屠宰环节禽产品中金黄色葡萄球菌污染状况调查

来源:用户上传      作者:谢建华 叶洁莹 王棋 梁望旺 杨泽林 熊仲良 曾政

　　摘要 [目的]了解重慶市家禽屠宰环节金黄色葡萄球菌的污染情况，为防控金黄色葡萄球菌食源性疾病的发生提供参考依据。[方法]按照GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》对重庆市屠宰环节400份样品进行检测，同时随机选择40株金黄色葡萄球菌进行药敏试验和致病性分析。[结果]屠宰环节金黄色葡萄球菌污染程度达59.25%，秋季较夏季污染程度重，为67.00%，胴体比环境污染重，为65.71%，烫洗煺毛和净膛环节污染风险较重均达60%以上。40株分离株中毒素基因检出率为65.00%，总耐药率为95.00%，主要对青霉素、四环素、红霉素和克林霉素耐药;70.00%的菌株同时对3种以上抗生素耐药。[结论]重庆市家禽屠宰环节金黄色葡萄球菌污染较重，部分分离株存在多个毒素基因和多重耐药现象，值得高度重视。
　　关键词 金黄色葡萄球菌;禽产品;细菌污染
　　中图分类号 S852.61  文献标识码 A
　　文章编号 0517-6611（2020）20-0163-03
　　doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.20.044
　　Investigation on Staphylococcus aureus Pollution in Slaughtered Poultry Products
　　XIE Jian-hua，YE Jie-ying，WANG Qi et al （Chongqing Animal Disease Prevention and Control Center，Chongqing 401120）
　　Abstract [Objective]To understand the pollution of Staphylococcus aureus in slaughtered poultry products in Chongqing. [Method]According to GB 4789.10-2016 National Food Safety Standard-Food Microbiological Examination S.aureus，a total of 400 samples in Chongqing， 40 strains of S.aureus were randomly selected for drug sensitivity test and pathogenicity analysis.[Result]S.aureus pollution reached 59.25%.Autumn was more polluted than summer，67.00%.Carcass was more polluted than environment， 65.71%.The pollution risks in ironing and cleaning was more than 60%.In 40 isolates，the detected rate of toxin gene was 65.00%， and the average drug resistance rate was 95.00%.The S.aureus isolates were highly resistant to penicillin， tetracycline， erythromycin and clindamycin， 70.00% strains displayed multi-drug resistance.[Conclusion]The pollution of S.aureus in slaughtered poultry products in Chongqing is serious，some isolates had multiple toxin genes and multi drug resistance，which should be paid more attention to.
　　Key words Staphylococcus aureus;Poultry products;Bacterial contamination
　　金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的食源性致病革兰氏阳性菌，自然界中广泛存在，可以通过接触、空气传播等多种途径污染食品，在适当条件下产生肠毒素等多种毒性蛋白，可引起急性金黄色葡萄球菌毒血症和食物中毒 [1-3]。有关资料表明，无论是在发达国家还是发展中国家，金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中占有较大比例 [4-6]。同时随着耐药性菌株不断增多，细菌的耐药已成为公共卫生问题。细菌的耐药可以通过食物链传播，临床细菌的耐药性与食物中细菌的耐药性直接相关 [7]。了解重庆市家禽屠宰环节食源性金黄色葡萄球菌污染程度、产毒素及耐药性情况，以期为该市金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病的发生提供预警，亦为临床指导用药提供参考依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 取样环节与数量 在重庆选取2个大型屠宰场和2个中小型屠宰场，2018年上半年和下半年各取1次，全年共取样400份。其中胴体表面拭子280份，环境拭子120份。
　　1.2 取样方法
　　用棉签擦拭胴体表面和各环节环境表面，然后装入装有10 mL运输培养基的试管中冷藏保存。
　　1.3 检测方法
　　先按照《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》GB 4789.10—2016进行分离鉴定 [8];应用法国梅里埃VITEK2 Compact 细菌全自动微生物鉴定与药敏分析系统对分离菌株进行生化鉴定和药敏分析。按照刘颖等 [9]提供的金黄色葡萄球菌毒力基因进行分析。 　　1.4 检测数据分析 采用t检验方法对样品检测数据进行生物学统计分析。
　　2 结果与分析
　　2.1 不同屠宰规模验证结果与分析 由表1可知，不同规模屠宰场都存在金黄色葡萄球菌污染，大型屠宰场与中小型相比差异不显著（P>0.05）。原因可能是小型屠宰场便于清洗消毒，动物来源主要局限于当地，而大型屠宰场由于待宰动物多且来源广，从而加大了污染概率。
　　2.2 不同季节验证结果与分析
　　不同季节都存在金黄色葡萄球菌污染。由表2可知，秋季的污染风险较大，检出率达67.00%，与夏季相比差异极显著（P<0.01）。
　　2.3 不同样品类型验证结果与分析 由表3可知，胴体和环境中都存在金黄色葡萄球菌污染，尤以胴体的污染风险较高，达65.71%，与环境拭子相比差异极显著（P<0.01）。
　　2.4 不同环节中金黄色葡萄球菌检测结果 由表4可知，不同环节中都存在金黄色葡萄球菌污染，烫洗煺毛和净膛环节污染风险较重，与清洗和分割环节相比差异显著 （0.01<P<0.05）。
　　2.5 药敏试验结果
　　根据采样时间和样品类型从分离的237株金黄色葡萄球菌中随机抽取40株进行药物敏感试验，以金黄色葡萄球菌ATCC25923作质控菌株，由图1可知，40株金黄色葡萄球菌中38株存在不同程度的耐药性，总耐药率为95.00%，其中青霉素耐药菌株为85.00%，四环素耐药菌株为67.50%，红霉素耐药菌株为62.50%，克林霉素耐药菌株为57.50%。40株分离株对苯唑西林、万古霉素、呋喃妥因、替加环素、奎奴普丁-达福普汀和利奈唑胺敏感。多重耐药性分析可见，70.00%的金黄色葡萄球菌同时对3种以上抗生素耐药。
　　2.6 致病性分析
　　对随机选出的40株金黄色葡萄球菌进行sea等毒素基因及mecA基因的检测，结果26株菌株含有毒素基因，占65.00%，剥脱毒素检出率最高达40.00%（16/40），其次是肠毒素，达35.00%（14/40），其中含传统肠毒素基因的检出率20.00%（8/40），新型肠毒素的检出率32.50%（13/40）。肠毒素基因中sec、seg和sej检出率较高，均为15.00%，seb为 5.00%，未检出see基因毒素，14株肠毒素阳性菌株中有10株至少含2种肠毒素基因，pvl检出率为10.00%（4/40），tst检出率为2.50%（1/40），MecA基因检出率为5.00%（2/40），其中一株基因型为mecA+seb，另外一株为mecA+sea+sei+pvl（图2）。
　　3 讨论
　　综上所述，家禽屠宰环节金黄色葡萄球菌污染程度较高，达59.25%，污染风险与季节和清洗消毒程度有很大关系，金黄色葡萄球菌主要的流行季节是夏秋两季，自古重庆初秋就有“秋老虎”的称号，高温天气有利于细菌的繁殖和流行。经调查，烫洗过程用的都是静止的水且屠宰分区不明，这就导致水中粪便、羽毛和其他污物与胴体接触，加大了金黄色葡萄球菌的污染风险。屠宰分区合理，清洁消毒彻底、宰后检疫把关，是禽产品中金黄色葡萄球菌污染风险显著下降的主要原因。
　　随机选取的40株金黄色葡萄球菌对青霉素、四环素、红霉素和克林霉素等具有不同程度的耐药性，这与林君等 [10]和章海通等 [11]报道一致，70.00%的金黄色葡萄球菌同时对3种以上抗生素耐药，这与临床上大环内酯类、林可酰胺类等抗生素的大量使用密切相关。细菌耐药性通过动物源性的食物链传播给人类并成为人类病原菌耐药重要原因，同时抗菌药物的使用也会影响人体内的微生态及其生产环境 [12]。多重耐药金黄色葡萄球的出现预示着食用这类菌污染产品带来的风险更大，同时为临床给药和治疗带来更大的挑战。应加强耐药监测，在养殖环节加大宣传力度，减少抗生素滥用，从源头上控制细菌耐药的增强。
　　此外，40株金黄色葡萄球菌中65%的菌株含有毒素基因，其中肠毒素达35.00%。14株肠毒素阳性的菌株中有10株至少含2种肠毒素基因，占比达71.43%（10/14），产肠毒素的种类越多，引起食物中毒的风险越大。有2株含有seb基因，seb是目前食品中毒常见的重要生物毒素之一，微量的seb会引起机体免疫失调、呕吐、腹泻、器官损伤等其他症状。由于具有耐高温、耐酸碱、易于制备气溶胶等特点，目前已经被美国疾病预防控制中心（Centers for Disease Control and Prevention，CDC）列为B类潜在生物制剂 [13]。另外有2株金黄色葡萄球菌检出mecA基因，但这2株细菌的药敏结果显示其对万古霉素和苯唑西林敏感，不属于超强耐药菌株，可见mecA基因不能作为甲氧西林和苯唑西林抗性的指示剂，这也与刘颖等 [10]和Pereira等 [14]报道一致。
　　通过此次调查，家禽屠宰环节金黄色葡萄球菌污染较重，由于重庆市气候温和，相对湿度较大，一旦存在金黄色葡萄球菌污染极易繁殖产生毒素，从而造成食源性疾病的發生。摸清屠宰环节禽产品中金黄色葡萄球菌的污染水平，可为禽产品质量安全的监管提供科学依据。
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