HPLC法测定蛋黄馏油中哈尔满的含量

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　　【中图分类号】 R917 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)05－0232－02
　　 蛋黄馏油为雉科动物家鸡的卵煮熟后剥取卵黄，经加热熬炼而得的棕褐色或黑褐色的油状液体。近代关于蛋黄馏油中的主要成分国内国外进行了很多研究，发现其中含有抗菌的活性物质，即哈尔满等生物碱成分，这与蛋黄馏油临床主要用于治疗真菌所致的癣类皮肤病，湿疹，烧伤，静脉曲张性溃疡等症相符。本实验建立了以高效液相法测定蛋黄馏油中哈尔满的含量测定方法,该方法具有准确、灵敏、方便、快速的特点，为蛋黄馏油新工艺的考察和制定其质量标准提供了条件。
　　1 仪器与试剂
　　1.1 仪器 岛津LC―10AT高效液相色谱仪
　　1.2 原料 雉科动物家鸡(Gallus gallus domesticus Brisson)的蛋煮熟后剥取的蛋黄。
　　1.3 试剂 磷酸三乙胺、甲醇（色谱纯），水为重蒸馏水, 哈尔满对照品（98%），其他试剂均为分析纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件色谱柱：日本岛津Shim-pack，clc-ODS（6.0mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇―磷酸三乙胺(20：80)，流速1ml/min，柱温：30℃；检测波长：230nm。
　　2.2 对照品溶液的制备：精密称取哈尔满对照品适量，加甲醇制成0.0396 mg•ml-1的溶液。
　　2.3 线性关系考察：精密吸取浓度为0.0396mg•ml-1的哈尔满对照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，哈尔满对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程如下：Y=48540.4547x+54126.4797,r=0.9997。结果表明，哈尔满的进样量在3.96～19.80μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
　　Table1
　　 2.4 精密度实验：精密吸取对照品溶液5ul，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测定哈尔满色谱峰峰面积，结果表明，精密度良好，RSD＝2.05％ (n＝5)。
　　Table2
　　 2.5 供试品溶液的制备：取蛋黄馏油30g加入适量乙醚，5%的盐酸萃取；酸水层加入氢氧化钠溶液调至pH=10,乙醚萃取；蒸干乙醚，溶于5%的盐酸后再加入适量氯仿萃取，取酸水层，再加入氢氧化钠溶液调至pH=10后，加入适量氯仿萃取，取氯仿层，蒸干氯仿。溶于少量甲醇后移至100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，滤液备用。
　　2.6 重复性实验：精密称取同一批样品各5份，分别按2.4项下方法操作，精密吸取各供试品溶液5ul，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果样品平均含量为0.0037%，RSD＝1.91％(n＝5)。
　　 2.7 稳定性实验：精密吸取同一供试品溶液，按0、2、4、8、16h时间间隔，分别进样，测定哈尔满色谱峰峰面积，结果表明，样品溶液在32h内保持稳定，RSD＝2.63％ (n＝5)。
　　Table4
　　 2.8 样品含量测定：取5个样品，按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5ul，注入高效液相色谱仪，进行测定。
　　Table5
　　3 讨论与结论
　　本实验首次采用高效液相色谱法测定了 蛋黄馏油中哈尔满成分的含量，为蛋黄馏油新工艺的考察和制定其质量标准提供了条件。
　　
　　作者单位： 110044 沈阳红药制药有限公司
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