鹿骨胶原肽粉的制备工艺研究

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　　摘要：以鹿骨为原料进行脱脂、脱钙，提取鹿骨胶，然后采用酶解法制备鹿骨胶原肽，并对水解物进行超滤，最后测定其抗氧化性质。结果表明：此工艺制备出的鹿骨胶原肽具有较好的抗氧化性，其羟基自由基清除率可达72.64%，ABTS自由基清除率可达91.09%，超氧阴离子自由基清除率可达31.29%，还原力最高可达0.374，具有极大的应用价值。
　　关键词：鹿骨胶原肽；评价；制备；纯化
　　中图分类号： TQ464.7 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.21.062
　　鹿骨是鹿的骨骼，含有大量胶原蛋白、磷脂质、磷蛋白、维生素，还含有多种矿物质元素。胶原多肽是胶原或明胶经过蛋白酶降解处理得到的产物，与明胶相比具有较强的水溶性，易被人体吸收[1]。胶原多肽具有较多的生理功能，例如抗高血压、预防与治疗骨关节炎和骨质疏松、胃溃疡等疾病、抗衰老和抗氧化等。
　　1材料与方法
　　1.1原材料
　　鹿骨，购自长春市双阳区鹿场。
　　1.2工艺流程
　　原料挑选→烘干→粉碎→脱脂→脱钙→去杂蛋白→提取鹿骨胶→酶解→离心→烘干→测定
　　1.2.1鹿骨脱脂处理方法 砸碎的骨料经过水洗后，部分脂肪被流水洗掉，残余的脂肪用石油醚脱去。将骨粒在石油醚中浸泡24小时。
　　1.2.2鹿骨脱钙处理方法 称取一定量经粉碎的鹿骨，加入浓度为4%的盐酸（盐酸体积∶骨粒质量为4∶1），每6小时换一次盐酸，浸泡数日。
　　1.2.3鹿骨去除杂蛋白处理方法 先用 0.2%NaOH 溶液后用 5.0%NaCl 溶液各浸洗脱脂脱钙后的鹿骨粉 3小时。进行此处理不仅可以有效去除鹿骨中的非胶原蛋白，同时 NaOH 还可以与鹿骨中的脂肪发生皂化反应，进一步去掉部分油脂，更加有利于胶原蛋白的提取。
　　1.2.4鹿骨胶的提取 称取脱钙骨，利用水提法在95℃下提取3～4小时。提取后5000转/分钟离心30分钟，将提取液冷冻干燥。
　　1.3酶解制备鹿骨胶原肽
　　取鹿骨胶加入蒸馏水配成一定底物浓度的溶液，90℃下水浴10分钟，破坏蛋白结构。冷却后用2摩尔/升 NaOH调节pH，加入碱性蛋白酶，在酶解过程中用电位滴定计滴加碱液维持溶液pH值恒定。酶解一段时间后，溶液经90℃灭酶20分钟 ，冷却至室温，用0.5摩尔/升 HCl溶液调节pH至7.0，5000转/分钟离心10分钟取上清液，冷冻干燥后得到鹿骨胶原肽。
　　1.4鹿骨胶原肽的分离纯化
　　将得到的鹿骨胶原肽粗提物，溶于蒸馏水中配成2毫克/毫升的溶液，分别使用膜孔径10000NMWC和3000NMWC的中空纤维素柱，把粗提物按分子量的大小分成3种组分，收集后冷冻干燥成粉。
　　1.5抗氧化性质的测定
　　1.5.1 羟基自由基清除能力的测定 参照Amarowicz的方法[2]。
　　1.5.2 ABTS自由基清除能力的测定 参照Kong的方法[3] 。
　　1.5.3超氧阴离子自由基清除能力的测定 参照Li的方法[4] 。
　　1.5.4还原能力的测定 参照Lin[5]的方法。
　　2结果与分析
　　为了比较超滤得到的3种组分的抗氧化活性，我们将3种组分冻干后，配成12毫克/毫升的溶液，在等浓度下测定其抗氧化活性。由于3种组分对ABTS自由基清除效果良好，在12毫克/毫升时，都达到100%，所以改为在4毫克/毫升条件下测定。综合考虑，我们认为组分A2的抗氧化活性高于其他两个组分（见表1）。
　　表1超滤组分抗氧化活性
　　参考文献
　　[1] 王晨.牛骨胶原多肽的制备及清除自由基活性研究[D].广州：华南理工大学，2010.
　　[2] AMAROWICZ R， NACZK M， SHAHIDI F.Antioxidant
　　activity of various fractions of non-tannin phenolics of canola hulls [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2000， 48（07）：2755-2759.
　　[3] KONG B，XIONG Y L. Antioxidant activity of zein
　　hydrolysates in a liposome system and the possible mode of action [J].Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2006， 54（16）： 6059-6068.
　　[4] LI Y，JIANG B，ZHANG T，et al.Antioxidant and freeradical -scavenging activities of chickpea protein hydrolysate （CPH） [J]. Food Chemistry，2008，106（02）：444-450.
　　[5] LIN S， JIN Y， LIU M， et al. Research on the preparation of antioxidant peptides derived from egg white with assisting of high-intensity pulsed electric field [J]. Food Chemistry， 2013，139（01）：300-306.
　　作者简介：刘春雷，长春科技学院，讲师，在读博士生，研究方向：农产品加工与贮藏工程。
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