二辛归苍通窍丸中绿原酸含量测定方法研究

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　　【摘要】目的：探讨二辛归苍通窍丸质量标准。采用HPLC法对二辛归苍通窍丸中的绿原酸进行含量测定。方法：色谱柱为KromasilC18色谱柱(46250mm，5m)，以乙腈-03%磷酸(1090)为流动相；流速：10mL!min-1，检测波长327nm。结果：绿原酸的进样量在003~015mg范围内呈良好的线性关系(r=09995)，平均加样回收率为1006%，RSD为157%(n=6)。结论：方法简便、准确，可用于二辛归苍通窍丸中绿原酸的含量测定。
　　【关键词】二辛归苍通窍丸；绿原酸；高效液相色谱法
　　
　　我院制剂二辛归苍通窍丸是院内传统方剂，由金银花、辛荑、细辛、苍耳子、当归、连翘等九味中药材组成，具有辛凉解表，清热解毒的功效。用于鼻炎、鼻窦炎。金银花为方中君药，其主要成分为绿原酸，该标准中仅有对金银花的显微鉴别，没有定量指标，本文参照《中国药典》2010年版(一部)银翘解毒片中绿原酸的含量测定方法，对制剂中绿原酸进行含量测定。
　　1仪器与试药
　　LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)、METTLERTOLEDOXS205DualRange电子分析天平、KQ-500B型超声波清洗器，甲醇、乙腈为色谱纯试剂，水为纯化水，其它试剂为分析纯。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：2009-3260，银翘解毒丸(本院制剂，批号：091104、091123、091208)。
　　2方法与结果
　　2.1色谱条件色谱柱KromasilC18色谱柱(4.6×250mm；5μm)，以乙腈-0.3%磷酸(10∶90)为流动相，检测波长327nm，柱温30℃，流速：1.0mL•min-1。
　　2.2供试品溶液的制备[1]取重量差异项下的本品，剪碎，取约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
　　2.3对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成60μg•mL-1的溶液，作为对照品溶液。
　　2.4阴性样品溶液的制备按处方制备不含金银花药材的阴性样品，按“2.2”供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。
　　2.5干扰试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性样品溶液，注入色谱仪测定，结果阴性溶液在此处无吸收，说明在此条件下其它成分对绿原酸测定无干扰。
　　2.6线性关系的试验精密称取绿原酸对照品1200mg，置200mL棕色量瓶中，加入50%甲醇150mL，振摇10min，使充分溶解，再用50%甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取25mL，置100mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取绿原酸对照品溶液2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，经线性回归，得回归方程：Y=77910 X+17014，r=0.9995。表明绿原酸进样量在003～015g范围内线性关系良好。
　　2.7精密度试验精密吸取2.3项下对照品溶液10μL，重复进样5次，测定峰面积，RSD为0.6%(n=5)，结果表明仪器精密度良好。
　　2.8稳定性试验取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h各进样10μL，测定峰面积，RSD为1.2%(n=6)。实验结果表明，供试品在10h内稳定性良好。
　　2.9重复性试验精密称取同一批样品5份，照“2.2”项下方法制备供试品液，进样10μL测定，绿原酸含量平均为0.62mg•g-1，RSD为1.2%(n=5)。表明分析方法重现性良好。
　　2.10加样回收率试验精密称取已知含量的同一批样品6份，分别精密加入2.5项下绿原酸对照品溶液20mL，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，进样10μL测定峰面积，计算回收率，结果见表1。
　　表1加样回收率实验结果
　　称样量(g) 样品含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
　　2.011 1.25 1.20 2.43 98.33
　　2.005 1.24 1.20 2.45 100.8
　　2.013 1.25 1.20 2.44 99.17 100.6 1.57
　　2.025 1.26 1.20 2.48 101.7
　　2.006 1.24 1.20 2.48 103.3
　　2.018 1.25 1.20 2.46 100.8
　　2.11样品测定取样品，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别取供试品溶液及对照品溶液各10L进样测定峰面积，用外标法(以峰面积)计算含量，见表2。
　　表2样品含量测定结果(n=3)
　　批号 091104 091123 091208
　　平均含量(mg•g-1) 0.62 0.63 0.62
　　3讨论
　　3.1绿原酸在溶液中不稳定，见光，受热易分解，因此对照品溶液应置棕色瓶中，在暗处保存，较为稳定。
　　3.2二辛归苍通窍丸的处方组成复杂，仅有定性，不足以控制其质量。本试验采用HPLC法测定二辛归苍通窍丸中绿原酸含量，该法回收率高，分离效果好，操作简便，方法可行。
　　
　　
　　参考文献
　　[1]《中国药典》2010年版(一部)[S]北京：中国医药科技出版社，2010：1088.

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