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食品微生物检验培养基的制备与使用

作者:未知

  摘要:目前食品安全问题是社会关注的焦点,所以对食品的微生物检验就成为了重要技术检测手段之一。而培养基又是实验检测中最为重要的环节。本文针对食品微生物检测中培养基的制备和使用进行分析,使培养基的使用能够更加的精确,最大程度的避免因实验检测所带来的偏差,提高检测质量。
  关键词:培养基 制备 使用
  引言:
  培养基在制备的过程中要从水化、灭菌、使用等方面进行入手,以求达到控制其质量的目的,本文以此为研究对象,希望能够提高食品微生物的检验和培养工作水平。
  一、培养基的制备及水化
  1.配制顺序
  培养基的制备需要严格的处方进行控制,并且针对不同用途的培养基要选择不同的培育方法。培养基的处方中大部分为生物制品,会由同一家生产厂家的不同批次进行生产,这就造成了生产质量上的差别,所以对于此种方法,要根据差异性进行原料方面的质量控制,并且详细记录所有的产品成分和特征,需要注意的是,制备完成的培养基要根据用途和顺序进行分装,保证在进入灭菌前完成互溶。
  2.水化
  培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有金属离子混入培养基中,影响微生物的生长;并防止部分或新玻璃瓶在加热过程中会释出碱性物质,使培养基的pH改变;容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上,避免在加热溶解过程中培养基溢出。
  在用水的选择上必须保证水质中没有抑菌和影响微生物生长的物质,例如曾经受到过污染的水源在过滤净化后还是含有很多微生物抑制菌。同时要避免使用自来水,自来水中的氯是主要的杀菌物质,所以在使用时要先在培养基水化中加入一半的水,待摇匀后再加入其他的水,并且将容器壁上进行清理,使附着的培养基粉被冲掉,减少浪费。
  3.培养基的称量
  在承重的过程中亚使用标准的计量器具,要避免出现交叉污染的问题,降低检验质量,在称重中要对自身进行保护,避免吸入过量粉尘,尤其是培养基在吸入水汽后会出现培养基酸化,这样就改变了PH值,如果在培养基制备的过程中能够控制好湿度,要将其控制达到最低,干粉培养基应严格按照生产商提供的有关说明进行准确配制。
  二、培养基的溶解及灭菌
  1.溶解
  培养基在进行分装前,要根据不同的用量进行水加热,例如使用琼脂的粉末状培养基,可以先在加热前进行浸泡。在加热的过程中要煮沸培养基,并且使用小火加热,这样不仅能起到加热搅拌的作用,同时能够避免出现焦化、烧糊、蒸汽溢出的现象。
  2.培养基的灭菌
  一般培养基采用湿热灭菌,即高压蒸汽灭菌 。含糖或特殊培养基,按照生产厂家提供的说明灭菌。配置完成的培养基必须立即进行灭菌,在培养菌中会存在大量的微生物,这些微生物在条件允许的状况下就能够滋生,这样不仅能改变培养基的酸碱性,同时对培养基本事还起到一定的毒化作用。如果配制体积比较多,要注意溶解充分、均匀,分装时要注明培养基名称、配制时间等。高温可破坏培养基的营养成分,特别是氨基酸、维生素和糖,还会使琼脂的凝胶强度下降。在高温情况下,某些营养成分还可能由于受热而相互发生反应,如磷酸盐与碳酸钙反应形成不溶于水的磷酸盐,使可溶性磷酸盐的浓度大为降低,并易形成沉淀;还原糖与氨基酸、肽、蛋白质等发生化学反应,形成5 -羟甲基糠醛和类黑精;高温反应时可能形成有毒物质,影响微生物生长。湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间,并且不可重复高温灭菌。
  3.灭菌因素的影响
  在进行灭菌的过程中通常使用灭菌锅来完成,需要注意的是保证锅内足够的空间,锅内物品要均匀堆放,避免出现死角,并且要提高每个单位体积中的内容物。一般的内容物在0.2L以下才能使热传递的效果达到最好。在使用前对锅内的冷空气进行排放,如果不能排净冷空气,就会影响检测温度的设计,同时要对灭菌锅的压力表进行测定,在测定完成后可以对其灭菌效果进行检验,并且选择合适的生物指示菌法、化学变色纸片等来完成验证。
  三、培养基的接种与培养
  1.培养基的接种
  在使用平板进行接种的过程中要保证表面不能出现明显的水珠,因为潮湿的水珠容易引起菌落的扩散,并且对其计数造成影响,同时菌落的整体性容易被破坏,使其出现较多的菌种共存的现象,减低其纯度。在培养基的温度控制中要尽量保证平板的潮湿性,要保证培养环境在25℃-50℃范围之内,直到水滴全部消失。同时注意最高温度的控制,避免出现过热的现状。培养基在保存的问题上要保证室温能够进行合理的回温,要在检查前对菌落的污染物进行控制,当菌落在形成培养基后,要观察培养基是否出现干裂、变色、脱水的问题,一旦出现异常就要终止实验更换新的培养基。
  2.接种物的培养
  琼脂板的最大叠加高度不得超过6个,并且空间之间的流通性要进行合理的保持,要使平板温度最大程度的达到设置温度。例如将大量平板堆积到厌氧罐中时,空气流通性会受到一定的限制,并且导致罐内的湿度被损失,当水含量丧失达到15%时没回对培养基中的微生物造成生长延缓等问题,这时就要调整培养基数量和培养箱、平板位置、培养基湿度等,并在罐中放入适当的水容器,来平衡箱内的湿度。
  四、培养基的质量控制及储存
  1.培养基的物理学控制
  培养基原料要处于一个密封干燥的环境中,这样才能使培养基的干燥性和敏感度得到保证,在制备培养基的过程中,要对不同的培养基进行颜色标注,一般的培养基为无浑浊、无沉淀状态、而被溶解、凝固的培养基要在检测过程中控制器温度,例如培养基的浓度温度不得高于40℃。这样就有利于低温平板的倾注,使微生物的热损伤大大降低。
  2.培养基的生物学控制
  培养基在经过灭菌后要进行无菌检测,这样才能保证试验样本的合格率,常用的检测办法由菌落大小及相应生理生化特征检测、非目标菌的选择因子测试;并且要能够对相应的菌株标准进行鉴定,使试验结果符合检测要求
  3.培养基的贮存
  培养基在储存方面必须保证干燥使用,这就要求在储存中要尽量的保证干燥,要将其放在阴凉通风的位置,并且不能让阳光直接照射。尤其在使用中要避免出现吸潮反应,如果发现出现霉变、结块等的培养基不能继续进行使用,可以摊平进行储存。在存储中要尽可能的保证其成分,可以使用冰箱进行低温密封保存,以降低培养基中有效成分和水分的挥发,一般情况下培养基中的有效成分和水分会在一周内出现挥发,所以为了保证合格率就要使用不超过1星期的特定型培养基,要保证在规定的使用时间内进行培养利用,并且提高有效期和质量。
  结束语
  培养基在微生物研究中是一个实验检测的基础,并且对于检测的可靠性和成功率有着十分重要的影响作用。在进行微生物培养中要注意环节中的质量问题,不能使检验结果出现科学性的差异,所以在进行培养基质量控制的过程中,要将制备环节放在重点,对于培养基的培育进行最为适当的质量控制,并且认真的做好其质量控制工作,不断完善培养基的质量控制水平,使培养基在食品微生物研究中能够被更好的应用。
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论文来源:《商品与质量·学术观察》 2014年6期
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