氯霉素制剂标准中含量测定应采用微生物检定法

来源:用户上传      作者: 王铁军　狄永平

　　[摘要]《中国药典》2005年版已将氯霉素及制剂标准中的含量测定项由原来的紫外分光光度法改为HPLC法 ，但还是缺乏对氯霉素与合霉素（氯霉素的D-苏型消旋体，其抗菌作用仅及氯霉素的一半）有效鉴别。建议增加抗生素微生物检定法，控制氯霉素制剂的含量和临床有效性。杜绝以合霉素冒充氯霉素。
　　[关键词]氯霉素制剂；微生物检定法
　　[中图分类号]R91[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）04（c）-166-01
　　《中国药典》2005年版已将氯霉素及制剂标准中的含量测定项由原来的紫外分光光度法改为HPLC法，该方法与原来的UV法相比，具有能有效控制杂质及有关物质的作用，同时HPLC法比紫外分光光度法更具有专属性，可以直接区分氯霉素、琥珀氯霉素和无味氯霉素，在有效控制氯霉素产品质量方面，向前迈进了一步。但该方法还不能区分氯霉素与合霉素。由于氯霉素的化学结构分子中C-1和C-2是两个手性中心，因而它的光学异构体共有4种。这4种异构体为两对对映异构体，其中一对的构型为D-苏型（或称1R，2R型）和L-苏型（或称1S，2S型）；另一对为D-赤型（或称1R，2S型）和L-赤型（或称1S，2R型）。未经拆分的苏型消旋体即为合霉素（Syntomycin），抗菌活性为氯霉素的一半，副作用大，对造血系统有抑制，严重时会导致再生障碍性贫血，甚至导致死亡。2005版药典收载的氯霉素为D-苏型，其他三种立体异构体均无疗效，且毒性大。1982年合霉素就已被卫生部淘汰。2005年版的中国药典收载的氯霉素，其原料标准方法，很严密，可以有效控制氯霉素的质量，但制剂（片剂）的检验方法就存在缺陷。
　　
　　1 片剂检验方法的缺陷
　　其[鉴别](1) 取本品1 片，除去包衣后，研细，加乙醇10 ml，振摇，使氯霉素溶解，滤过，滤液蒸干，加稀乙醇1 ml 溶解后，加1%氯化钙溶液3 ml 与锌粉50 mg，置水浴上加热10 min，倾取上清液，加苯甲酰氯约0.1 ml，立即强力振摇1 min，加三氯化铁试液0.5 ml 与氯仿2 ml，振摇，水层显紫红色。如按同一方法，但不加锌粉试验，应不显色。
　　该项试验，只是分子结构中O2N- 基团的还原反应，氯霉素与其异构体均可产生。即无法将之与其异构体有效区分开来。
　　[鉴别]（2）要求在含量项下记录的色谱图中供试品溶液的主峰保留时间，应与对照品主峰保留时间一致。
　　氯霉素原料的含量测定方法中采用的HPLC法 ，以C18位固定相，以1%庚烷磺酸钠溶液：乙腈（75∶25）为流动相，检测波长为272 nm，在该条件下不能对氯霉素的光学异构体进行分离，因为C18不是手性固定相，流动相中庚烷磺酸钠是离子对试剂，对异构体也无拆分作用，所以该方法只能控制原料中氯霉素及其光学异构体的总量，而不能反映其中单一旋光异构体的含量。即也无法真正鉴别合霉素和其它氯霉素异构体杂质。
　　在氯霉素原料的[性状]项下，规定了其比旋度为+18.5°-+ 21.5°，因为合霉素是消旋体，没有旋光性，所以该项检查可以将氯霉素与合霉素区分开。但该项检查对于片剂或其他制剂来说，需要提取的量很大，片剂无法做到。故不能采取。
　　这样，氯霉素制剂的检验标准，就存在一个无法将氯霉素与合霉素区分开来的漏洞，如果用合霉素冒充氯霉素，该检验标准的方法将无法控制。事实上，就曾经发生过利用逃避[比旋度]检查项，以合霉素冒顶氯霉素的事情。合霉素是氯霉素生产的中间体，成本比氯霉素低很多，但其抗菌作用只及氯霉素的一半，且毒性大。所以氯霉素制剂标准应有针对性的防范。可在HPLC法的基础上增加生物检定检定法 ，用以测定氯霉素的含量。
　　
　　2 改良后的检验方法
　　2.1 将HPLC法作为鉴别项，它与氯霉素标准品的相同保留时间可以确定其不是别的抗生素。含量测定采用抗生素微生物检定法，以氯霉素标准品测定供试品的抗生素效价，如果是合霉素，则其效价将只能是标示量的一半，这样两者就能区分开。这样，用HPLC 法和微生物检定法共同控制，方能保证氯霉素制剂的质量。
　　生物检定法的方法是：取本品10片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氯霉素40 mg），加乙醇4 ml 研磨使氯霉素溶解，用水分次转移至200 ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液适量，加灭菌水制成每1 ml 中约含1 000 U的溶液，照抗生素微生物检定法（附录Ⅺ A）测定。1 000氯霉素单位相当于1 mg的C11H12C12N2O5。
　　2.2 如果不采用HPLC法，可以在检查项增加紫外吸光光度法（吸光度法比HPLC法操作简单），这样两者也可以共同控制，以保证其质量。
　　方法是：取本品10片，除去包衣后，精密称定，研细，称取适量（相当于氯霉素40.00 mg），加乙醇4 ml 研磨使氯霉素溶解，用水分次转移至200 ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液适量，再用水稀释成每1 ml中含20.00 μg的溶液，照分光光度法（附录Ⅳ A），在278 nm的波长处测定吸收度，吸光度应为0.536～0.656。
　　
　　3 结论
　　氯霉素制剂（包括氯霉素片、胶囊、滴眼剂和滴耳剂）在采用HPLC法或紫外分光光度法的基础上，同时以微生物检定法作为含量测定方法是必要的，可使标准更加严密，从而有效地控制药品质量。
　　[参考文献]
　　[1]国家药典委员会.中国药典[M].北京：化学工业出版社，2005. 776.
　　[2]《国内外药品标准方法对比手册》编写组. 国内外药品标准方法对比手册[M].北京：化学工业出版社，2003. 653.
　　（收稿日期：2007-03-05）
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