猪肉中环丙沙星残留检测的不确定度评定

来源:用户上传      作者:杜春雷

　　摘 要：本文对猪肉中环丙沙星残留检测的不确定度进行了评定。结果表明，分析检测过程中的不确定度来源主要包括标准溶液、仪器、回收率和测量重复性等。经评定，该方法测定猪肉中环丙沙星残留量的扩展不确定度为1.75 ?g/kg。
　　关键词：不确定度;喹诺酮;猪肉
　　Evaluation of Uncertainty in Detection of Ciprofloxacin Residues in Pork
　　DU Chunlei
　　（Zhangjiakou Agricultural Product Quality and Safety Supervision and Inspection Center， Zhangjiakou 075000， China）
　　Abstract： In this paper， the uncertainty of determination of ciprofloxacin residues in pork was evaluated. The results show that the sources of uncertainty in the analysis and detection process mainly include standard solutions， instruments， recovery rates and measurement repeatability. The expanded uncertainty for the determination of ciprofloxacin residues in pork by this method was evaluated to be 1.75 ?g/kg.
　　Keywords： uncertainty; quinolones; pork
　　1 材料c方法
　　1.1 试剂与仪器
　　环丙沙星标准物质[（100±0.10） ?g/mL]：农业部环境保护科研监测所;液相色谱-质谱联用仪：G6470，安捷伦;分析天平：LE2002E，梅特勒;移液器：5～50 ?L、100～1 000 ?L，Thermo。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 标准溶液的配制
　　（1）环丙沙星中间液配制。用移液器移取1 mL环丙沙星至10 mL容量瓶，乙腈定容，浓度为10 ?g/mL。
　　（2）环丙沙星工作液配制。用移液器移取1 mL标准中间液至10 mL容量瓶，乙腈定容，浓度为1 000 ng/mL。
　　（3）基质标准工作曲线。用移液器分别移取
　　20 ?L、50 ?L、100 ?L、200 ?L、500 ?L和1 000 ?L工作液至10 mL容量瓶，猪肉空白基质定容，浓度分别为2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL。
　　1.2.2 样品前处理
　　称取猪肉样品5.0 g，加20 mL 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液，涡旋1 min，超声10 min，10 000 r/min离心5 min（4 ℃），提取3次，合并上清液。将待净化的上清液全部转移到已活化的HLB柱（200 mg，6 mL），弃去滤液，用2 mL 5%甲醇水淋洗，抽干小柱，用6 mL甲醇洗脱并收集。氮气吹干，用1 mL 0.2%甲酸水复溶，涡旋1 min，过0.22 ?m滤膜，上机测定[1]。
　　1.2.3 色谱条件
　　C18色谱柱：50 mm×2.1 mm，1.9 ?m;柱温：40 ℃，流速：0.2 mL/min;流动相：乙腈-0.2%甲酸水。
　　1.2.4 质谱条件
　　电离模式：ESI+;扫描方式：MRM;离子喷雾电压：500 V;离子化温度：300 ℃[2]。
　　1.3 结果计算
　　环丙沙星的计算公式如下：
　　（1）
　　式中：X为样品中组分含量，?g/kg;c为测定液中组分浓度，ng/mL;V为定容体积，mL;m为样品质量，g。
　　2 结果与分析
　　2.1 不确定度来源分析
　　不确定度的来源分析如图1所示。
　　2.2 不确定度的评定
　　2.2.1 样品称量引入的相对标准不确定度ur（W样）
　　根据天平检定证书，当称量5.00 g时，最大允许误差为0.02 g，假设均匀分布，k=，试验称量样品的平均质量为5.02 g，则样品称量引入的相对标准不确定度为：
　　2.2.2 样品溶液定容引入的相对标准不确定ur（V样）
　　样品溶液定容使用1 000 ?L移液器，根据《移液器检定规程》，移液器的容量允差为0.000 2 mL，假设均匀分布，则样品溶液定容引入的相对标准不确定度为：
　　2.3 仪器引入的相对标准不确定度ur（E液质）
　　根据液质校准证书，峰面积测量重复性为1.2%，假设均匀分布，则仪器引入的相对标准不确定度为：
　　2.4 测量重复性引入的相对标准不确定度ur（X样）
　　平行制备10份样品进行测定，结果见表1。由表1可知，测量重复性引入的相对标准不确定度为：
　　2.5 回收率引入的相对标准不确定度ur（R）
　　对加标样品进行测定，回收率分别为93.52%、94.22%、95.36%、93.18%和92.40%。根据t检验，则回收率引入的相对标准不确定度为：
　　当置信度为95%，n-1=4，查t值临界值表：

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