HPLC 法测定炎见宁片中苦玄参苷ⅠA的含量

来源:用户上传      作者: 黄 蘅,黄思文

　　[摘要] 目的:建立HPLC法测定炎见宁片中苦玄参苷ⅠA含量的方法。方法:色谱柱:Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(40∶60),流速:1.0 ml/min,柱温:30℃;检测波长:264 nm。结果:苦玄参苷ⅠA在0.235 2～23.520 0 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率为100.39%,RSD=2.14%(n=6)。结论:该方法操作简便,快速易行,结果准确可靠,可以作为炎见宁片中苦玄参苷ⅠA的含量测定方法。
　　[关键词] HPLC;炎见宁片;苦玄参苷ⅠA
　　[中图分类号] R927.2[文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2010)06(a)-061-02
　　
　　Content determination of PiefeltarraeninⅠA in Yanjianning Tablets by HPLC
　　HUANG Heng, HUANG Siwen
　　(Wuzhou Institute for Food and Drug Control, Wuzhou 543002, China)
　　[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of piefeltarraeninⅠA in Yanjianning Tablets by HPLC.Methods: The Agilent TC-C18 column (250 mm×4.6 mm,5 μm) was used, mobile phase was acetonitri and waters (40∶60). The flow rate was 1.0 ml/min, the column temperature was 30℃, the detection wavelength was 264 nm. Results: The linear range of piefeltarraenin ⅠA was within 0.235 2-23.520 0 μg (r=0.999 9). The average recovery was 100.39% with a RSD of 2.14% (n=6). Conclusion: The method is simple, fast, easy and the result is accurate and reliable. It can be used for quality control of the piefeltarraenin ⅠA in Yanjianning Tablets.
　　[Key words] HPLC; Yanjianning Tablets; Piefeltarraenin ⅠA
　　
　　炎见宁片由苦玄参、毛冬青、防己三味中药组成,具有清热燥湿解毒,活血消肿止痛的功效。现行标准为国家食品药品监督管理局标准(试行)YBZ17302005,未有含量控制标准,因此选择君药苦玄参的有效成分苦玄参苷ⅠA为定量分析的指标成分。有报道用薄层扫描法测定炎见宁片中苦玄参苷ⅠA的含量[1],本文用高效液相色谱法对炎见宁片中的苦玄参苷ⅠA进行了的含量测定方法的研究,为进一步完善该制剂的质量标准提供了依据。现报道如下:
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　Agilent-1200高效液相色谱仪 ,紫外检测器,ChemStation 色谱工作站,日本AND GR-202电子分析天平。
　　1.2 试药
　　苦玄参苷ⅠA对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111745-200501);乙腈为色谱纯;水为纯化水;其他化学试剂均为分析纯。炎见宁片样品(广西梧州制药集团股份有限公司,批号:20091201、20091202、20091203)。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱:Agilent TL-C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm);柱温:30℃;流动相:乙腈-水(40∶60);流速:1.0 ml/min;检测波长:264 nm;进样量10 μl。理论板数按苦玄参苷ⅠA峰计算应不低于3 000。
　　2.2 溶液的制备
　　2.2.1 供试品溶液的制备取样品20片除去包衣,精密称定,研细,取约1 g,精密称定。精密加入80%甲醇50 ml,称定重量,超声30 min,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液,用0.45 μm的微孔滤膜滤过,即得。
　　2.2.2 对照品溶液的制备精密称取苦玄参苷ⅠA对照品,置容量瓶中,加入甲醇溶液制成每毫升含苦玄参苷ⅠA 0.4 mg的溶液,即得。
　　2.2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例和工艺,制成不含苦玄参的阴性样品。按“2.2.1”项下供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。
　　2.3 系统专属性试验
　　分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,见图1。由图1可见,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有相同保留时间,与其他组分的分离良好。处方中其他成分对苦玄参苷ⅠA测定没有干扰。
　　2.4 线性关系考察
　　精密称取苦玄参苷ⅠA 11.76 g,置50 ml量瓶中,加入甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液。取苦玄参苷ⅠA浓度为0.235 2 mg/ml的对照品溶液按上述色谱条件分别进样1、5、10、50、100 μl,注入色谱仪,测定色谱峰,以峰面积积分值为纵坐标(Y),对照品进样量为横坐标(X)绘制标准曲线。标准曲线方程:Y=724.360 98 X+1.065 87(r=0.999 9,n=5)。结果表明,苦玄参苷ⅠA在0.235 2～23.520 0 μg范围内有良好的线性关系。
　　2.5 精密度试验
　　取同一份对照品溶液重复进样6次,测得峰面积积分值的RSD为0.03%(n=6)。表明仪器精密度良好。
　　2.6 稳定性试验
　　取同一份供试品溶液(批号:20091201),分别于0、2、4、8、12、24h进样,测得峰面积积分值的RSD为0.05%(n=6),结果表明供试品溶液在24 h内稳定。
　　2.7 重复性试验
　　取同一批样品(批号:20091201),精密称取样品6份,每份约1 g,按“2.2.1”项方法制备供试品溶液并测定。苦玄参苷ⅠA平均含量为4.09 mg/片,RSD=1.21%。表明方法重复性良好。
　　2.8 加样回收试验
　　精密称定已知含量的样品(含量为4.09 mg/片,批号:20091201,平均片重0.249 9 g)6份,每份约0.5 g,分别精密加入浓度为8.80 mg/ml的苦玄参苷ⅠA对照品溶液1 ml,按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液,分别进行测定,结果见表1。
　　2.9 样品含量测定
　　分别精密称取3批样品,约1 g,按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,按外标法计算样品中苦玄参苷ⅠA的含量,结果见表2。
　　
　　表 2 样品测定结果(n=3)
　　Tab.2 Determination results of sample(n=3)
　　
　　3 讨论
　　3.1 流动相和测定波长的选择
　　参照相关文献,最终选用流动相为乙腈-水(40∶60),检测波长为264 nm。用该方法测定本品中的苦玄参苷ⅠA含量,辅料和其他成分无干扰,样品峰形对称,分离度好[2-8]。
　　3.2 提取溶剂的选择
　　本实验比较了60%[9]与80%甲醇为溶剂所测的结果,结果80%甲醇测得的结果略大,故本实验选80%甲醇为提取溶剂。
　　3.3 提取方法的比较
　　本实验比较了不同超声处理时间提取样品,结果显示超声提取30 min,即可将供试品中苦玄参苷ⅠA提取完全,故提取方法采用超声处理提取时间为30 min。
　　[参考文献]
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　　(收稿日期:2010-02-22)

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