采用HPLC法测定三七中3种皂苷的含量
来源:用户上传
作者: 齐红梅
摘要：目的 研究探讨采用高效液相色谱仪测定复三七中三种皂苷含量的临床应用价值。方法 以三七总皂苷分散片为研究对象，对其中的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1含量进行检测。结果 不同批次三七总皂苷分散片中，人参皂苷Rb1含量在17.91 mg/片～18.23 mg/片，人参皂苷Rg1含量在17.12 mg/片～17.65 mg/片，三七皂苷R1含量在4.73 mg/片～4.82 mg/片。结论 通过高效液相色谱仪（HPLC）可以同时对三七中不同皂苷的含量进行准确定量，且具有操作简单、快捷的优点，重复性好，稳定性强，可以用于三七相关药物质量控制的过程中，值得推广应用。
关键词：高效液相色谱；三七；皂苷；含量
三七是我国传统医学中最珍贵的药材之一，具有止血、补血、活血、抗血栓等多种功效[1]。本文以三七总皂苷分散片为研究对象，通过高效液相色谱法对三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1等三种皂苷含量进行测定，并对其具体操作方法及检测结果进行分析。具体报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料 仪器：选择日本岛津仪器生产的LC-10A高效液相色谱仪（组成部分有微体积串联双柱塞、柱温箱、紫外可见双波长检测器 、超声波提取器HS 3120、中文化LC工作站）。
试剂：对照品人参皂苷Rb1（批号：110703-201420）、对照品人参皂苷Rg1 （批号：110703-201421）、对照品三七皂苷R1 （批号：110703-201423）；三七总皂苷分散片（三七总皂苷含量为50 mg/片）；洗脱剂乙腈（色谱纯）、甲醇（分析纯）、水（超纯水）。其中，对照品皂苷购自中国食品药品检定研究院，三七总皂苷分散片为自制，洗脱剂购自津市科密欧化学试剂开发中心。
1.2方法 分别取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品进行精密称定，并使用浓度为20%的乙腈水溶液对其进行溶解，并制成1 ml的混合溶液（其中人参皂苷Rb1含量为0.5 mg、人参皂苷Rg1含量为0.4 mg、三七皂苷R1含量为0.12 m）。同时取两片三七总皂苷分散片研细，精密称取0.3 g，用50 ml甲醇溶解，再次称定经超声处理后，冷却，称定并使用甲醇将重量补足，以微孔滤膜进行滤过处理，精密量取25 ml续滤液，待其彻底挥干之后，在残渣中加入甲醇溶液进行充分溶解。溶解结束之后转移至大小合适的容量瓶中，稀释混匀，再次进行滤过处理，获得的续滤液即为供试品溶液。
色谱柱选择规格为4.6 mm×250 mm，5 μm的Inertsil-Cl8柱，流动相选择乙腈-水溶液（前28 min和40 min后乙腈与水的比例为19：81，28～40 min乙腈与水的比例为47：53），在流速1.0 ml/min、柱温为35℃条件下，波长203 nm下对三种不同皂苷的含量进行检测。对照品溶液、供试品溶液的进样量分别为10 μL和3 μL。同时，在不同条件下分别对检测时的线性关系、精密度、样品溶液稳定性、回收率等进行考察。
2结果
观察高效液相色谱法检测获得的色谱图，列出峰面积（A）与进样量（C）的线性回归方程，可见人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的线性范围分别是0.4～8 μg、0.5～10 μg、0.12～2.4 μg，峰面积与进样量之间的线性关系良好，r分别是0.999963、0.999971、0.999939，P<0.05。精密度试验结果人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD 分别为0.23%、0.31%、0.33%，稳定性试验RSD 分别为0.70%、0.80%、0.61%，精密度和稳定性均良好，平均回收率分别为99.01%和98.24%、98.83%。
对三个不同批次的三种皂苷水平进行测定，可见20140901批次每片三七总皂苷分散片中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为18.23 mg、17.33 mg、4.73 mg，总含量为40.29 mg；20140902批次中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为18.01 mg、17.12 mg、4.82 mg，总含量为39.95 mg；20140903批次中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为17.91 mg、17.65 mg、4.77 mg，总含量为40.33 mg。
3讨论
随着现代提取与纯化技术的不断提高，三七的化学成分研究也获得了长足的进展，三七皂苷、黄酮苷、三七素、氨基酸、挥发油、糖类、其他微量元素等是三七的主要化学成分[2]，其中，皂苷作为最重要的成分，包含了总皂苷（以人参皂苷Rb1、 Rg1等为主，共计七种）和三七皂苷（以三七皂苷R1为主，共计二十余种）皂苷成分[3]，以皂苷为主要有效原料的药物也涉及到血塞通片等不同类型。
本文采用了高效液相色谱仪分别对三七总皂苷分散片中三种皂苷的含量进行测定，经线性关系、精密度、稳定性、回收率等系统性评估后，可见高效液相色谱法的检测效果良好，基于该情况，对三个不同批次的三七总皂苷分散片样品含量进行测定，发现人参皂苷Rb1含量在17.91 mg/片～18.23 mg/片，人参皂苷Rg1含量在17.12 mg/片～17.65 mg/片，三七皂苷R1含量在4.73 mg/片～4.82 mg/片，无论是淡中皂苷含量还是三种总量，均符合国家药品监督管理局标准中关于三七总皂苷含量的规定，且操作简单、快捷的优点，重复性好，稳定性强，可以用于三七总皂苷分散片质量控制的过程中，也可在其他三七相关药物质量控制过程在推广应用。
参考文献：
[1]刘庆波.中药三七微丸的临床药学探讨[J].中国继续医学教育，2015，7（33）：210-212.
[2]张卫敏.三七总皂苷缓释片治疗心脑血管疾病患者的临床效果[J].中国继续医学教育，2015，7（15）：182-184.
[3]徐家翠.浅谈中药三七及其有效成分对血液系统的药理活性研究概况[J].中国继续医学教育，2015，7（1）：184-185.编辑/丁一
转载注明来源:https://www.xzbu.com/1/view-7758436.htm
