六味顺激胶囊对肝郁脾虚型肠易激综合征模型大鼠内脏敏感性及五羟色胺水平的影响

来源:用户上传      作者: 邓桂球　张蓓　张喆　陈飞燕　劳梓钊　李耿　吴庆光　程宏辉

　　摘要：目的 观察六味顺激胶囊对肝郁脾虚型肠易激综合征（IBS）大鼠的生存状态、内脏敏感性、五羟色胺（5-HT）水平的影响，探讨其作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和六味顺激胶囊高、中、低剂量组，采用番泻叶结合束缚的方法复制肝郁脾虚型IBS大鼠模型，造模后第2日，各给药组给予相应药物，每日1次，连续2周。观察肝郁脾虚型IBS大鼠生存状态、内脏敏感性，测定血清及下丘脑5-HT含量。结果 与模型组比较，六味顺激胶囊高、中、低剂量组大鼠体质量增加（P<0.05），泄泻、神态倦怠、皮毛散乱、脾气暴躁、易怒等症状改善，内脏敏感性显著降低（P<0.01），血清及下丘脑5-HT含量显著降低（P<0.01）。结论 六味顺激胶囊能显著改善肝郁脾虚型IBS模型大鼠的生存状态及肠道功能紊乱状态，其可通过调节大鼠5-HT水平发挥治疗作用。
　　关键词：六味顺激胶囊；肠易激综合征；内脏敏感性；五羟色胺；大鼠
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.08.013
　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）08-0046-03
　　肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）属于胃肠功能紊乱性疾病，其发病机制至今尚未明了，在治疗上还没有理想的方法，现多处于对症治疗阶段。目前已知的相关机制包括胃肠道动力和肠平滑肌功能障碍、应激、胃肠激素分泌异常、脑-肠轴学说等[1]。六味顺激胶囊（原名康泰胶囊）是广州中医药大学脾胃研究所周福生教授治疗IBS的经验方，具有疏肝健脾、理气止痛的作用。本研究采用番泻叶灌胃加束缚法复制肝郁脾虚型IBS大鼠模型，观察六味顺激胶囊对IBS大鼠生存状态、内脏敏感性、血清和下丘脑五羟色胺（5-HT）水平的影响，探讨其作用机制。
　　1 实验材料
　　1.1 动物
　　SPF级SD大鼠60只，雌雄各半，体质量180～220 g，广州中医药大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK（粤）2013-0020。
　　1.2 药物
　　六味顺激胶囊，0.37 g药粉/粒，4.1 g原药材/g药粉，广州松山湖臻德生物医药科技有限公司提供，批号20130901；匹维溴铵片（得舒特），法国苏威制药生产，批号627944；番泻叶，购于广东省中医院，康美药业股份有限公司生产，批号13060244。
　　1.3 主要试剂与仪器
　　5-HT酶联免疫吸附试剂盒，Bule Gene，批号20131223；水合氯醛，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20120305。FSH-2A高速匀浆机，昆山隆源化工有限公司；RT-2100C酶标仪，深圳雷杜公司；CT14RD型离心机，上海天美科仪器有限公司。
　　2 实验方法
　　2.1 番泻叶水煎剂的制备
　　称取100 g番泻叶药材粗粉，加入8倍量的水，煎煮30 min，过滤，减压浓缩，使药液浓度以原药材计含番泻叶0.4 g/mL。
　　2.2 分组、造模与给药
　　将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组（20 mg/kg）和六味顺激胶囊高（6.06 g/kg）、中（3.03 g/kg）、低（1.52 g/kg）剂量组，每组10只。除正常组外，其余各组大鼠制备肝郁脾虚型IBS大鼠模型[2]：分别灌胃0.4 g/mL番泻叶煎剂，给药体积10 mL/kg；灌胃1 h，用宽透明胶带束缚其肩部、前肢及胸部，限制大鼠用前肢搔抓头面部，但不限制其活动，束缚时间为1 h。连续2周。造模完成后，阳性药组给予匹维溴铵溶液灌胃，六味顺激胶囊高、中、低剂量组分别给予不同剂量的六味顺激胶囊溶液灌胃，给药体积为10 mL/kg，正常组和模型组给予等量生理盐水。每日1次，连续2周。
　　2.3 指标评价
　　2.3.1 一般情况观察 实验期间观察各组大鼠行为学、大便性状、精神状态、体质量等变化。
　　2.3.2 内脏敏感性评估 利用大鼠腹部回缩反射 （AWR）测定方法[3]，将血压计、针管与自制指套气囊用三通管连接，用针管向气囊内打气时可以在血压计上读出气囊内压力。大鼠乙醚麻醉，将石蜡油润滑后的气囊经肛门插入约5 cm，用胶布把导管和大鼠尾巴根部缠在一起，固定气囊。大鼠苏醒后，将其放在特制的透明塑料笼内，大鼠在此笼内不能转身。待大鼠适应环境15 min，逐渐打气扩张肠道，分别观察引起大鼠腹部抬起以及背部拱起的压力阈值，每一阈值重复测定3次，数据取均值。
　　2.3.3 血清及下丘脑五羟色胺水平检测 内脏敏感性评估后，将大鼠用10%水合氯醛麻醉（麻醉剂量0.35 mL/100 g），剖腹，腹主动脉采血，4 ℃、3500 r/min离心10 min，取上清液，-20 ℃冻存。按照试剂盒说明书检测。取下丘脑称重，加9倍量冷生理盐水（生理盐水的体积为下丘脑质量的9倍），10 000 r/min研磨制成10%组织匀浆，4 ℃、2000 r/min离心10 min，取上清液，-20 ℃保存。按照试剂盒说明书检测。
　　3 统计学方法
　　采用SPSS17.0统计软件进行分析。各组数据均以―x±s表示，多组间比较用方差分析，方差齐性时组间两两比较用LSD法，方差不齐时用Dunnett T3法。P<0.05表示差异有统计学意义。
　　4 结果
　　4.1 六味顺激胶囊对大鼠生存状态的影响
　　4.1.1 一般状态 造模前各组大鼠精神状态良好、毛色光泽、活泼好动，造模大鼠出现大便次数增多、泄泻、神态倦怠、皮毛散乱无光泽、扎堆或蛰伏在饲养笼角落、脾气暴躁、容易被激怒等症状。给予六味顺激胶囊、匹维溴铵片干预治疗后，大鼠精神状态不断好转，大便恢复正常，接近正常组。 　　4.1.2 体质量 造模前各组大鼠体质量相近（P>0.05）；造模后，与正常组比较，其余各组大鼠体质量显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠体质量均显著升高（P<0.05）。结果见表1。
　　4.2 六味顺激胶囊对大鼠内脏敏感性的影响
　　与正常组比较，模型组大鼠抬腹和拱背的压力阈显著降低（P<0.01），说明造模大鼠内脏敏感性显著升高；与模型组比较，六味顺激胶囊高、中、低剂量组大鼠抬腹和拱背的压力阈显著升高（P<0.01），提示六味顺激胶囊对模型大鼠内脏敏感性有改善作用。结果见表2。
　　表1 各组大鼠不同时点体质量比较（―x±s，g）
　　组别 只数 造模前 造模后 给药后
　　正常组 10 184.2±15.09 254.3±23.97 311.3±35.17
　　模型组 10 183.1±16.22 206.7±14.80** 232.4±14.35**
　　阳性药组 10 182.6±17.10 201.5±13.98** 263.3±21.09**##
　　高剂量组 10 184.3±18.39 204.4±13.85** 264.9±21.76**##
　　中剂量组 10 184.7±17.28 204.3±13.05** 260.3±16.94**##
　　低剂量组 10 185.1±16.68 205.2±12.57** 255.2±16.81**#
　　注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01（下同）
　　表2 各组大鼠内脏敏感性比较（―x±s，mm Hg）
　　组别 只数 抬腹 拱背
　　正常组 10 52.15±5.68 65.14±5.98
　　模型组 10 32.24±2.49** 47.81±3.75**
　　阳性药组 10 49.32±5.58## 66.08±2.76##
　　高剂量组 10 48.26±4.18*## 63.83±2.21##
　　中剂量组 10 45.97±3.41**## 62.26±1.58##
　　低剂量组 10 44.73±2.20**## 59.72±4.00**##
　　4.3 六味顺激胶囊对大鼠五羟色胺含量的影响
　　与正常组比较，模型组大鼠5-HT含量显著增加（P<0.01）；与模型组比较，六味顺激胶囊高、中、低剂量组大鼠5-HT含量显著降低（P<0.01），提示六味顺激胶囊对模型大鼠血清和下丘脑5-HT水平有下调作用。结果见表3。
　　表3 各组大鼠血清和下丘脑5-HT含量比较（―x±s，ng/L）
　　组别 只数 血清 下丘脑
　　正常组 10 99.82±11.48 54.93± 6.62
　　模型组 10 138.23±16.91** 75.37± 7.95**
　　阳性药组 10 103.07±16.91## 52.30± 7.21##
　　高剂量组 10 102.70±13.67## 54.90±10.77##
　　中剂量组 10 109.33±17.37## 58.89±10.89##
　　低剂量组 10 115.99±18.90## 61.93±11.44##
　　5 讨论
　　IBS是一种以腹泻、腹痛等为主要特征的慢性功能性胃肠道疾病。根据罗马Ⅲ标准，可分为便秘型、腹泻型、混合型、不定型4种亚型，其中以腹泻型IBS即肝郁脾虚型最为常见。六味顺激胶囊由白芍、白术、防风、延胡索、首乌藤等中药组成。其中白芍缓急止痛和柔肝，白术益气健脾燥湿而扶土，为君药；防风渗湿止泻，为调理肝脾之要药，延胡索活血、行气、止痛，为臣药；首乌藤养血安神，祛风通络为佐药。诸药合用共奏疏肝健脾、理气止痛之功。现代研究表明，较小剂量白术水煎液对小鼠回肠平滑肌收缩有轻度抑制作用，较大剂量加强收缩，并呈量效关系[4]。白芍醇提液对二甲苯致小鼠耳肿胀以及醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加均有一定的抑制作用，显著降低光热法致痛小鼠的痛阈值，延长醋酸致小鼠扭体反应潜伏期以及扭体次数[5]。防风具有解热、镇痛、抗炎作用[6]。胡氏[7]研究表明，延胡索乙素可加强脑干下行痛觉调制系统的抗痛功能而具有显著镇痛效果。本研究通过番泻叶结合束缚法复制肝郁脾虚型IBS模型，发现模型组大鼠体质量增长缓慢，出现泄泻、神态倦怠、皮毛散乱、少动、易怒等症状，大鼠内脏敏感性升高（P<0.01），造成与人类IBS极为相似的肠道功能紊乱状态；六味顺激胶囊各剂量组均可增加模型大鼠体质量（P<0.05），改善其泄泻、神态倦怠、皮毛散乱等症状，降低模型大鼠内脏敏感性（P<0.01）。
　　5-HT是广泛分布于中枢神经系统、胃肠道及外周血液中的一种单胺类神经递质，是参与调节胃肠道运动和分泌功能的重要神经递质，95%来源于肠道黏膜层的嗜铬细胞。5-HT信号系统异常可导致胃肠道动力及分泌功能异常、内脏高敏感性，与慢性便秘、肠易激综合征及腹泻等胃肠道功能性疾病[4]。本研究发现，肝郁脾虚型IBS大鼠血清和下丘脑中的5-HT含量较正常组均显著增加（P<0.01），六味顺激胶囊高、中、低剂量组大鼠血清及下丘脑中5-HT含量较模型组均显著下降（P<0.01），说明六味顺激胶囊具有调节模型大鼠体内5-HT含量的作用，从而产生治疗效果。
　　参考文献：
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　　[2] 徐海珍，谢建群，吴大正，等.温中健脾方对腹泻型肠易激综合征大鼠下丘脑及结肠黏膜5-HT表达的影响[J].上海中医药大学学报，2009， 23（3）：29-32.
　　[3] 王微.肠安合剂干预肝郁脾虚型IBS病证结合大鼠模型的效应评价[D].北京：中国中医科学院，2013.
　　[4] 马晓松，樊雪萍，陈忠，等.白术对动物胃肠运动的作用及其机制的探讨[J].中华消化杂志，1996，16（5）：261-264.
　　[5] 欧阳勇.白芍醇提液抗炎镇痛作用研究[J].数理医药学杂志，2008， 21（5）：600-602.
　　[6] 张宝娣，万山红.防风的化学成分与药理研究近况[J].中医药信息， 2003，20（4）：23.
　　[7] 胡江元.左旋四氢巴马汀镇痛作用的机制研究[D].上海：中国科学院上海药物研究所，1999.
　　（收稿日期：2014-03-25；编辑：华强）
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