HPLC法测定溃疡宁片中盐酸普鲁卡因的含量
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作者: 章春宇 商量
摘 要：目的 采用高效液相色谱法测定溃疡宁片中盐酸普鲁卡因的含量。方法 色谱柱Luna C18（4.6×250 mm，5μ）；流动相：流动相为甲醇-0.4%磷酸与0.4%三乙胺混合溶液（13：87）；检测波长为292 nm。结果 盐酸普鲁卡因进样量在0.0364μg～0.32976μg范围内峰面积积分值与进样量呈良好的线性关系（r=0.99998），平均加样回收率98.9%，RSD=0.25%（n=6）。结论 该方法易于操作，结果准确，重现性良好，可用于溃疡宁片的质量控制。
关键词：高效液相色谱法 溃疡宁片 盐酸普鲁卡因
中图分类号：R927 文献标识码：A 文章编号：1673-9795（2014）03（b）-0058-02
溃疡宁片严格遵守了国家卫生部药品标准中药成方制剂第三册的严格规定，在此标准中只应用了三项化学反应鉴别，没有掺杂主要成分的含量测定，它是一种复方型制剂，主要的构成由甘草浸膏、维生素U、海螵蛸、氢氯噻嗪、硫酸阿托品、盐酸普鲁卡因6味药材组成，其中盐酸普鲁卡因为化学药，具有麻醉止痛作用，为确保用药安全有效，应严格控制其质量，故参照中国药典及相关文献[1～2]，以盐酸普鲁卡因为指标，进行了严格的含量测定，这样有利于溃疡宁质量的控制，不仅该方法效果良好，还具有灵敏性和准确性。
1 仪器与试药
普析T-1901紫外可见分光光度计； Agilent1200 series高效液相色谱仪；试剂：甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯；盐酸普鲁卡因对照品，批号为100424-200301，样品由吉林天光制药有限公司所生产，由中国药品生物制品检定所购入。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Luna C18（4.6×250 mm，5μ）；流动相为甲醇-0.4%磷酸与0.4%三乙胺混合溶液（磷酸4 ml，三乙胺4 ml，加水至1000 ml）（13：87）；检测波长为292 nm；柱温35℃；流速：0.8/min。理论塔板数以盐酸普鲁卡因峰计算，不应低于3000。
2.2 溶液的制备
（1）对照品溶液。
取盐酸普鲁卡因对照品适量，精密称定，加流动相制成每l ml含40 μg的溶液，即得。
（2）供试品溶液。
取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，取0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率为250 W，频率为50 Hz）30 min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 ml，置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 阴性干扰试验
按正文方法测定，原处方工艺制成不含盐酸普鲁卡因的阴性对照样品，结果阴性对照色谱中，在与盐酸普鲁卡因色谱峰相应保留时间处，无干扰峰出现，溶剂色谱峰亦无干扰，其表现见图1。
2.4 线性关系考察
精密称取盐酸普鲁卡因对照品适量，加甲醇-0.4%磷酸与0.4%三乙胺混合溶液（13：87）制成每1 ml含36.64μg的溶液，精密吸取上述溶液1、3、5、7、9μl，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线。测得回归方程为Y=3408.81X+3.03（r=0.99998），表明盐酸普鲁卡因进样量在0.0364～0.32976 μg范围内呈良好的线性关系
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，（批号：20100601）10 μl，分别在0、3、6、8.5小时，照正文方法测定，按盐酸普鲁卡因峰面积计算，RSD为0.55%，结果无显著变化，说明供试品溶液稳定。
2.6 精密度试验
取同一供试品溶液（批号：20100601），连续进样6次，测得峰面积积分值RSD为0.21结果表明，此方法采用的仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一供试品（批号：20100601）6份，依法独立测定，结果盐酸普鲁卡因平均含量为94.9 mg/g，RSD0.72%。
2.8 回收率试验
取经同法测定的已知含量的样品（批号：20100601，含盐酸普鲁卡因94.90 mg/g）六份，每份0.05 g，精密称定，精密加入盐酸普鲁卡因对照品溶液（每1ml含盐酸普鲁卡因94.90μg）50 ml，依法测定，计算回收率，测定结果见表1。
3 样品含量测定
分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定样品三批，结果每片。样品测定结果见表2。
4 讨论
4.1 测定波长的选择
取盐酸普鲁卡因对照品适量，加50%乙醇制成每1 ml含10 μg的溶液，在200～400 nm波长处进行扫描，经结果表明在292 nm有最大吸收，故选择292 nm作为测定波长。
4.2 色谱柱的选择
本试验考察了Diamansil C18（4.6×250 mm，5μm）柱；Venusil C18（4.6×250 mm，5μ）柱； LunaC18（250×4.6 mm，5μ）柱，三种色谱柱在正文色谱条件下，均可以得到分离良好的色谱峰，含量结果分别为95.78mg/g、94.25 mg/g、94.90 mg/g，RSD为0.81%，从中可以看出该药品对色谱柱无特殊选择性，且具有良好的耐用性。
参考文献
[1] 中国药典[S].2010.
[2] 陈志华，覃志高.覃宏林等盐酸普鲁卡因含量测定近10年研究概况[J].中国医药指南，2010，10（24）：63.
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