莲花子房提取物的制备及表征
作者 :  本刊编辑部

  摘要:
  近几年,将温和的中草药提取物添加到化妆品中非常流行。《本草纲目》对莲花的医药功效有详尽的描述,莲花有温和无毒、固精气、悦颜色、益血、益色等药效,是美容驻颜的佳品。本文探讨了莲花子房提取物的主要成分,以及其对人体皮肤的作用机理和功效。
  我们用GC-MC、HPLC高效液相色谱仪对莲花子房的提取物成分进行了分析,分析其主要功能成分是黄酮类、酚类、花青素,并探究其与皮肤的作用机理,表明莲花子房提取物具有较强的还原能力、清除自由基的能力。通过探究莲花子房提取物对人体成纤维细胞的作用,从一个角度反映莲花子房提取物有很好的护肤和抗衰老作用,化妆品研发工作者应该加强对莲花子房提取物的研究。
  关键字:莲花子房提取物化妆品抗衰老制备表征
  莲为睡莲科(Nymphaeaceae)莲属(Nelumbo)植物,具有多个通用名(Indian lotus,Chinese water lily,sacred lotus等)和学名(Nelumbium nelumbo, N.speciosa,N.speciosum,Nymphaea nelumbo等)[1]。莲花在我国栽培历史悠久,地域广泛,在湖南、湖北、浙江、江苏等地有广泛种植,因此我国有着丰富的莲花资源。睡莲科植物莲的临床应用已有2000多年的历史,并且多个部位可以入药,包括莲叶、莲子(种胚及莲子心)、藕、莲房和莲花(翼瓣及雄蕊)[2]。莲花经千百年来不断实践验证、筛选,作为天然物质,与化学合成物相比,添加在化妆品中对人体的副作用要小很多。莲花中含有很多功能独特和生物活性很高的化合物,这些化合物营养丰富,有一定功效。随着现代生物技术和现代分离纯化技术的发展和应用,莲花作为天然绿色化妆品添加剂的研究也越来越受到人们的关注。
  1莲花的药用概述
  明代李时珍继承和弘扬前人对莲花药用的记载,用7000字将莲花的药用价值编入《本草纲目》,对莲花各部器官的药物功能、临床处方以及成功案例均有详细的记载。其中与美容养颜相关的是莲蕊须(即雄蕊),它的气味甘、涩、温,无毒,主治:清心通肾、固精气、乌须发、悦颜色、益血、止血崩、吐血;莲花(即花瓣)气味苦、甘、温,无毒,有“镇心、益色、驻颜、身轻”之效[3]。在临床应用中,莲有多个部位入药,包括莲叶、莲子(种胚及莲子心)、藕、莲房和莲花(翼瓣及雄蕊),不同部位药用价值并不完全相同[4]。
  当代医学研究表明,莲花的药用价值部位主要是翼瓣及雄蕊和胚珠中。主要化学成分为黄酮类物质,包括黄酮醇类和花青素类。另外还有一些其他结构的化合物,如adenine、myinositol、arbutin、β-sitosterol glucopyranoside等[4]。药理研究表明,莲须具有增强子宫平滑肌收缩、镇痛的作用,对女性子宫保养有很好的作用。黄酮类化合物广泛存在于植物体内,多数与糖结合成为黄酮甙类。过去黄酮类化合物限于用作染料。后来发现,不同的黄酮有不同的生理功能[5]。从莲须中分离到的一些黄酮类化合物具清除自由基抗衰老的能力[6]。
  莲花子房中胚珠是雌配子的载体,是莲子的前身,在莲花有性生殖过程中起着重要的作用。胚珠携带大量的遗传物质和营养物质为生命的孕育做充分的准备[7]。本实验选取莲花子房提取物,对其成分和功效进行分析。
  2莲花子房提取物的提取
  本实验所用提取物来自于莲花的子房,提取工艺为:首先将莲花、萃取剂和水混合后进行粉碎,得到莲花浆状物,然后将所述莲花浆状物在萃取剂中进行萃取,得到萃取液,最后将所述萃取液依次经过过滤、脱盐、脱色和灭菌处理后,萃取清液即为本实验材料。
  3莲花子房提取物的成分分析
  本实验主要采用快速溶剂萃取仪(APLE-1000/2000/3000)进行莲花子房提取物的前处理。快速溶剂萃取法是一项全新的样品前处理技术,通过升高温度与压力结合使用水、有机溶剂,可快速、有效地从基体中萃取待测物。仅需10min~20min即可完成,并且萃取效率高,24组萃取同时进行,对于莲花子房提取物的营养物质可以一次完成萃取[8]。
  对上述经快速溶剂萃取法萃取分离的莲花子房提取物的营养物质进行定性分析,本实验主要采用GC-MS和高效液相色谱法来测定。
  其中之一的GC-MS的条件为:进样口温度240℃,柱温采用程序升温,初温140℃,保持3min后以3℃/min速度升至180℃,恒温1min,再以1.0℃/min升至220℃,保持7min。载气为高纯氦气,流速1.0ml/min。采用分流进样:分流比100∶1,进样量为0.2μl。质谱条件:接口温度280℃,EI离子源,电子能量70eV,离子源温度230℃,四级杆温度150℃,电子倍增器电压1500 V,质量扫描范围30~500u。
  其中之一的高效液相色谱仪的具体色谱条件为:色谱柱选用Nova-pakC18柱(3.9mm×150mm),预柱C18(3. 9mm×15mm),流动相:甲醇-0.4% 水(1∶ 1);检测波:360nm,流速:1.0mL/min,进样量:20μL,柱温:室温。
  分离分析出的物质如下表1:
  表1莲花子房提取物中分离分析出的物质
  4莲花子房提取物的抗衰老功效实验
  目前普遍接受的皮肤衰老机理和皮肤衰老的主要表现:
  1)造成皮肤衰老的因素有很多,目前主要分为自然老化和光老化[9]。自然老化由机体的内部因素引起,比如机体在代谢过程中产生自由基,自由基是一类瞬时形成的含不成对电子的原子或功能基团,普遍存在于生物系统。自由基的化学性质活泼,可攻击生物体内的DNA、蛋白质和脂类等大分子物质,造成损伤,如DNA的断裂、交联、碱基羟基化等。其种类多、数量大,是活性极高的过渡态中间产物,如O2ˉ、OH 和各类活性氧中间产物(reactive oxygen metabolite ROM)[10]。大量实验证明,体内自由基过多可使超氧化物歧化酶与抗氧化酶的活性减低,加速机体的衰老进程。因此,如何清除体内的自由基以及抗氧化能力的提高,是延缓机体的衰老的关键。   2)皮肤衰老最明显的表现是皮肤松弛、产生皱纹,皱纹的产生在很大程度上由成纤维细胞的衰老造成。成纤维细胞是皮肤真皮中的主要细胞成分,其正常的增殖、分化维系着皮肤正常的结构和生理功能,真皮衰老反映在细胞水平主要表现为成纤维细胞的衰老[11]。
  针对以上皮肤衰老的机理和主要表现,本文进行了莲花子房提取物清除自由基的实验和莲花子房提取物对人体成纤维细胞的作用探究实验。
  从图片中可以看出,添加莲花子房提取物的2、3组细胞密度均大于空白对照组。且2、3组细胞排列整齐、大小均一、胞体光滑,细胞健康。
  剩余的4、5、6、7、8组的细胞密度均大于空白对照组,具体浓度分布见图3莲花子房提取物添加量对人体成纤维细胞浓度的影响。
  (2)对72h后八组细胞浓度数据进行整理得如下折线图
  从折线图中可以看出,72h后添加莲花子房提取物的组比空白对照组的细胞浓度都高,大约相差2000CPM。说明添加莲花子房提取物对细胞分裂增长有明显促进作用,且和添加浓度有依赖关系,整体呈上升趋势。莲花子房提取物对人体成纤维细胞的活性和健康有促进作用。
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