高效液相色谱法测定米氮平片中米氮平的含量
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摘 要：目的：建立米氮平片中米氮平含量的高效液相色谱法。方法：采用钻石C18反相柱为色谱柱，流动相为甲醇-超纯水，将流速控制为0.8ml/min，检测中将波长定为294nm，色谱柱的温度为40℃，进样过程中将进样量控制在5μl左右，对不同的流动相分配比例对米氮平色谱表现的具体影响加以研究。结果：米氮平和片剂辅料和其他杂志的分离效果非常好，分离方法采用的定量测定下陷是0.2μg/ml。线形的范围为1.0-100.0μg/ml，平均的回归率为95.05%，RSD为0.88%。结论：高效液相色谱法在测定米氮平含量的过程中可以体现出非常大的优势，其准确性高，速度快，灵敏度强，可以广泛的使用在米氮平含量的测定工作中。
关键词：米氮平；含量测定；反向高效液相色谱法
米氮平（MTZ）是一种临床上比较常见的抗抑郁类药物，在应用的过程中，其具有非常明显的耐受性作用，按照治疗剂量服用该药物对心血管系统不会构成十分不利的影响。在测定方法上，在国内还没有非常全面的文献报道。国外已经有一定的研究成果。采用传统的测定方法，操作十分复杂，针对这一问题，我们选择反相高效液相色谱法对米氮平含量测定进行全面的研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
惠普（HP）AgiLent1100高效液相色谱仪（HPLC），配二级管阵列紫外检测器（DAD）G1315B，G1313A自动进样器，G1311A自动调配泵，G1316A可调柱温恒温箱，AgiLent色谱化学工作站，旋涡混合器（上海医科大学仪器厂），瑞士SARTnRIUS电子天平，美国MICR012-24高速离心机，CSF-1A超声波发生器。
1.2 药品和试剂
MTZ（南京欧加农，含量>98%和MTZ片（南京欧加农，批号：405721/400680，405721/400681，405721/400682）。甲醇（美国迪马公司）色谱级，水为超纯水，其余均为分析纯。
1.3 对照品和内标溶液
精确称取米氮平100.0mg。加入适量的甲醇溶液，将其定容为100ml，在4℃的温度条件下保存，了在使用之前还要使用甲醇对其进行稀释，西式的浓度要根据实际的需要确定。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
美国迪马公司的钻石C18反相柱<250mmX4.6mm，5μm），流动相为甲醇一超纯水<90：10，V/V），流速0.8mL/min，柱温400℃，UV检侧波长294nm，满标吸光度值（AUFS）为0.01，进样量为5uL。
2.2 测定样品处理
取出10片米氮平，将其称重并研细处理，称取适量的米氮平粉末，质量大约为25mg的米氮平，将其放置在容积为50ml的容量瓶当中，加入适量的甲醇溶液，采用超声波震荡，时间为15分钟，使其完全溶解，加入甲醇，使其稀释到刻度的位置，之后要摇匀溶液，采用直径为0.45μm的微孔滤膜进行过滤处理，取出容积为1.0ml的滤液，将其放在容积为10ml的容量瓶当中，加入适量的甲醇稀释到刻度的位置，取出5μl进行进样处理。
2.3 线形关系
精密吸取2mg/mL对照品贮备液0.05，0.1、0.25、0.5、1.0，2.0、3.0、4.0，5.0mI.分别于10mI一容量瓶中，加甲醇稀释到刻度摇匀，得浓度为1，2，5，10.20，40，60，80，100mg/mL，的对照品系列溶液。分别取该系列溶液5μl，进样，测得峰面积。以峰面积（F）与其对应的浓度（C）进行线性回归，得回归方程为C=1.85X10-1F+9.65X10-1r=0.9995（n=9）。结果显示MTZ在1一100mgmL范围内线性关系良好。在该条件下，当信噪比CS/N>3时，最低检测限为0.2mg/mL。出峰时间为6.2min。
2.4 加样回收率
采用药用天平精确称取米氮平片中已经制成粉末的药剂0.05g，加入浓度为0.2mg/ml的米氮平储备液，容积为4ml，按照测定样品的制备方法加以操作，最终得到测定样品，取出5μl的样品做进样处理。结果如表1所示。
2.5 精密度试验
按照2.2项下的操作方法来制备测定样品，在当天或者是隔天进行连续测定，测定的次数为5次，之后分别对精密度进行计算，结果是日内的RSD为1.6%，日间的RSD为1.4%。
2.6 室温稳定性试验
在试验中要针对浓度为25g/ml的对照品溶液进行测定，测定的时间间隔为1次/h，；对其连续测定6次，对其稳定性进行观察，结果显示，RSD为4.1%，这也充分的证明对照品溶液在室温条件下具有非常强的稳定性。
2.7 样品测定
取3个不同批次的米氮平片，每一批的数量为10片，按照2.2项下的操作方法进行操作和处理，每批样品测定5次，之后对样品的含量进行计算，计算的结果如表2所示。
表2 样品测定结果（（n=5）
3 讨论
在口服米氮平之后，活性较高的米氮平会被大量的吸收，在服药两个小时以后，血液的浓度达到了峰值，有超过85%的有效成分和血浆充分的结合在一起，平均的半衰期为20-40小时，有时候甚至可以达到65小时，在青年人当中也有半衰期比较短的情况，清除半衰期的治疗中，其比较适合将服用的方法确定为每天一次。血药的浓度会在3到4天之后达到一个较为平稳的状态，之后就不会发生体内聚集的情况。在最佳剂量的范围当中，米氮平的腰带动力学形式呈现为线形，在服用之后，米氮平会被代谢出体外，随着尿液和粪便排出。
本文在波长范围为190-400nm的波长范围之内开展了紫外线扫描活动，发现在205nm和294nm的时候吸收峰完全相同，为了减少检测中可能出现的不利影响，检测的波长选定为294nm，在本文的研究当中选择甲醇：超纯水作为流动相，对其进行了不同比例的试验，发现甲醇：超纯水=90：10的时候出峰的效果比较好，和国外的很多文献相比，操作方法简单，速度更快，重现性好，此外检定结果也较为准确，所以可以当做米氮平的含量测定方法。
高效液相色谱法主要有以下几个特点：
①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。
⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
参考文献
[1]张庆文，许艳艳，时惠麟.米氮平的合成[J].中国医药工业杂志，2006（10）.
[2]陈玉辉.关于米氮平耐受性和安全性的研究综述[J].中国民康医学，2004（12）.
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