丹参酮ⅡA对缺氧缺血脑损伤新生大鼠脑组织中MicroRNA-181b表达的影响

来源:用户上传      作者:李济方 宋文秀

　　【摘要】目的：探讨丹参酮ⅡA（TSⅡA）对缺氧缺血脑损伤新生大鼠脑组织中MicroRNA-181b（miR-181b）表达的影响。方法：挑选出生时间在7日的SD新生大鼠作为本次研究的实际对象，选择的数量为40只，最后使用随机数字法分为以的四组：正常对照组、模型对照组、TSⅡA低剂量组、TSⅡA高剂量组，各组均为10只，缺氧缺血手术完成以及分组之后，将其与原有小组中的母鼠放在一起。对照组中的小鼠只将其颈部皮肤划开，分离其颈总动脉，但不对其进行结扎手术。建立经典的HIBD动物模型，并且在造模过程中要注意观察建立动物模型前后实验动物的行为学改变。模型对照组在进行缺氧缺血术后使用等量生理盐水腹腔注射，每日注射1次，直至取用标本。TSⅡA低剂量组在缺氧缺血术后使用TSⅡA磺酸钠注射液以35mg/kg的剂量进行腹腔注射，每日注射1次。TSⅡA高剂量组，行缺氧缺血术后使用TSⅡA磺酸c注射液以70mg/kg的剂量进行腹腔注射，每日注射1次。将四组新生鼠处死，并完整的取出大脑，采用PCR的方法进行检测各组新生鼠脑组织中miR-181b水平。结果：各组新生鼠脑组织miR-181b表达量的变化：正常对照组miR-181b较模型对照组明显表达（P<0.05），TSⅡA各组miR-181b均较模型对照组明显表达（P<0.05），TSⅡA高剂量组miR-181b表达强于TSⅡA低剂量组（P<0.05）。结论：丹参酮ⅡA可促进新生鼠缺氧缺血脑损伤后脑组织中miR-181b的表达。
　　【关键词】缺氧缺血性脑病;MicroRNA-181b;TSⅡA
　　【中图分类号】R-332【文献标识码】A【文章编号】2096-5249（2022）18-0176-04
　　围生期缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是临床上常见婴幼儿神经损伤或新生儿死亡的重要因素之一。现阶段，在临床不断进步的情况下，窒息新生儿的救治成功率显著上升，但HIBD临床确诊率也在不断增加，不仅对患儿家庭造成较大负担，也影响新生儿父母的正常生活和情绪状态。新生儿之所以会出现窒息，其主要原因在于母体在怀孕期间或者是分娩中，婴儿呼吸的氧气过少，或存在呼吸障碍或者是无法正常呼吸而导致的，这是引起新生儿死亡和伤残的最重要原因之一[1]。新生儿窒息对机体的损害是整体性的，可引起多器官功能障碍，但其中最容易影响的器官是脑。缺氧是HIE发生的核心，此病会导致不同程度的神经系统损害。在发生HIE之后的存活者仍然存在程度不同的神经系统的后遗症，例如认知障碍、智力低下、运动发运迟缓等，更有相当一部分甚至出现脑瘫等后遗症[2-3]。显然目前的治疗方法并不能产生完全阻止神经系统后遗症发生[4]。现有的治疗方法都不甚完善，这就成为了目前新生儿HIE治疗的难点，所以寻找一种成熟的治疗药物成为了新生儿HIE治疗的研究方向。在临床研究中，中医学对HIBD预后质量、治疗效果、功能恢复等方面影响较大。以往，西医多实施三支持、三对症治疗方案，但无特效解决办法，导致新生儿死亡情况并未改善。传统医学则按照其实际症状差异进行处理，在没有病名情况下归入惊风、呕吐等范畴，并参考中医中风辩证处理。在辩证治疗中多重视虚实之症等变化，丹参则属于通络调经、活血化瘀的常见药物，其在临床应用后可影响患儿的临床症状、功能状态、理化指标等，但目前尚无相关动物实验验证这一研究。
　　miRNA在神经系统及心血管系统的缺血缺氧相关疾病密切相关，而MicroRNA-181b（miR-181b）又在与这些疾病相关的研究中多次出现而且倍受关注。miR-181b在中枢神经系统表达水平较高而且主要在神经元和小胶质细胞上表达[5]。国内的学者在小鼠MCAO模型的中就发现，短暂的MCAO再灌注24h后会导致小鼠缺血损伤后的大脑皮层中miR-181b表达的水平下降[6]。还有一些研究显示，miR-181b能够对部分炎症因子起到调节抑制的作用，例如肿瘤坏死因子α、IL-6、HMGB-1等，可有效保护神经系统功能的正常使用[7]。
　　研究证明，TSⅡA是能明显降低脑损伤后炎症反应的，同时对于缓解脑部水肿、抑制血脑屏障通透性的增加，以及修复钙摄入过多导致的神经元损伤等方面具有突出效果[8]。丹参酮ⅡA磺酸钠可能够使炎性细胞因子当前的表达得到控制，防止机体出现炎症反应，保护新生大鼠出现缺血缺氧性症状，降低脑损伤的可能性[9]，但总体来说，TSⅡA是较少应用于新生儿疾病。因此在本次研究中，仅使用TSⅡA的方式检测新生大鼠在出现缺氧缺血性脑损伤之后的脑组织中miR-181b表达的检测，来进一步探究TSⅡA对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的影响。
　　1材料与方法
　　1.1实验动物
　　新生7日SD大鼠，清洁级，共有40只，其中雄性23只，雌性17只，12～18g。全部大鼠都来源于湖南省医学实验动物中心，相应的批号为SCXK（湘）2019-0014。
　　1.2方法
　　1.2.1实验分组
　　取7日龄新生大鼠40只，使用随机分配的方式，将其划分成四个组：低与高TSⅡA剂量组、正常对照组与模型对照组。每组各10只新生SD大鼠。
　　1.2.2做HIBD模型
　　将本次研究的SD大鼠处放置在正常室温之下，称取各自的体重并记录，使用随便分配的方式，生成各自对应的编号。在进行缺氧与缺血手术之间对相关信息进行记录，在手术完成之后，也要记录相关的数值。制作HIBD模型：1、在进行缺血手术的过程中，将研究对象的姿势调整为仰卧状，并规定，使其右颈部皮肤后能够暴露在手术人员的视野中，随后进行表皮消毒，然后使用眼科剪从中心位置垂直剪开1cm长的切口，选择适当的位置展开分离手术，将小鼠的右颈动脉裸露在外，随后借助尖镊夹将事先准备好的5-0号灭菌手术丝线用于缝合操作中，最后在其近、远心端两个位置完成结扎，在确认结扎牢固后，将颈动脉从中间离断，最后将切口缝合。2、缺氧手术：在上述手术完成之后，将母鼠与上述实验大鼠放在一起，经2h的恢复处理后，将其置于密封箱中，使其温度与室温相同。将浓度为8%的氧氮混合气体注入密封箱中，经过2h的缺氧处理之后，放入正常环境中正常喂养。

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