布鲁菌Omp31蛋白的多克隆抗体制备与质量检测
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【摘 要】本文以布鲁菌omp31基因作为研究对象，对重组蛋白的免疫原性进行了研究。结果显示：重组Omp31蛋白可以刺激家兔产生抗体，而且，抗体质量较好。
【关键词】布鲁菌；omp31基因；免疫原性；多克隆抗体
布鲁菌是造成布病的直接病原，它可以在人畜之间传播，造成人畜共患疾病[1]。目前，对于布病防治的策略，亚单位疫苗成为了一个新的热点。本文以猪型布鲁菌的omp31基因（全ORF序列）作为研究对象，进行了蛋白质的诱导表达、蛋白纯化、抗体制备与抗体质量检测等研究。
1 材料与方法
1.1 试验材料
含有pGEX-4T-1-omp31重组质粒的大肠杆菌BL21表达菌株：试验前期构建的表达菌株，在实验室低温冰箱保存。
1.2 方法
1.2.1 重组蛋白的诱导表达
将试验前期构建的含有pGEX-4T-1-omp31重组质粒表达菌株进行过夜活化，之后转接于新鲜LB培养基进行转培养4 h，加入IPTG进行诱导表达，结果利用SDS-PAGE检测[2]。
1.2.2 亲和纯化
收集诱导后的表达菌株菌体，利用超声波进行破碎，高速离心之后，将上清液利用GST柱进行亲和纯化[3]。
1.2.3 抗体制备
将纯化得到的重组蛋白作为抗原，与佐剂混合之后注射家兔，制备多克隆抗体，共需注射5次，每次间隔10天[4]。
1.2.4 抗体质量检测
抗体制备结束之后，收集家兔血清，利用western blot方法检测抗体质量[5]。
2 结果与分析
2.1 重组蛋白诱导表达与纯化结果
将重组表达菌株进行诱导表达，离心收集菌体超声波破碎之后，收集上清液进行亲和纯化。SDS-PAGE检测结果显示：重组蛋白正确表达，纯化获得介于43-66.2 kD之间的重组蛋白质，与预期的55.3 kD一致。
2.2 Western blot结果
以纯化获得的重组Omp31蛋白作为抗原，与弗氏佐剂混匀之后，注射家兔制备多克隆抗体，收集血清之后进行western blot检测。结果显示：制备的多克隆抗体可以较好的识别抗原蛋白质，说明重组Omp31蛋白作为抗原的免疫原性良好。
3 讨论
目前，从基因入手研制蛋白类亚单位疫苗成为了一个新的科研热点，针对布病的活菌疫苗存在反毒的现象，更加促进了蛋白质抗原疫苗的研究深度。本论文以猪型布鲁菌的omp31基因作为研究对象，对该基因的表达序列全长进行了重组表达与抗体制备的研究，通过亲和纯化获得了与预期分子量相一致的重组蛋白质，利用其制备的多克隆抗体可以清晰的识别抗原分子，说明重组Omp31蛋白质具有较好的免疫原性，可以作为亚单位疫苗的候选分子进行深入研究。
【参考文献】
[1]史新涛，古少鹏，郑明学，等.布鲁氏菌病的流行及防控研究概况[J].中国畜牧兽医，2010，37（3）：204-207.
[2]Ren Q，Zhou J，Jia YP，et al.Cloning and characterization of Rap GTPase from the Chinese white shrimp Fenneropenaeus chinensis[J].Dev Comp Immunol，2012，36（1）：247-252.
[3]Du ZQ，Ren Q，Zhao XF，et al.A double WAP domain （DWD）-containing protein with proteinase inhibitory activity in Chinese white shrimp，Fenneropenaeus chinensis[J].Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol，2009，154（2）：203-210.
[4]Du ZQ，Li XC，Wang ZH，et al.A single WAP domain （SWD）-containing protein with antipathogenic relevance in red swamp crayfish， Procambarus clarkia[J].Fish Shellfish Immunol，2010，28（1）：134-142.
[5]Li XC，Du ZQ，Lan JF，et al.A novel pathogen-binding gC1qR homolog， FcgC1qR，in the Chinese white shrimp， Fenneropenaeus chinensis[J].Dev Comp Immunol，2012，36（1）：400-407.
[责任编辑：薛俊歌]
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