注射用醋酸艾塞那肽缓释微球的制备及体外释药研究

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　　[摘要] 目的 制备注射用醋酸艾塞那肽缓释微球，以达到缓释作用，从而减少用药次数。 方法 以聚乳酸-羟基乙酸为载体，羧甲基纤维素钠水溶液为分散介质，乙酸乙酯为有机溶剂，甘露醇为保护剂，通过复乳-液中干燥法和冷冻干燥法制备注射用醋酸艾塞那肽缓释微球。以微球收率、粒径、包封率为指标，采用正交试验法来优化微球的处方和制备工艺。采用透析法考察含药微球的体外释药特性，计算微球累积释药百分率，绘制体外释药曲线。 结果 通过正交设计筛选出制备注射用醋酸艾塞那肽缓释微球的处方和制备工艺，载药量为21.3%，包封率为94.6%，Zeta电位为（-29.3±1.51）mV，含药缓释微球的体外释药过程符合Higuchi方程。 结论 制备的注射用醋酸艾塞那肽缓释微球具有30 d的缓释效果。
　　[关键词] 醋酸艾塞那肽；缓释微球；体外释放
　　[中图分类号] R943.41 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）09（c）-0010-04
　　Study on the preparation and release in vitro of Exenatide Acetate Sustained-releasing Microspheres for injection
　　ZHI Qin LI Xin-yu YAO Zhi-yong
　　Shenzhen JYMed Technology Co.，Ltd.，Shenzhen 518057，China
　　[Abstract] Objective To prepare Exenatide Acetate Sustained-release Microspheres to realize the sustained-release effect and reduce the frequency of drug use. Methods Exenatide Acetate Sustained-release Microspheres were prepared by the method of double-elusion drying in liquid with PLGA as the carrier，ethyl acetate as the organic solvent，CMC-Na water solution as the dispersion medium and mannitol as the diluents and the method of freezing drying.The prescription and preparation process were optimized by orthogonal test with particle size，yield and encapsulation as the investigating index.The property of releasing drug in vitro was investigated by the method of dialysis.The cumulative drug-releasing percentage of Sustained-release Microspheres was calculated and the drug-releasing curve was drawn. Results The prescription and preparation process were screened according to the orthogonal test with a drug loading capacity of 21.3%，an encapsulation efficiency of 94.6% and a Zeta potential of （-29.3±1.51） mV.The releasing profile in vitro was in accordance with Higuchi equation. Conclusion The Exenatide Acetate Sustained-release Microspheres for injection have releasing effect of 30 days.
　　[Key words] Exenatide Acetate；Sustained-release Microspheres；Release in vitro
　　艾塞那肽最先是从大毒蜥的唾液分泌物中分离出来的含有39个氨基酸的天然肠促胰岛素类似物，能模拟胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的作用，从而达到控制血糖的效果。人工合成的艾塞那肽是首个获准上市的肠促胰岛素类似物，体外研究显示，该化合物可以结合、活化人体GLP-1受体，通过cAMP或其他细胞内信号传导机制来增加葡萄糖依赖性胰岛素的合成或增加胰岛素在体内的分泌，临床上主要用于改善二甲双胍和磺酰脲类药物治疗不理想的2型糖尿病患者的血糖控制，还具有心血管保护作用[1-6]。聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）是一种高分子材料，它由乳酸和羟基乙酸聚合而成，具有生物相容性的，可在体内降解[7-9]。在人体，艾塞那肽半衰期较短，为延长其作用时间，减少患者的用药次数，降低血药浓度峰谷波动，增加患者的顺应性，本研究将该药物制备成缓释微球，使之具有缓释效果[10]，并考察其包封率、载药量和体外释药特性。
　　1 仪器与材料
　　1.1 仪器
　　FJ200-T定时高速分散均质搅拌机（深圳市鼎鑫宜实验设备有限公司），XS64电子天平（十万分之一，梅特勒-托利多），e2695高效液相色谱仪（2998型紫外检测器，美国Waters公司），Perkinelmer Clarus 500型气相色谱仪（PE公司），S-205D超声波脆碎仪（Harvard Apparatus），LG-J型冷冻干燥机（北京四环科学仪器厂），JSM-5600LV型扫描电子显微镜（SEM）（日本电子光学公司），高灵敏度Zeta电位及激光粒度分析仪[Zeta phase analysis light scattering（PALS）型，美国布鲁克海文仪器公司]。 　　3 讨论
　　缓释微球的载体材料可直接影响微球的各项性能。近几年，具有生物可降解特性的高分子材料受到高度重视，而在这类生物可降解材料中，聚酯类是至今为止被研究最多且应用最为广泛的高分子材料，它们大多数是由羟基酸或其内酯聚合而成。在这个过程中，羟基乙酸和乳酸为常用的羟基酸，具体包括聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物、聚3-羟基丁酸酯、丙交酯-乙交酯共聚物、聚乳酸等，它们均具有成膜性及成球性好、无毒、化学稳定性高等特点，另外还可注射给药。
　　乳化-溶剂挥发法是制备PLGA微球常用方法之一。采用复乳-液中干燥法制备缓释微球，在制备过程中对温度要求低，可减少由于高温导致的PLGA降解，且采用此方法对遇热不稳定的蛋白质以及多肽类药物可起到一定的保护作用。
　　PLGA的浓度、搅拌速度、投药量、油水比例、温度、乳化剂浓度等因素均可影响微球的成形性。在PLGA对缓释微球影响的考察过程中发现，微球的包封率随着PLGA质量分数的增大而增大，PLGA质量分数对微球粒径也有同样的影响；另外，粒径虽然受温度的影响不大，但温度却可以较明显地影响微球的包封率，因此为了提高包封率，可以适当提高温度，但是考虑到主药的稳定性问题，温度不可过高。
　　载体材料PLGA在体内降解的机制为本体溶蚀，这种降解机制导致基质内部聚合物的降解速度等于甚至快于基质表面的聚合物，除此之外，PLGA的分子量、聚合单体摩尔比以及分布情况也是影响其降解和缓释性能的主要因素。通常，随着PLGA中羟基酸比例的增加，微球的溶蚀速度会加快，微球中药物的释放速度也加快，尤其是当乳酸与羟基乙酸的摩尔比例为50∶50时，PLGA的降解速度达到最快；在分子量分布范围较窄的PLGA中，较少的羧基端基可用于自身催化，因此聚合物的降解速度也相对较缓慢，反之，分子量分布范围较宽的PLGA则降解较快。
　　缓释微球中，药物在微球中的所处部位和载体的性质很大程度上决定药物的释放特性。药物既可以被吸附在微球的表面也可以被完全包封在微球中，还可以分布在表层和空隙中，不同部位的药物释放速度不同，未被完全包封于微球中的药物，可以较快地释放出来，无需待载体材料降解之后才从微球中释放出来。本方法制备的载药缓释微球，可实现持续、稳定释放药物，其体外释放结果符合Higuchi方程。其释放期长达30 d，从而减少用药次数。
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　　（收稿日期：2015-05-22 本文编辑：卫 轲）
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