维血康糖浆含量测定之研究

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　　关键词 维血康糖浆 橙皮苷 硫酸亚铁 高效液相 薄层色谱
　　
　　维血康糖浆载于卫生部药品标准《中药成方制剂•第14册》，临床用于治疗脾肾不足、精血亏虚所致的相关病症。为了更好的控制产品质量，确保临床疗效，在本次仿制研究中我们对其质量标准进行了提高研究。
　　
　　1 仪器与药品
　　
　　HP-1100高效液相色谱仪（美国：包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器、HP化学工作站），UV-2450紫外分光光度计（日本岛津公司），CQ-250超声波清洗器（上海船舶电子设备研究所），SimplicityTM型超纯水系统（Millipore公司），橙皮苷对照品（批号：0721-200010，中国药品生物制品检定所），硫酸亚铁对照品（批号：111613-200301，中国药品生物制品检定所），维血康糖浆（批号：040101－040103，040301－040304，040401－040403，本单位中试车间生产），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
　　
　　
　　2 方法与结果
　　
　　2.1 橙皮苷含量测定：①色谱条件：Agilent Hypersil C18柱（4.0mm×250mm，5μm），流动相乙腈-水（21∶79），检测波长283nm，流速1.0ml/min，柱温为室温，进样量为10μl，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。在此条件下对照品、供试品在约8min有一色谱峰。详见图1。②对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，即得。③供试品溶液的制备：精密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。④阴性对照试验：按处方取不含陈皮的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照制剂，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，按样品测定方法注入液相色谱仪，结果在橙皮苷色谱峰相应的位置上，无色谱峰出现，详见图1。阴性对照对样品测定无干扰。⑤线性关系考察：精密称取橙皮苷对照品5.42mg，置10ml量瓶中，加甲醇近刻度，超声处理使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml含橙皮苷0.542mg）。取此对照品加甲醇稀释成以下浓度（ SymbolmA@ g/ml）：10.84、21.68、43.36、108.40、216.80、542.00，分别吸取10 SymbolmA@ l，注入液相色谱仪中进行测定，将样品浓度与峰面积进行线性回归处理，方程为Y=9.8382X-2.8471，r=0.999 998（n=6），橙皮苷在0.1084～0.524 SymbolmA@ g范围内呈良好的线性关系。⑥精密度试验：精密吸取同一供试品溶液10 SymbolmA@ l，注入液相色谱仪中，连续进样6次，测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值，结果RSD为1.14%。⑦稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液10μl，分别在0、0.5、1、2、4、8h内注入液相色谱仪中，测定橙皮苷峰面积，结果表明本品在8h内稳定，RSD1.63%。⑧重复性试验：取同一批样品（批号040101）6份，分别以本法处理进行测定，结果测得橙皮苷平均含量为0.342mg/ml，RSD为1.97%。⑨加样回收率试验：精密量取本品3ml，共6份，置25ml量瓶中，各精密加入橙皮苷对照品溶液（0.0988mg/ml）10ml，并加甲醇稀释至刻度，余下同供试品溶液制备方法制备、测定、计算回收率。详见表1。⑩样品测定：按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，注入液相仪进行测定。详见表3。
　　
　　2.2 硫酸亚铁含量测定：①显色剂及测定波长：以1%盐酸羟胺溶液及0.2%2,2-联吡啶乙醇溶液为显色剂，在此条件下对照品、供试品溶液在约523nm波长处有最大吸收。②对照品溶液的制备：精密称取硫酸亚铁对照品8mg，置100ml量瓶中，加硫酸溶液（1→100）0.5ml和水80ml使溶解，并加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含硫酸亚铁0.08mg）。③标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、8.0ml，分别置25ml量瓶中，加水至10ml，再加1%盐酸羟胺溶液1ml及0.2%2,2-联吡啶乙醇溶液1ml，混匀，加水至刻度，摇匀；以水10ml同法作空白，照分光光度法，在523nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法：精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加硫酸溶液（1→100）0.5ml，并加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，精密吸取3ml，置25ml量瓶中，加水至10ml，再加1%盐酸羟胺溶液1ml及0.2%2,2-联吡啶乙醇溶液1ml，混匀，加水至刻度，摇匀，依法测定吸收度。同时精密量取3ml，置25ml量瓶中，加水至刻度摇匀作空白，照分光光度法（《中国药典》2000年版），在523nm的波长处测定吸收度。从标准曲线上读出供试品溶液中硫酸亚铁的重量，计算，即得。④阴性对照试验：按处方取不含硫酸亚铁的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，按样品测定方法，照分光光度法在523nm波长处测定吸收度，结果在该波长处无吸收，阴性对照对样品测定无干扰。详见图2。⑤线性关系考察：精密称取硫酸亚铁对照品10.35mg，置100ml量瓶中，加硫酸溶液（1→100）0.5ml及水适量使溶解，并加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含硫酸亚铁103.5 SymbolmA@ g）。精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、8.0ml，分别置25ml量瓶中，加水至10ml，再加1%盐酸羟胺溶液1ml及0.2% 2,2-联吡啶乙醇溶液1ml，混匀，加水至刻度，摇匀；以水10ml同法作空白。照分光光度法，在523nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=0.0330526X-0.00738，r=0.9999（n=5），硫酸亚铁在4.14～33.12 SymbolmA@ g/ml范围内样品浓度与吸收度呈良好的线性关系。⑥精密度试验：取同一供试品溶液在523nm波长处测定吸收度，重复测定6次，读取吸收度值，结果RSD为0.23%。⑦稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、0.5、1、2、4、6h时间在523nm波长处测定吸收度值，结果表明，本品在6h内稳定，RSD为0.40%。⑧重复性试验：取同一批样品（批号040101）6份，分别以本法处理进行测定，结果测得硫酸亚铁平均含量为9.12mg/ml，RSD为1.34%。⑨加样回收率试验：精密量取本品25ml置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml，共6份，置100ml量瓶中，各精密加入图2 硫酸亚铁、维血康糖浆、阴性对照光谱图硫酸亚铁对照品约（0.3228mg/ml）15ml及硫酸溶液（1→100）0.5ml，并加水至刻度，余下同供试品溶液制备方法制备、测定，计算回收率，详见表2。⑩样品测定：精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加硫酸溶液（1→100）0.5ml，并加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，精密吸取3ml，置25ml量瓶中,加水至10ml，再加1%盐酸羟胺溶液及0.2%2,2-联吡啶乙醇溶液，混匀，加水至刻度，摇匀；同时精密量取续滤液3ml，置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作空白。
　　
　　照分光光度法（《中国药典》2000年版），在523nm的波长处测定吸收度。从标准曲线上读出供试品溶液中硫酸亚铁的重量，计算，即得。详见表3。
　　
　　
　　
　　3 讨论
　　
　　本品为液体制剂，参考文献［1］中橙皮苷的含量测定方法采用甲醇作为稀释溶剂，并对稀释倍数进行了考察。结果显示稀释5倍的供试品溶液的峰面积比较适中，且分离效果较好，无干扰，故确定稀释5倍制备供试品溶液。参考《中国药典》2000年版复方皂矾丸制剂项下硫酸亚铁含量测定方法，采用分光光度法测定本制剂中硫酸亚铁的含量。规定硫酸亚铁含量误差为标示量的85%～115%，即每1ml含硫酸亚铁应为8.5～11.5mg，10批样品均符合规定。
　　
　　4 参考文献
　　［1］国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编•中成药地方标准上升为国家标准部分（内科肺系2分册）［S］.2002：470.
　　收稿日期 2010-11-22

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