肝癌组织LncRNATINCR表达水平对术后复发的影响

来源:用户上传      作者:秦连进 唐成武

　　[摘要] 目的 探討肝癌组织中LncRNA TINCR表达水平对术后复发的影响。 方法 回顾性分析2014年7月～2016年7月间在我院接受手术治疗的132例肝细胞癌患者的临床资料。RT-PCR 法检测肝癌标本内LncRNA TINCR表达水平，采用ROC曲线和Kaplan-Meier法分析LncRNA TINCR表达水平对肝癌术后长期生存的影响。 结果 肝癌组织中LncRNA TINCR表达水平对术后复发预测的曲线下面积（AUC）为 0.818，特异度为72.73%，敏感度为83.12%，最佳判读值为1.82（P<0.0001）。根据ROC曲线分析结果，将肝癌组织LncRNA TINCR相对表达水平>1.82的81例（61.36%）患者纳入高表达组，而肝癌组织LncRNA TINCR相对表达水平≤1.82的51例（38.64%）患者纳入低表达组。Kaplan-Meier法生存分析发现高表达组术后3年内有65例患者出现复发，3年无瘤生存率为19.75%（16/81）;低表达组术后3年内有12例患者出现复发，3年无瘤生存率为76.47%（39/51），低表达组3年无瘤生存率明显高于高表达组（P<0.0001），两组间死亡风险比：5.5717，95%CI：3.5642～8.7100。 结论 肝癌组织LncRNA TINCR表达水平与肝癌术后复发显著相关，LncRNA TINCR表达水平升高则预示术后较高的复发率。
　　[关键词] 肝细胞癌;肝切除;复发;LncRNA TINCR
　　[中图分类号] R735.7          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）26-0034-04
　　[Abstract] Objective To explore the effect of LncRNA TINCR expression level in liver cancer tissue on postoperative recurrence. Methods  The clinical data of 132 patients with hepatocellular carcinoma who underwent surgery in our hospital from July 2014 to July 2016 were retrospectively analyzed. RT-PCR method was used to detect the expression level of LncRNA TINCR in liver cancer specimens. ROC curve and Kaplan-Meier method were used to analyze the effect of LncRNA TINCR expression level on long-term survival of liver cancer after operation. Results The area under the curve（AUC） of LncRNA TINCR expression level of liver cancer tissues for postoperative recurrence prediction was 0.818， specificity was 72.73%， sensitivity was 83.12%， and the best interpretation value was 1.82（P<0.0001）. According to the results of ROC curve analysis， 81（61.36%） patients with a relative expression level of LncRNA TINCR greater than 1.82 were included in the high expression group， while 51（38.64%） patients with a relative expression level of LncRNA TINCR less than 1.82 were included in the low expression group. Kaplan-Meier method survival analysis found that 65 patients in the high expression group had recurrence within 3 years after operation， and the 3-year tumor-free survival rate was 19.75%（16/81）. Twelve patients in the low expression group had recurrence within 3 years after operation， and the 3-year tumor-free survival rate was 76.47%（39/51）. The 3-year tumor-free survival rate of the low expression group was significantly higher than that of the high expression group（P<0.0001）， The mortality risk ratio between the two groups was 5.5717， with 95% confidence interval of 3.5642-8.7100. Conclusion The expression level of LncRNA TINCR in liver cancer tissue is significantly correlated with the recurrence of liver cancer after surgery， and the increased expression level of LncRNA TINCR indicates a higher probability of postoperative recurrence. 　　[Key words] Hepatocellular carcinoma; Hepatectomy; Recurrence; LncRNA TINCR
　　肝细胞癌（Hepatocellular cancer，HCC）目前仍是严重危害国民健康的重大公共卫生难题[1-3]，全世界超过一半的新发HCC病例和死亡病例发生在我国。虽然针对HCC的治疗有了长足的发展，但是根治手术仍是治疗HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于我国大部分HCC发现时已是中晚期，甚至已侵犯胆道及门脉系统，因此术后复发率高，总体预后很不理想[5-6]。目前亟需进一步探讨引起HCC术后复发易感因素和靶点，从根本上阻断HCC术后复发的通路，达到改善预后的目的。终末分化诱导非编码RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是从人类分化的体细胞中分离得到的一个长3.7 kb 的LncRNA转录本[7]。研究发现LncRNA TINCR在肝细胞癌、结直肠癌、胃癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等恶性肿瘤中出现表达异常，并与多种分子相互作用而影响基因转录及转录后过程，可加速肿瘤的发展[8-11]。本研究旨在探讨肝细胞癌组织中LncRNA TINCR表达水平对HCC术后复发的影响，现报道如下。
　　
　　1 材料与方法
　　1.1 病例选择
　　回顾性研究 2014年7月～2016年7月间在我院接受手术切除的132例HCC患者。纳入标准[12]：未接受任何抗癌治疗;非弥漫性HCC;术后随访6个月及以上;无失访情况;所有治疗经患者本人知情同意。排除标准：术前已有肝外转移;术后随访短于6个月。
　　1.2 HCC组织LncRNA TINCR相对表达量检测
　　采用Tissue RNA Kit 提取HCC组织RNA，经反转录后，用于RT-PCR 检测组织中TINCR 相对表达量，试剂盒均购自南京东极医药科技有限公司，操作过程严格参照说明书进行。TINCR 上游引物为5'-CCATCCCTCTGTAACCACCT-3'，下游引物为5'-GTTGGGTCTAGATTCCAGCA-3'，以Actin 为内参，Actin上游引物为5'-ATCATGTTTGCCTAGATCAACA-3'，下游引物为5'-CATCTCTTGCTAAGCGTCCA-3'，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。RT-PCR 程序：95℃预变性10 min;95℃ 10 s，60℃ 35 s，72℃ 30 s，40个循环;最后72℃延伸10 min。
　　1.3 随访及观察指标
　　术后半年内每月进行随访，之后每3个月1次。随访内容包括体格检查、血常规、生化及肿瘤标记物检测，如有可疑复发，需行超声、增强CT、MRI，必要时行肠镜及穿刺活检确认。一旦确认肿瘤复发，记录复发的时间及部位。无瘤生存时间定义为自手术开始直至首次发现复发、死亡（复发前）或最后一次随访（复发前）。比较两组3年无瘤生存情况。
　　1.4 统计学方法
　　所有统计均由MEDCALC 15.2软件完成，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料采用χ2检验。LncRNA TINCR表达对术后生存的预测作用采用ROC 曲线分析。Kaplan-Meier法绘制患者无瘤生存情况曲线，采用Log-rank法分析。P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 HCC组织LncRNA TINCR表达水平对术后复发的预测价值
　　将HCC组织LncRNA TINCR表达水平与术后复发情况（无复发=0，复发=1）绘制ROC曲线（图1），并计算得出曲线下面积（AUC）为 0.818，特异度为72.73%，敏感度为83.12%，最佳判读值为1.82（P<0.0001）。
　　
　　2.2 HCC组织LncRNA TINCR表达对术后复发的影响
　　将HCC组織LncRNA TINCR相对表达水平>1.82（ROC曲线所得的最佳判读值）的81例（61.36%）患者纳入高表达组，而将HCC组织LncRNA TINCR相对表达水平≤1.82的51例（38.64%）患者纳入低表达组。经比较发现两组患者的一般资料无显著性差异（P>0.05）（表1）。高表达组术后3年内有65例患者出现复发，3年无瘤生存率为19.75%（16/81）;低表达组术后3年内有12例患者死亡，3年无瘤生存率为76.47%（39/51）。Log-rank法分析生存曲线发现，低表达组3年无瘤生存率明显高于高表达组（P<0.0001），两组间复发风险比：5.5717，95%CI：3.5642～8.7100。（图2）。
　　3 讨论
　　HCC目前仍是严重危害国民健康的重大公共卫生难题[1-3]，全世界超过一半的新发HCC病例和死亡病例发生在我国。虽然针对HCC的治疗有了长足的发展，但是根治手术仍是治疗HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我国大部分HCC发现时已是中晚期，甚至已经侵犯胆道及门脉系统，因此术后复发率高，总体预后很不理想[5-6]。目前亟需进一步探究引起HCC术后复发易感因素和靶点，以改善HCC患者预后。
　　新一代的基因测序技术已经发现超过90%的人类基因组转录产生一系列非蛋白编码（非编码）RNA（ncRNA）[13-14]。长链非编码RNA（LncRNA）大于200核苷酸长度，虽然不具有蛋白质编码功能，却能显著影响生物学过程[15]。与microRNA相比，LncRNA的功能及机制尚未完全被人类掌握。然而，近年来人们对LncRNA的研究越来越深入。目前已经证实LncRNA能调节多种细胞生理活动，包括染色质修饰，基因印迹，选择性剪接，基因组重排，细胞增殖、迁移、凋亡以及核质转运等[16]。研究表明，LncRNA参与了广泛的生理及病理生理过程，通过正反馈/负反馈通路在癌症发生发展中起到促癌或抑癌基因的作用[17]。也有证据显示LncRNA与肿瘤细胞增殖、凋亡、转移和侵袭有关[18-19]。因此，LncRNA有望成为肿瘤诊断标志物及潜在的治疗靶点。 　　终末分化诱导非编码RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是从人类分化的体细胞中分离得到的一个长3.7 kb 的LncRNA转录本[20]。研究发现TINCR在肝细胞癌、结直肠癌、胃癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等表达异常，TINCR与多种分子相互作用而影响基因转录及转录后过程，可加速肿瘤的发展[8-11，21]。
　　近年来关于LncRNA TINCR 在HCC起源和进展中的作用机制及LncRNA TINCR的信号通路越来越受到关注。已有研究发现，HCV所致的肝硬化后HCC组织中LncRNA TINCR的表达较正常肝组织明显升高[22]。有学者将HCC组织中的LncRNA TINCR的表达水平与肿瘤大小、TNM分期及血管浸润进行相关性分析，结果两者相关性紧密，而进一步的生存分析发现，高表达的患者术后无瘤生存率明显低于低表达患者，从而推测LncRNA TINCR表达升高能增加肿瘤侵袭性，并能促进HCC术后进展[10]。
　　在本次研究中，HCC组织LncRNA TINCR表达水平对术后复发的ROC曲线下面积（AUC）为 0.818，特异度为72.73%，敏感度为83.12%，最佳判读值为1.82 （P<0.0001）。通过此结果，将患者分为LncRNA TINCR高表达组和LncRNA TINCR低表达组，Log-rank法分析生存曲线发现低表达组3年无瘤生存率明显优于高表达组（P<0.0001）。
　　已有研究显示，LncRNA TINCR能作为竞争性的结合microRNA（competing endogenous RNA，ceRNA）调控基因表达，其不但可活化某些蛋白编码基因表达，亦可以抑制蛋白编码基因的表达[23-25]。目前已经证实，LncRNA TINCR能通过竞争性结合miR-375，从而下调miR-375表达，起到促进肿瘤进展的作用，而大量研究表明miR-375在HCC中发挥抑制肿瘤的功能[26-27]。因此，可以推测通过降低LncRNA TINCR水平能增加miR-375表达，从而抑制HCC进展，能显著改善HCC预后。
　　此外，有学者发现LncRNA TINCR， ROCK1（Rho相关蛋白激酶1）和 miR-214-5p三者间存在交互影响。ROCK1在多种肿瘤中过度表达，并能通过调节癌细胞的增殖、侵袭和迁移等行为来促进肿瘤发展，而miR-214-5p可通过直接靶向下调ROCK1表达，起到抑制肿瘤增殖的作用[28]。有研究发现，HCC组织中既有ROCK1的上调又有miR-214-5p的下调。因此推测LncRNA TINCR可能通过吸附作用下调miR-214-5p在HCC中表达，从而上调ROCK1，起到促进HCC细胞增殖及转移的作用[29]。
　　综上所述，HCC组织LncRNA TINCR表达水平与HCC术后复发关系紧密，LncRNA TINCR表达水平升高则预示着较高的复发率，因此LncRNA TINCR可能是降低HCC术后复发率的有效治疗靶点。
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　　（收稿日期：2020-02-13）
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