罗山县2019年高致病性禽流感血清学调查与分析
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禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）传染病。病毒根据血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性不同进行分类，目前，HA分为H1～H16亚型，NA分为N1～N9亚型。由H5、H7亚型毒株引起的疾病称为高致病性禽流感（HPAI），发病急，发病率和病死率可达100%，被世界动物卫生组织（OIE）列为法定通报动物疫病，被我国列为优先防控和重点防范的一类动物疫病。2004年和2017年，我国分别对H5、H7亚型禽流感实行强制免疫和抗体监测，并要求采用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1Re-8株+H7N9H7-Re1株）集中免疫。为了解罗山县高致病性禽流感免疫效果，制定科学合理的免疫程序，开展评价工作，正确判断禽流感防控形势，2019年10月，罗山县畜牧局组织开展本次免疫效果监测，以便提供可靠的基础数据参考。
1、材料与方法
（1）抽样设计抽样设计方法采用先群体抽样再个体抽样。根据《2019年罗山县动物疫病监测与流行病学调查计划》，按照估计免疫抗体阳性率方法，设85%的预期免疫抗体合格率（p），10%的可接受误差（d），在95%的置信水平（CL）下，根据公式N=1.962×p（1–p）/d2计算出抽样场数N=49个，并结合罗山县春秋季强制免疫实际，对11个乡镇随机抽样50个场群开展集中监测。场群内采取系统抽样，依据场群分类不同，在家禽养殖场抽取1440份，活禽交易场所抽取150份，散養户抽取30份，共采集样品1670份。具体抽样设计见表1。
（2）样品采集无菌操作翅静脉采集鸡血液，每只2～3ml，3000r/min离心10～15min，析出血清，做好标记，-20℃保存备检。
（3）检测试剂禽流感H5亚型病毒（Re-8株）血凝抑制试验抗原，批号：2019062;禽流感H7亚型病毒（H7N9株），批号：2019071，以上两种试剂均为哈尔滨维科生物技术开发有限公司产品。
（4）检测方法与判断标准按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2003）中血凝抑制试验（HI）检测H5、H7亚型禽流感免疫抗体。判断标准按照个体HI抗体效价≥24为免疫合格个体，群体免疫抗体合格率≥70%为免疫合格群体，H5和H7群体免疫抗体合格率均≥70%为免疫合格场群。
2、结果
（1）H5、H7亚型禽流感免疫整体情况50个场群中，有32个场群使用重组禽流感（H5+H7）二价灭活疫苗，占场群数量的64.0%（32/50）;H5亚型场群合格率为76.0%（38/50），个体合格率为86.3%（1442/1670）;H7亚型场群合格率为50.0%，个体抗体合格率为59.5%（993/1670）。养殖场的H5、H7亚型群体合格率和个体合格率均高于散养户和活禽交易点，且差异显著（P<0.05）。
（2）使用不同疫苗的场群抗体合格率比较在50个场群中，32个使用（H5+H7）二价灭活疫苗，18个使用其他禽流感类型疫苗和未免疫。比较使用（H5+H7）二价灭活疫苗场群与使用其他疫苗和未免疫场群的H5、H7亚型免疫抗体，可以看出前者个体免疫抗体合格率均大于70%，分别比后者高出27.5%、187.3%，差异极显著（P<0.01）;同时，前者群体合格率也大于未使用的群体合格率，分别高于37.9%、124.8%，差异极显著（P<0.01）。不使用（H5+H7）二价灭活疫苗导致禽流感群体免疫合格率低于70%的风险是使用（H5+H7）二价灭活疫苗的2.6倍（OR=2.6，95%CL：1.1～13.0）。
（3）群间分布家禽种类不同，H5、H7亚型禽流感场个体免疫抗体情况存在差别。鸡和其他禽类（鸭、鹅）全部场群合格率分别为50%和0，无统计学意义。鸡和其他禽类（鸭、鹅）的H5亚型个体合格率分别为86.1%、91.4%，差异不显著（P>0.05）;H7亚型个体合格率分别为62.1%、0，差异极显著（P<0.01）。
（4）空间分布分析罗山县高致病性禽流感空间分布，结果显示，罗山县11个乡镇区域内群体合格率和个体合格率不均衡，存在较大差异。D、F、K乡镇的H5、H7亚型场群合格率和个体合格率均高于70%，占乡镇总数的27.3%（3/11），符合国家要求，但是A、E、H、I和J乡镇的H7亚型免疫抗体检测不到，占乡镇总数的45.5%（5/11）。
3、小结与讨论
高致病禽流感对养禽业危害巨大，我国将高致病性禽流感纳入强制免疫计划，实行H5亚型和H7亚型高致病性禽流感100%免疫。农业部在2017年秋季，要求使用H5+H7二价灭活疫苗替代重组禽流感病毒H5二价或三价灭活疫苗，对家禽实施免疫。
本次检测是在秋季强制免疫21天后进行的抽样抗体检测，从本调查检测数据看，场群免疫密度达不到100%，进一步对抽样检测点调查，主要是对该病重视性不够，部分养禽场户没有按照要求替换使用H5+H7二价灭活疫苗。
4、结论
本次血清学调查结果表明，使用H5+H7二价灭活疫苗免疫可以达到免疫保护水平，效果优于未使用的。建议加大宣传力度，要求家禽养殖场户使用H5+H7二价灭活疫苗，对免疫不合格者进行补免。
（作者单位：464200河南省罗山县动物卫生监督所）
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