灯盏花素注射液细菌内毒素检查法的研究

来源:用户上传      作者: 董艳丽　刘　峰　曹桂敏

　　[摘要]目的：建立灯盏花素注射液细菌内毒素检查法。方法：计算灯盏花素注射液的内毒素限值，通过对灯盏花素注射液进行细菌内毒素的干扰实验，确定其最大无干扰浓度。结果：灯盏花素注射液细菌内毒素限值为150 EU/ml；最大干扰浓度为0.6 mg/ml；最小无干扰稀释倍数为4倍。结论：灯盏花素注射液可用细菌内毒素检查法控制热原。
　　[关键词]灯盏花素注射液；细菌内毒素；干扰实验
　　[中图分类号]R91[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2007）02（b）-124-01
　　灯盏花素注射液为灯盏花素无菌水溶液。细菌内毒素检查法是用鲎试剂与细菌内毒素产生凝聚反应的机制，以判断供试品中细菌内毒素是否符合规定的一种方法。该法具有灵敏度高、重现性好、标准化实验过程短，且可完成多批次供试品检测等优点。因此本实验采用干扰实验对灯盏花素细菌内毒素检查法进行研究，来建立细菌内毒素检查法检测热原。
　　
　　1 材料与方法
　　
　　1.1 鲎试剂
　　批号20060308，灵敏度0.125 EU/ml。湛江安度斯生物有限公司。细菌内毒素工作标准品：批号200401，效价160 EU/支，中国药品生物制品检定所。灯盏花素为市售品，规格：5 mg/2 ml。溶解水20060412，湛江安度斯生物有限公司。家兔，齐齐哈尔市药检所提供。
　　
　　1.2 干扰实验参数
　　本实验供试品进行干扰试验的参数如下：M：灯盏花素人用最大剂量2 ml/kg；K：热原反应阈值5.0 EU/kg；中国人按60 kg体重计算，M＝2 ml/(h・60 kg)；L:灯盏花素细菌内毒素限值L＝K/M＝150 EU/ml；MVD:最大有效稀释倍数MVD＝L/λ；TAL的λ值一般在0.03～0.5 EU/ml范围内，按公式MVD＝L/λ计算得MVD值在300～5 000倍范围内。本实验TAL的λ＝0.125 EU/ml；因此MVD＝1 200[1～3]
　　
　　1.3 鲎试剂灵敏度复核
　　中国药典2005版二部附录下方法进行操作，结果λc＝0.125 EU/ml，符合规定。
　　
　　2 结果
　　
　　2.1 干扰试验
　　品原液在符合规定的限值内根据内毒素理论限值用鲎试剂溶液稀释：原液、1/4、1/8、1/12，4个浓度，先用原液的样品液将细菌内毒素工作标准稀释成2λ、λ、0.5λ、0.25λ等系列浓度后进行干扰实验，每一浓度做4支平行样，阴性对照、阳性对照及样品阳性对照各做2支，测定结果见表1。
　　表1供试品的干扰实验
　　
　　2.2 重现性试验
　　选择以上内毒素检查法无干扰的稀释4～12倍（即0.2～0.6 mg/ml）的溶液，按细菌内毒素检查法重复操作，检查重现性为100％。
　　
　　2.3 家兔法与细菌内毒素检查法结果比较
　　取市售品3批按细菌内毒素检查干扰浓度即0.2～0.6 mg/ml，检查结果与家兔法热原检查结果比较见表2。
　　表2细菌内毒素检查法与家兔检查法结果比较
　　
　　3 讨论
　　
　　注射液是否适用于细菌内毒素试验取决于其对细菌内毒素是否干扰。从供试品干扰实验结果可以判定4～12倍稀释对细菌内毒素无干扰作用。因此，灯盏花素注射液在0.2～0.6 mg/ml范围内进行细菌内毒素检查是可行的。所以灯盏花素注射液细菌内毒素检查法可以检测热原。
　　
　　[参考文献]
　　[1]国家药典委员会.中国药典[M].二部.北京：化学工业出版社2005.附录85.
　　[2]夏振民.药品细菌内毒素检查的限值[J].药物分析杂志，1995，15(3):54. [3]黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计[J].中国药学杂志，1997，32(2):72.
　　（收稿日期：2007-01-09）
　　
　　注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。

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