DNA，最后，取1 μl抽提好的DNA样本作为模板进行PCR扩增，剩余DNA样品存贮于-20°C备用。②PCR扩增：反应体系为25 μl，包括PCR混合液23.25 μl，DNA聚合酶0.75 μl，DNA模板1 μl，扩增条件是95℃ 9 min，95 ℃ 20 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s，GOTO2，40 times，72℃ 5 min。③杂交过程：取出PCR产物20μl在95 ℃加热5 min，然后立即冰水浴至少2 min;在雜交孔内加入1 ml预热至45 ℃的杂交液，盖上盖板温育至少2 min后开泵排出预杂交的杂交液，然后关泵;把制备好的已变性的DNA样品溶液加入0.5 ml预热至45 ℃的杂交液，混匀，然后加在薄膜上，盖上盖板温育至少10 min后，开泵进行导流杂交;在45 ℃条件下，用预热至45 ℃的杂交液冲洗膜3次，0.8 ml/次，关掉水泵。④显色过程：设定杂交仪温度为25 ℃，用0.5 ml封阻液封闭膜，开泵排出封阻液，然后关泵，再用0.5 ml封阻液封闭5 min;开泵，泵出封阻液，关泵;加入0.5 ml酶标液，温育3～5 min;开泵泵出所有溶液，设定温度为36 ℃，用溶液A彻底洗膜4次，0.8 ml/次;加入0.5 ml显色底物，盖上盖板显色3～5 min，开泵泵出显色底物;用溶液B洗膜3次，1 ml/次，再用2 ml蒸馏水漂洗;关泵，取出杂交膜放在吸水纸上，1 h内分析结果。⑤结果判定：检测结果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点[21种基因型分别为：6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68和CP8304（81）]。
　　1.3统计分析  采用Excel软件分析，计数资料以（n）和（%）表示。
　　2结果
　　2.1不同年龄段HPV亚型感染情况分析  宜昌地区妇女易感人群平均年龄为（39.52±11.30）岁，不同年龄段均有HPV感染，以35～45岁年龄段的女性居多，见表1。
　　2.2 HPV亚型感染分析  在3354份标本中，共检出HPV阳性标本742份（22.12%），HPV基因型以单一感染为主，有544份（73.32%），二重感染142份（19.14%），三重感染45份（6.06%），四重感染11份（1.48%），见表2。在21种HPV亚型中有20种亚型被检测出，仅HPV35亚型未被检测出。在20种被检测出来的HPV亚型中，高危HPV优势亚型依次为HPV52（16.19%）、HPV58（12.05%）、HPV16（10.07%）、HPV51（8.99%）、HPV53（7.19%）;低危HPV亚型以HPVCP8304（6.47%）为主，见图1。
　　3讨论
　　HPV病毒是一种环状双链DNA病毒，包含3个功能区，分别为调控染色体外的DNA复制的早期编码区E区、形成病毒衣壳的结构成分的L区和非编码区。其中E区编码E6、E7等，是HPV最主要的致癌基因，参与病毒在宿主细胞中的复制、转录、翻译等功能;L区具有编码组成病毒衣壳的后期蛋白质的功能[1]。HPV感染大多都是一过性的，90%的人群感染后在1～2年内都能清除，只有少数人群由于自身免疫力低下而无法清除，导致持续感染，进而发展成为CIN，最终发展为宫颈癌。因此对不同亚型HPV的感染状况及感染人群特征进行分析，有利于了解HPV感染的主要亚型和易感人群，对HPV感染引起的相关疾病的早发现早治疗，降低宫颈癌的发生发展有一定的意义。
　　本研究对来我院检查的妇女的3354份宫颈标本进行21种HPV亚型检测，结果发现3354份标本中，共检出HPV阳性标本742份，总感染率为22.12%。宜昌地区妇女易感人群平均年龄为（39.52±11.30）岁，不同年龄段均有HPV感染，以35～45岁年龄段的女性居多，提示35～45岁年龄段女性是HPV易感人群。HPV感染率以单一型感染为主（73.32%），四重感染占比较少。研究显示，我国HPV感染前3位亚型主要为HPV16、52、58[2-4]，其中HPV52、58型感染转阴率最低[5]。本研究中前3位高危HPV优势亚型依次为HPV52（16.19%）、HPV58（12.05%）、HPV16（10.07%），HPV52和HPV58的检出率比HPV16的检出率高，与陈春宝等[6]研究结果一致。低危型HPV亚型以HPVCP8304亚型感染为主（6.47%），与刘存芬[7]报道一致。本研究虽与既往研究趋势一致[6，7]，但与检出数据还存在较大的差异，除了HPV检测试剂盒的覆盖范围不同造成的差异之外，也表明了HPV基因型感染存在地域型差异，可能与区域环境、生活习惯、工作压力及文化背景等存在差异有关。
　　综上所述，宜昌地区妇女HPV感染的年龄主要集中于35～45岁年龄段，以单一型感染为主，其中高危型HPV52、HPV58和HPV16为HPV感染的主要亚型。
　　参考文献：
　　[1]张婵，孙媛，刘铭，等.HPV病毒感染与宫颈病变发生发展关系的研究进展[J].中国微生态学杂志，2016，28（7）：861-864.
　　[2]范成娇，李静，鲁爱枝.HPV52/58感染与女性宫内病变发生风险的相关性研究[J].中国妇幼保健，2015（30）：841-843.
　　[3]段超英.宫颈上皮内瘤变患者中人乳头状瘤病毒感染情况分析[J].国际检验医学杂志，2017，38（4）：551-552.
　　[4]吴云燕，裘明利.女性高危型人乳头瘤病毒感染分布情况研究[J].中国实用妇科与产科杂志，2017，33（1）：122-124.
　　[5]张睿，毕鑫星，叶阿里，等.人乳头瘤病毒在临床患者中的感染现状及主要型别分析[J].中国医学科学院学报，2017，39（4）：506-510.
　　[6]陈春宝，苏震，田昕，等.海南2939例女性HPV感染现状及基因型分布[J].中国热带医学，2017，17（9）：904-907.
　　[7]刘存芬.安宁市人乳头瘤病毒检测及感染人群特征分析[J].检验医学与临床，2017，14（3）：370-372.
　　收稿日期：2020-04-28;修回日期：2020-05-06
　　编辑/杜帆
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