复方三七通络片含量测定方法研究

来源:用户上传      作者: 熊　梅，肖践丽，韦继雯

　　摘要：目的：建立HPLC法测定复方三七通络片中人参皂苷Rg1、Rb1含量的方法。方法：采用Venusil XBP―C18色谱拄(250X4.6mm，5μm)，以乙腈(A)和水(B)为流动相梯度洗脱，流动相梯度：0min(20％A1)→15min(36％A)→60min(20％A)→66min(20％AA)。流速：1.0ral.rain-1，柱温：30℃，检测波长：203nm。结果：人参皂苷ng1、Rb1线性范围分别为2.45～12.25μg、2.65～13.25μg。该方法加样回收率：人参皂苷Rgl为94.5％、人参皂苷Rb1为93.9％，RSD分别为1.7％、1.6％。结论：该方法操作简便、准确、可靠，精密度好，可用于复方三七通络片的含量测定。
　　关键词：复方三七通络片；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rg1勘；
　　高效液柏色谱
　　中图分类号：R927.2
　　文献标识码：A
　　文章编号：1007―2349(2007)06―0036―02
　　
　　复方三七通络片是由三七、丹参、冰片、黄芪、杜仲等二十余种中草药组成的中药复方制剂。具有益肾养肝、活血通络的功效。主要用于脑动脉硬化、脑梗塞、供血不足、胸闷心痛，心悸、四肢麻木、中风先兆、脑血栓、高血压等疾病的治疗。为了控制该制剂的质量，采用HPLC法同时测定复方三七通络片中人参皂苷R勘、Rb1的含量，为复方三七通络片建立质量标准提供了依据。
　　
　　1仪器与试剂与材料
　　
　　高效液相色谱仪(日本岛津)，LC―10ATVP泵，SPD―10PVP紫外―可见检测器，CTO―10ASVP柱温箱，SCL―10AVP系统控制器，CLASS―VPLC工作站。
　　对照品：人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1分别由中国药品生物制品检定所提供(批号分别为：0703―200221 110704―200318)。乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水。复方三七通络片(批号05040603、05100402,05110501)，由云南文山州中医医院提供。
　　
　　2方法与结果
　　
　　2.1色谱条件及系统适应性试验色谱柱：shim―pack　VP―ODS(150X4.6mm，5urn)；以乙腈(A)―水(B)梯度洗脱，流动相梯度：Omin(20％A)→15rain(36％A)→60min(20％A)→66min(20％A)；流速：1.0ral.min-1-t，柱温；30℃，检测波长：203urn。在此条件下，组分在66min内出完，在记录的色谱中，按保留时间先后的出峰顺序为：人参皂苷Rg1(Rg1)、人参皂苷Rb1(Rb1)，供试品溶液保留时间与对照品溶液保留时间一致，2个成分峰理论塔板数均不低于10000，Rg1峰与Rb1峰分离度大于2.0空白溶液无干扰(见图1)。
　　
　　2.2溶液的制备
　　
　　2.2.1对照品溶液的制备　精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇溶解配制成人参皂苷Rg1为0.49mg.ml-1的混合溶液，作为对照品溶液。
　　2.2.2供试品溶液的制备取复方三七通络片20片，精密称定，研细，精密称取1.5g，置lOOml具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，80℃加热回流3h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25rnl，蒸干，加水25ml溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次(25ml、20rnl、15m1)，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次。每次20ml，弃去正丁醇饱和的氨液，再以5ml，正丁醇饱和的水轻轻摇洗，弃去水层，回收正了醇至干，残渣加甲醇溶解并转移至10m|量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。同法制各缺三七的阴性对照。
　　2.3线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl进行分析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制工作曲线，计算回归方程，见表1。由表1可见，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rbt进样量分别在2.45～12.25μg、2.65～13.25μg范围内线性关系良好。
　　2.4精密度试验精密吸取上述对照溶液10μl，重复进样5次，测定峰面积，结果精密度良好，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb,的RSD分别为0.36％，0.42％。
　　2.5稳定性试验精密吸取上述对照品溶液10μ1，每隔1h测定1次，共测定10次，RSD分别为0.52％、0.78％，表明供试品溶液在10h内基本稳定。
　　2.6重复性试验取复方三七通络片(批号：05040603)样品5份，按供试品溶液制备的方法制备溶液，依法进行测定，结果样品中测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1平均含量分别为2.01(mg／片)、1.62(rag／片)，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的RSD分别为0.63％、0.57％。
　　2.7加样回收率试验精密称取已知含量的复方三七通络片(批号：05040603)5份，分别加入人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品，分别测定，结果平均回收率分别为94.5％、93.9％。RSD分别为1.7％、1.6％。
　　2.8样品含量测定精密称取复方三七通络片的细粉1.5g，按供试品溶液制备方法制备。精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μL，按上述色谱条件进行测定，测定结果见表2。
　　
　　3讨论
　　
　　因人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1在甲醇中溶解度较好，故选择甲醇为提取溶液。笔者比较甲醇80℃热回流3h提取肠炎平颗粒对急慢性实验性溃疡性结肠炎的影响后萃取、超声30min提取后萃取和甲醇浸渍提取后萃取。结果显示，甲醇80℃加热回流3h提取后萃取测得的含量较高，另对回流提取时间进行了考察，比较回流提取1g、2h、3h人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的提得量，结果2h和3h提得量较高，且相关不大，故选择甲醇80℃加热回流2h提取后萃取为复方三七通络片的提取法。结果表明该方法专属性较强，精密度好，可用于复方三七通络片中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rbl的测定，为该制剂的质量标准提供参考依据。

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