您好, 访客   登录/注册

响应面法优化臭灵丹中异绿原酸B的提取工艺研究

来源:用户上传      作者:

  【摘   要】 为了优化臭灵丹中异绿原酸B的提取工艺,在前期单因素试验对功率、时间、料液比、乙醇浓度四个影响提取因素比较的基础上,应用HPLC法测定含量,通过Box-Behnken实验对数据进行了响应面法分析。结果得出:异绿原酸B的最佳提取工艺为超声功率300w,超声时间51minn,料液比38:1 g/mL,乙醇浓度为74%,其得率为1.598%。
  【关键词】 臭灵丹草;异绿原酸B;HPLC响应曲线法
  中图分类号:R284.2             文献识别码:A               文章编号:2096-1073(2020)10-0034-36
  [Abstract] In order to optimize the extraction process of iso-chlorogenic acid B from Odorant panacea, on the basis of the comparison of four factors affecting the extraction, namely power, time, solid-liquid ratio and ethanol concentration, HPLC method was used to determine the content, and response surface method was used to analyze the data through box-Behnken experiment. The results showed that the optimal extraction technology of iso-chlorogenic acid B was ultrasonic power 300w, ultrasonic time 51minn, solid-liquid ratio 38:1 g/mL, ethanol concentration of 74%, and yield of 1.598%.
  [Key words] panacea purpurea; isochlorogenic acid B; HPLC response curve method
  臭灵丹草,学名(Laggera pterodonta),在民间被称为臭叶子、大黑药等,为菊科翼齿六棱菊的全草,洗净后干燥入药。它是云贵川地区常见的中草药,其味苦、辛,性寒,具有非常高的药用价值,近年来逐渐应用于临床中,可治疗急性呼吸道感染、感冒和甲型H1N1流感等,对治疗多类病毒有明显功效。据相关研究发现,水提物中的二咖啡酰奎尼酸结构对单纯疱疹病毒Ⅰ型,单纯疱疹病毒Ⅱ型以及流感病毒ⅣA所致的细胞病变有抑制作用[1]。因此,探究臭灵丹中二咖啡酰奎尼酸的含量和功效具有重大意义,该试验主要针对臭灵丹中异绿原酸B(3,4-二咖啡酰奎尼酸)的提取工艺进行研究。
  1  材料与方法
  1.1  试验材料
  臭灵丹草采于云南省石林彝族自治县周边;异绿原酸B标准品由成都曼思特公司购买;实验所需仪器、用具、试剂、药品等均由吉林农业科技学院制药工程实验室提供。
  1.2  试验方法
  1.2.1 HPLC化合物含量测定  HPLC条件:型号为Inertsil ODS-SP色谱柱(4.6×150 mm,5 μm);流动相为0.1%乙酸水(A)-甲醇(B)洗脱梯度 (0~5min,20%~35%B,5~13min,35%~50%B, 13~18min,50%~80%B,8~40min,80%~20%B),检测波长327 nm,柱温30℃,流速1.0 ml/min,进样量20 μL。
  标准品的制备:在弱光线的环境下,分别取10mL棕色瓶放入标准品B 3.7 mg,加100%甲醇溶解并定容,制成每1mL含0.37mg的异绿原酸B溶液,置于2-8℃下待用。
  供试品的配置:将臭灵丹粉末过40目筛,称取全草粉末1.000 g放入锥形瓶,倒入甲醇溶液至刻度线,准确称重,在功率300w、频率50kHz条件下,对药材进行超声处理1h,冷却后补充缺少重量,备用。
  1.2.2 线性回归方程  标准品溶液移入25mL容量瓶中,分别加入甲醇溶液稀释至2、4、6、8、10 倍,定容后根据1.2.1方法进样测定峰面积,得出异绿原酸B的线性关系为:Y=97164440X-2184,线性范围0.02~0.10 mg/mL,R2=0.9998。
  1.2.3 响应面因素水平设计  通过该试验前期阶段的单因素试验考察结果,选择出条件较好的三个水平,借助Box-Benhnken模型建立与分析四项因素,设计响应面试验因素及水平,见表1。
  2  结果与分析
  2.1  异绿原酸B的方差分析
  借助Box-Benhnken模型,对异绿原酸B提取试验进行了Box-Behnken设计,针对结果分析得出响应面模型的回归方程:
  Y1 =+1.558-7.75A+0.1001B+0.0332C-0.014D+0.0202AB+0.1307AC+0.0437AD+0.0425BC-0.0297BD-0.052CD-0.1259A2-0.1113B2-0.1412C2-0.1568D2
  异绿原酸B的方差分析结果见表2。
  由表2可得出,衡量控制组与实验组差异大小的P值小于0.01,Fb=22.15,表明模型拟合方程显著,根据两模型失拟项的方差分析,P>0.05,Fb=3.337,失拟项不显著,实验数值之间差异小,方程式可以完全反映实验的实际情况。试验所选模型的决定系数R2=0.9668,变异系数(C V%)=3.13,表明其拟合程度良好,测试误差较小,模型可用来分析与预测异绿原酸B的提取率,得出最佳超声功率300w、最佳提取时间51min、最佳料液比为38:1(g/mL)、最佳乙醇浓度为74%。
  2.2  交互作用分析
  异绿原酸B的交互影响见如图1。由图1的3D图可知响应面曲面的倾斜程度确定两者对响应面值的影响程度,说明两者之间的交互作用,AC(功率与料液比)的曲面倾斜的坡度最抖,表示功率与料液比的交互作用最显著;而图AB(提取时间与浓度)的曲面倾斜的坡度最缓,则提取时间与浓度的交互作用影響较小。
  3  结论
  本试验是建立在前期超声提取臭灵丹草中异绿原酸B单因素试验基础上,通过优化实验数据后,选择四因素中的三水平进行解析,根据 Box-Behnken设计,提取出异绿原酸B的成分,通过数据分析可知,异绿原酸B最佳提取条件为:最佳超声功率300w、最佳提取时间51min、最佳料液比为38:1(g/mL)、最佳乙醇浓度为74%;在所选因素范围内提取影响顺序为:提取乙醇浓度>料液比 >提取功率>提取时间。该试验可为臭灵丹草中的异绿原酸B提取工艺进行优化提供参考,也对该中药的二次开发研究提供了实验基础及科学的实验依据。
  参考文献:
  [1] 王胤骁.云南民间常用药臭灵丹的研究概述[J].云南中医中药       杂志,2019(07).
  [2] 韩永成.金银花药材质量综合评价研究[J].中国优秀硕士学位      论文全文数据库,2014(01).
  [3] 朱雪飞.固态发酵法制备苜蓿肽的工艺及其理化特性研究[J].      中国优秀硕士学士论文全文数据库,2015(05).
  (编辑:赫亮)
转载注明来源:https://www.xzbu.com/1/view-15356001.htm

服务推荐