消旋山莨菪碱滴眼液含量测定方法研究

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　　文章编号：1009-5519（2008）07-1083-01 中图分类号：R9 文献标识码：A
　　
　　消旋山莨菪碱滴眼液标准源于国家药品标准，其标准含量测定项下有消旋山莨菪碱的高效液相色谱法测定方法，但由于其流动相[0.2%十二烷基硫酸钠的甲醇溶液-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.5）（60∶40）]对色谱系统损伤较大，且操作繁琐，故对其含量测定方法进行改进。
　　
　　1 试验仪器及试药
　　
　　Agilent 1100型高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱：Hypersil ODS，5 μm，4.6 mm×250 mm；Sartorius BS 110S电子天平；PHS-3C精密PH计；消旋山莨菪碱滴眼液：市售样品；消旋山莨菪碱对照品：中国药品生物制品检定所，批号：100249-199501；甲醇：色谱纯，Merk corporation；水：重蒸水；其他试剂均为分析纯。
　　
　　2 色谱条件
　　
　　用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.5％三乙胺溶液（磷酸调pH 3.0）(28∶72)为流动相，检测波长为220 nm，流速1.0 ml/min。洗脱顺序依次为右旋山莨菪碱、左旋山莨菪碱。理论板数按左旋山莨菪碱计不得低于2000。
　　
　　3 测定法
　　
　　精密量取装量差异项下的本品内容物10.0 ml，置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，精密量取续滤液20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。另精密称取消旋山莨菪碱对照品适量，加流动相溶解并定量稀释至每1ml含0.2 mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积（左旋山莨菪碱和右旋山莨菪碱峰面积之和）计算。
　　
　　4 方法学考察
　　
　　4.1 专属性试验及溶剂干扰试验：按本品处方制备不含消旋山莨菪碱的空白辅料样品，按供试品处理方法制备空白辅料溶液。另按3项下制备方法制备供试品溶液、对照品溶液，取上述空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液及流动相，按2项下色谱条件测定，结果显示空白辅料及溶剂均不干扰本品测定。
　　4.2 线性关系考察：精密称取消旋山莨菪碱对照品13.30 mg，置25 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.532 mg/ml的对照品贮备液。分别精密吸取上述对照品贮备液0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、4.0 ml，分别置5ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取上述5种对照品溶液各20 μl注入液相色谱仪，按2项下色谱条件测定峰面积，以消旋山莨菪碱的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程如下：Y＝10000000X+58494，r＝0.99995。结果表明消旋山莨菪碱在0.0532～0.532 μg/ml之间呈良好的线性关系。
　　4.3 仪器精密度试验：精密吸取浓度为0.2056 mg/ml的对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪，测定5次，结果平均峰面积为2081395，RSD％＝0.60％。表明仪器精密度良好。
　　4.4 溶液稳定性试验：取同一批样品，按供试品制备方法制备供试品溶液，于0 h、2 h、5 h、10 h、24 h测定其峰面积，结果平均峰面积为2026425，RSD％＝1.20％。结果表明供试品溶液在24小时内稳定。
　　4.5 重现性试验：取同一批样品，按供试品制备方法制备6份供试品溶液，按测定法测定含量，结果平均含量为98.94％，RSD％＝0.39％。试验结果表明本含量测定方法重现性良好。
　　4.6 日间精密度试验：取上一批样品，连续6天按供试品制备方法制备供试品溶液，按测定法测定含量，结果6天所测平均含量为99.76％，RSD％＝1.35％。试验结果表明本含量测定方法中间精密度良好。
　　4.7 回收率试验：精密吸取本品空白辅料样品10 ml，共9份，置25 ml量瓶中，分别精密加入4 mg、5 mg和6 mg消旋山莨菪碱对照品，制备含消旋山莨菪碱分别约为标示量的80%、100%和120%的模拟样品各3份。分别以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，精密量取续滤液20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。另精密称取消旋山莨菪碱对照品适量，加流动相溶解并定量稀释至每1 ml含0.2 mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积（左旋山莨菪碱和右旋山莨菪碱峰面积之和）计算。结果平均回收率为99.99%，RSD%=0.84％，说明空白辅料对消旋山莨菪碱的测定无干扰，消旋山莨菪碱的回收率良好，测定方法可行。
　　4.8 样品含量测定：取本品三批样品，按供试品溶液制备方法制备，按2项下色谱条件及3项下测定法测定，结果三批样品含量分别为99.04％、99.14％、99.23％。
　　
　　5 讨论
　　
　　5.1 测定波长的选择：取消旋山莨菪碱对照品溶液，于190～500 nm之间扫描，最大吸收波长为216.40 nm，及参考文献[1]，选择220 nm作为检测波长。
　　5.2 消旋山莨菪碱为一种生物碱，流动相的组成及pH值影响其分离度及峰形，这可能由于其与固定相表面未被硅烷化的游离硅醇基之间发生了离子交换或形成氢键之故[2]，在流动相中加入一定比例的有机胺调节剂，可竞争、抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性，使碱性成分易于出峰，且峰形较好[3]。试验考察了三乙胺浓度为0.2％、0.5％、1.0％及pH值分别为3.0、5.0、9.0时色谱峰的分离度及峰形，结果表明当三乙胺浓度为0.5％、pH值为3.0、比例为28∶72时，色谱图中左旋山莨菪碱与右旋山莨菪碱的分离度良好、保留时间适宜、柱效较高。故确定以甲醇-0.5％三乙胺溶液（磷酸调pH 3.0）(28∶72)作为流动相。
　　5.3 用甲醇作为溶剂时，色谱图中溶剂峰较大，故采用流动相作为溶解溶剂，可消除甲醇峰的影响。
　　
　　参考文献：
　　[1] 中国药典2005年版第二部[S].640.
　　[2] Freiser HH，Newlan MP，Gooding DL，et al.Reversed phase high per-formanceliquid chromatography ofbasic drugs on a lilanol deactivatedsupported[J]. J Liq Chromatogr，1989，12(5):827.
　　[3] 梁贵键，钱厚海.HPLC对山莨菪制剂含量分析研究[J]中国药学杂志，1995，30（2）：106.
　　收稿日期：2007-12-21

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