三氟柳含量测定方法的建立
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作者: 汪波
【摘要】 目的 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定三氟柳的含量。方法 采用DiamonsilTM(钻石)C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈(50∶50),流速1.0 ml/min,检测波长224 nm。结果 在该色谱条件下,三氟柳在5.15～515 μg/ml范围内线性关系良好,r=0.9999。结论 该方法简便、准确、可行,可用于三氟柳的质量控制。
【关键词】 三氟柳;HPLC
Determination of the Content of Triflusal by RP - HPLC
WANG Bo.
Department of Pharmacy, the First People`s Hospital of Anqing,Anqing 246003,China
【Abstract】 Objective A reversed phase high performance liquid chromatography method for the determination of the content of Triflusal.Methods The analysis was performed on Diamonsil C18 reversed-phase analytical column(250 mm×4.6 mm,5 μm);the mobile phase consisted of a mixture of 0.1% phosphoric acid-acetonitrile (50∶50) at the flow rate was 1.0 ml/min;The ultraviolet detection wavelength was set at 224 nm. Results Triflusal and its related substances could be seperated well. The linearity of the Triflusal curve was well correlated (r =0.9999)with in the range of 5.15～515 μg/ml.Conclusion The method appeared to be simple, accurate and reproducible;It can be used to control the quality of Triflusal.
【Key words】 RP - HPLC ;Triflusal
三氟柳是一种血小板凝聚剂,它能够通过不可逆的一致血小板环氧化酶,而减少血栓素合成酶的生物合成,从而抑制血小板的聚集。该药物于80年代在西班牙等国上市,在临床上广泛应用于预防中风和心肌梗死,是一种疗效确切,安全可靠的药物[1,2],目前我国尚未进口该产品。目前该品种收录于2003版英国药典,其检测方法为滴定法[3]。但是考虑到滴定法中终点判断误差较大,笔者选择建立了HPLC的方法检查三氟柳的含量,取得了较好的效果。
1 仪器与试药
Waters600泵,2487紫外检测器,Waters Empower工作站,三氟柳对照品(自制,原料精制所得,面积归一化法测定其含量为99.93%),乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测波长的选择 取三氟柳25 mg,加甲醇溶解并定量稀释制成每1 ml中含0.02 mg的溶液,照分光光度法检测,样品在224 nm的波长处有最大吸收,因此选择224nm作为三氟柳含量测定的检查波长。
2.2 色谱条件及系统适应性 色谱柱:DiamonsilTM(钻石)C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.1%磷酸水溶液-乙腈(50∶50);柱温:20℃;进样量:20 μl;流速:1.0 ml/min;检测波长:224 nm;理论塔板数不低于3000。
2.3 对照品溶液的制备取三氟柳对照品约25 mg,精密称定,置50 ml量瓶中,加流动相溶解并稀释成每1 ml中约含0.5 mg的对照品溶液,即得。
2.4 线形考察 取干燥恒重后三氟柳对照品25 mg,精密称定,置于50 ml容量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度。量取该溶液0.1 ml、0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、10 ml分别置于6个10 ml容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配成梯度浓度的标准溶液。分别取20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积,以浓度(X)对峰面积(Y)作图。计算回归方程为:Y = 41789X + 127368,r = 0.9999。结果表明:在5.15～515 μg/ml浓度范围内,本法线形良好。
图1 三氟柳的HPLC色谱图
图2 三氟柳标准曲线
2.5 进样精密度
取标准曲线项下浓度为51.5 μg/ml的溶液,连续进样6次,记录色谱图,考察进样精密度。其峰面积的RSD值为0.22%,表明仪器的精密度良好。
2.6 重复性试验 取同一批次干燥恒重后样品,精密称定,共6份,用乙腈溶解并稀释制成每1 ml中含有0.05 mg的溶液,摇匀,作为供试品溶液。另取三氟柳对照品适量,同法配制溶液,作为对照品溶液。精密吸取20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算样品的含量。结果表明,该方法的重复性良好。
表1
重复性试验结果
编号123456RSD(%)
含量(%)99.6899.7099.7299.6999.7199.740.03
2.7 溶液稳定性试验
取重复性试验项下的样品溶液,室温下放置,分别于0、2、4、6、8、10 h,吸取20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图。其峰面积的RSD值为1.04%,表明三氟柳在10
作者单位:246003安徽省安庆市第一人民医院药剂科
h内具有良好的稳定性。
2.8 加样回收率试验 取重复性试验项下的样品溶液6份,分别加入适量的对照品,定容后,按上述的色谱条件进行测定,计算加样回收率。结果平均加样回收率为98.34%,RSD为1.32%。
3 讨论与小结
3.1 三氟柳属于水杨酸类母核结构,在临床上广泛应用于预防中风和心肌梗死,是一种疗效确切,安全可靠的药物。目前我国尚未进口,已有国内厂家进行了深入研究。
3.2 三氟柳主要杂质为对三氟甲基水杨酸,该色谱条件下,三氟柳与其主要杂质可以达到基线分离,杂质不干扰三氟柳的含量测定。
3.3 2003版英国中三氟柳的检测方法为滴定法,该方法误差相对较大。我们建立了RP-HPLC的方法测定三氟柳的含量,为三氟柳质量控制提供了简便、准确、可靠的测定方法。
参 考 文 献
[1] McNeely W, Goa K. Triflusal. Drugs,1998, 55(6):823-833.
[2] Murdoch D, Plosker G. Triflusal: a review of its use in cerebral infarction and myocardial infarction, and as thromboprophylaxis in atrial fibrillation. Drugs, 2006, 66(5):671-692.
[3] BP(英国药典).2005.Ph Eur monograph,1377.
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