正交试验优选暖脐膏醇提工艺

来源:用户上传      作者: 仇凡 李明梅 火跃芳 陈俊

　　[摘要] 目的 优选暖脐膏处方最佳的提取工艺。 方法 采用L9（34）正交试验，以复方中主要药材当归中阿魏酸的含量为考察指标，以乙醇的浓度、用量、提取时间以及提取次数为考察因素，得出最佳的提取工艺。 结果 最终确定的最佳提取工艺为第1次加9倍量75%乙醇，回流提取90 min，第2次加6倍量75%乙醇，回流提取60 min。 结论 该工艺简单方便，稳定性好，可作为工业化生产的参考路线。
　　[关键词] 暖脐膏；当归；阿魏酸；正交实验；提取工艺
　　[中图分类号] R283.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（a）-0123-02
　　
　　Optimization of the extraction technology of Nuanqi Sticking Plaster by orthogonal experiment
　　QIU Fan1 LI Mingmei1 HUO Yuefang1 CHEN Jun2
　　1.Department of Pharmacy, Yancheng Institute of Health Science, Jiangsu Province, Yancheng 224001, China; 2.Nanjing Zhongkang Medicine Technology Corporation, Jiangsu Province, Nanjing 210009, China
　　[Abstract] Objective To optimize the extraction process of Nuanqi Sticking Plaster. Methods The extraction process of Nuanqi Sticking Plaster was optimized by using orthogonal test with the concentration and amount of alcohol, and the extraction time and extraction times was used as factors, with the content of ferulic acid as index. Results The best extraction process of Nuanqi Sticking Plaster was as follows: nine times volume of 75% alcohol were used to extract the materials the first time for 90 minutes and six times volume of 75% alcohol for the second time for 60 minutes. Conclusion The above extraction procedure is feasible and served as a theoretic reference for the industrialized production.
　　[Key words] Nuanqi Sticking Plaster; Radix angelicae sinensis; Ferulic acid; Orthogonal test; Extraction technology
　　
　　暖脐膏（橡胶膏）是一种传统的中药处方，收载于中华人民共和国卫生部部颁标准第15册[WS3-B-3010-98]。它由当归、白芷、乌药、小茴香、八角茴香、木香、香附等13味中药组成，具有温里散寒、行气止痛的功效，常用于寒凝气滞、少腹冷痛、脘腹痞满、大便溏泻等症状。其制法为取处方中除乳香、没药、麝香外，其余当归等10味药材，用75％～85％乙醇回流提取，浓缩得浸膏；将乳香、没药、麝香及上述浸膏加入由橡胶、松香等制成的基质中，制成涂料[1]。笔者在工艺研究中，不拟对其基本工艺进行改变，但拟进一步细化。原暖脐膏标准中提取工艺未明确所用乙醇的浓度、乙醇的用量、提取的时间以及提取次数，本项研究以当归中阿魏酸的提取量为指标，通过实验确定了乙醇的浓度、乙醇的用量、提取时间以及提取次数，完善了提取工艺。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　Agilent 1100液相色谱仪（美国Agilent公司），Mettler AE240电子天平（10万分之一），SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏信达仪器厂），HH-6恒温水浴锅（国华电器有限公司）。
　　1.2 试药
　　乙醇（分析纯），甲醇（TEDIA，USA，色谱纯），水（重蒸馏，临用前制备），醋酸（上海化学试剂有限公司，分析纯），阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0733-9910）；当归、白芷、乌药、小茴香、八角茴香、木香、香附、乳香、母丁香、肉桂、沉香均购于江苏省淮阴药材采购供应站。
　　2 方法与结果
　　2.1 正交试验的设计[2-4]
　　 以当归中阿魏酸的提取量为考察指标，选用L9（34）正交试验，考察药材提取所用乙醇的浓度、乙醇的用量、提取的时间以及提取次数，各因素水平见表1。
　　
　　表1 提取工艺的因素水平
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　按处方量配比平行称取药材9份（58 g/份），依据表1具体试验参数进行试验。
　　2.2 暖脐膏醇提取部分得膏率的测定方法
　　分别精密吸取50 mL醇提取液，置于精密称重的洁净蒸发皿中，水浴挥至近干，加入精密重量的柱层析硅胶，搅匀，低温鼓风干燥至恒重，置干燥器中冷却后迅速称定重量，按下式计算：干浸膏得率＝（W1/W）×100％。式中，W1为50 mL提取液中干浸膏质量；W为每份药材的质量。
　　2.3 阿魏酸含量的测定[5-8]
　　2.3.1 色谱条件 Agilent KR100-5 C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水-醋酸（25.0∶75.0∶0.7）；流速：1 mL/min；检测波长为280 nm；柱温：30℃；进样量：5 μL；理论塔板数按阿魏酸峰计算不低于2 000。
　　2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加流动相溶解制成每1 mL含49.8 μg阿魏酸的溶液，即得。
　　2.3.3 供试品溶液的制备 分别将9份醇提液浓缩并定容至200 mL量瓶中，分别取25 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
　　2.3.4 线性关系的考察 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成浓度分别为20.02、33.30、48.62、65.77、82.40、95.25 μg/mL的溶液，分别精密称取上述各对照品溶液5 μL，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积。以对照品溶液进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，计算得回归方程为Y=1.54X×106＋3.32×105（r = 0.999 6）。表明阿魏酸进样量在0.10～0.47 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
　　2.3.5 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，按《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D法[9]测定。

　　2.4 正交试验分析
　　根据得到的阿魏酸含量和得膏率结果，按下式计算综合评分：综合评分=（阿魏酸含量/最高阿魏酸含量）×100×0.7+（得膏率/最高得膏率）×100×0.3。正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。
　　
　　表3 方差分析结果
　　
　　
　　
　　
　　
　　 注：F0.05（2，2）=19.0
　　
　　根据数理统计理论，笔者对实验数据进行计算和分析。从表2和表3可知，影响提取效果的因素大小依次为：D>B>C>A，较主要的因素是D，即提取次数对阿魏酸提取量和得膏率有显著影响，其次是B、C、A。水平优势为A1>A3>A2，B2>B1>B3，C3>C2>C1，D2>D1>D3，因此最优提取工艺为A1B2C3D2。即加9倍量75%乙醇，提取90 min，再加6倍量75%乙醇，提取60 min。
　　2.5 验证试验
　　为了验证最佳工艺的合理性，按A1B2C3D2条件制备暖脐膏配方药材3批，测定提取液得膏率以及阿魏酸的含量。结果各项指标RSD均小于7%，表明该工艺较稳定，重现性好。并且该项试验结果较正交试验结果好，表明优化条件可行，故确定最佳工艺为A1B2C3D2。见表4。
　　
　　表4 最佳工艺条件验证结果
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　3 讨论
　　笔者在预实验时按照中药材提取的常规操作，将药材浸泡在溶剂中，为了减小这一操作对实验结果的影响，故将浸泡时间一致定为30 min。综合考虑该剂型的需要，将得膏率作为指标之一，最后以综合评分的形式评价提取工艺。另外该方剂中的有效成分以小分子化合物居多，且有挥发性，所以在操作过程中需要注意实验环境的温度和湿度，以减小实验误差。实验证明，分次提取的效果最好，但是提取的时间均较长，这也是和实验室常规提取小分子物质如挥发油成分的情况是吻合的。
　　[参考文献]
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　　[2] 谢秀琼，周淑芳，韩丽，等．现代中药制剂新技术[M].北京：化学工业出版社，2004：348-351.
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　　[9] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录37.
　　（收稿日期：2011-11-14 本文编辑：卫 轲）

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