反相高效液相色谱法测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶
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作者: 江忠远 张育乐 曾启华
摘要：建立了用反相高效液相色谱测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶的方法。结果表明，磺胺二甲基嘧啶能得到较好地分离，用外标法定量，在０．８～１５．０ μｇ／ｍＬ范围内与峰面积成良好线性关系，相关系数为０．９９９ ０，检测限为１２．６ ｎｇ／ｍＬ，方法可用于柑橘中磺胺二甲基嘧啶的测定。
关键词：反相高效液相色谱；柑橘；磺胺二甲基嘧啶
中图分类号：Ｏ６５７．１７＋２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）07－1456-02
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe ｉｎ Ｃｉｔｒｕｓ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ Ｐｈａｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ
Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＪＩＡＮＧ Ｚｈｏｎｇ－ｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ－ｌｅ，ＺＥＮＧ Ｑｉ－ｈｕａ
（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ， Ｚｕｎｙｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｚｕｎｙｉ ５６３００２， Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ－ＨＰＬＣ） ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ． Ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ method ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．８～１５．０ μｇ／ｍＬ（r＝０．９９９ ０） ｆｏｒ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗas １２．６ ｎｇ／ｍＬ ｆｏｒ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe． Ｆｉｎａｌｌｙ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎｎｕｍ ｉｎ ｃｉｔｒｕｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）； ｃｉｔｒｕｓ； ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe
随着现代医药科学的不断发展，在畜、禽、牧、水产及农产品等领域应用药物对动物进行预防疾病和治疗，以及促动物生长、提高饲料转化率等方面日益普遍。磺胺二甲基嘧啶（Sｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe，ＳＭ２）是抗感染药剂，它是畜牧生产中应用最广泛的磺胺类药物之一。磺胺二甲基嘧啶具有抗菌力强、毒性小、吸收迅速完全，在畜禽及农产品体内药效持续时间长等特点。但过量的药物残留会损害人体健康，已发现磺胺二甲基嘧啶可诱发啮齿动物甲状腺增生或肿瘤［１］。近年来也有将此药物用于蔬菜、水果中进行杀菌的报道。
目前，磺胺类药物常用的检测方法为ＨＰＬＣ法［２－１１］，主要用于动物性食品中的检测，但果蔬中磺胺二甲基嘧啶的检测尚未见报道。本研究采用超声提取，反相高效液相色谱法测定了柑橘中磺胺二甲基嘧啶的残留量。该方法简便、快速、前处理过程简单、重现性好、方法的准确度和灵敏度均符合农药残留检测要求，且费用较低，适合作为一种常规的残留检测方法。
１ 材料与方法
１．１ 仪器
ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色谱仪（日本岛津公司）， 配备ＳＰＤＭ－２０Ａ检测器、ＳＩＬ－２０Ａ自动进样器、ＣＢＭ－２０Ａ系统控制器；电子天平（上海越平科学仪器有限公司）；微孔过滤装置（北京莱伯泰科学仪器有限公司）；ＳＹ３２００超声波清洗器（上海声源超声波仪器设备有限公司）；ＤＨＧ－９０７０Ａ型新型电热恒温鼓风干燥箱（宁波江南仪器厂）；０４１２－１离心机（上海分析机械厂）。
１．２ 试剂
磺胺二甲基嘧啶（１００ μｇ／ｍＬ，农业部环境保护科研检测所）；无水硫酸钠；甲醇（分析纯）；乙腈（色谱纯）；去离子水。所有溶液使用前均由０．４５ μｍ孔径的滤膜过滤。
１．３ 色谱条件
检测波长：２７０ ｎｍ；色谱柱：Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ＯＤＳ（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， 日本岛津公司）；流动相：甲醇∶乙腈∶水（含２％乙酸）＝１５∶１５∶７０；流速：０．６ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５ ℃；进样量：２０ μＬ。
１．４ 样品溶液的配制
标准储备液的配制：取１ ｍＬ磺胺二甲基嘧啶（１００ μｇ／ｍＬ）的标准溶液置于２５ ｍＬ的容量瓶中，用２５％甲醇定容至刻度，制成浓度为４ μｇ／ｍＬ的标准储备液。
标准使用液的配制：用４ μｇ／ｍＬ的标准储备液配制标准使用液系列，用流动相定容至刻度，使其成为一系列的标准使用液。
１．５ 提取和净化
准确称取经捣碎柑橘汁液１０．０００ ０ ｇ，置于５０ ｍＬ棕色容量瓶中，加入３０ ｍＬ提取液（０．１ ｍｏｌ／Ｌ的盐酸溶液∶甲醇＝３∶７），将容量瓶置于超声波仪器中超声提取３０ ｍｉｎ，摇匀，用提取液定容至刻度。再加入２ ｇ无水硫酸钠，２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心２ ｍｉｎ，取上清液过０．４５ μｍ有机滤膜待测。
２ 结果与分析
２．１ 吸收波长的选择
利用二极管阵列检测器扫描磺胺二甲基嘧啶标准溶液，得到磺胺二甲基嘧啶的最大吸光度出现在２７０ ｎｍ处，且样品中杂质在该波长时对测定无影响，且色谱峰形较好。因此，选择２７０ ｎｍ作为最适检测波长。
２．２ 流速的影响
随着流速增加，各峰的保留时间均减少，在０．４～０．８ ｍＬ／ｍｉｎ均能很好分离，但流速在０．５ ｍＬ／ｍｉｎ以下时，色谱峰逐渐扩展，检测灵敏度下降。流速在０．６ ｍＬ／ｍｉｎ以上时，磺胺二甲基嘧啶峰与相邻峰重叠，分离度下降。因此选择流速为０．６ ｍＬ／ｍｉｎ。
２．３ 线性方程和检出限
用配制的系列磺胺二甲基嘧啶标准溶液在０．８～１５．０ μｇ/ｍＬ浓度范围内在上述色谱条件下进行测定，得到线性方程为ｙ＝１．３３０×１０４ｘ－４．０２４，Ｒ２＝０．９９９ ０。以７份样品分析结果的标准偏差的３倍计算，方法的检出限为１２．６ ｎｇ／ｍＬ。磺胺二甲基嘧啶标准色谱图见图１。
２．４ 方法的精密度和回收率
在选定的色谱条件下进行样品添加回收试验，取柑橘样品３份，按０．１０、０．５０和１．００ ｍｇ／ｋｇ ３个添加水平进行回收试验，计算回收率和相对标准偏差（表１）。
２．５ 实际样品测定
应用本方法对市场上购买的１８个柑橘样品进行分析，结果表明， ６个样品中检出磺胺二甲基嘧啶， 含量在１．２５～３．７８ μｇ／ｋｇ之间。柑橘样品色谱图见图２。
３ 结论
建立了符合农药残留分析要求的柑橘中的磺胺二甲基嘧啶残留的分析方法，本方法简单、快速，具有很高的灵敏度与精密度，重现性好，回收率稳定。
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