食品中添加剂山梨酸\苯甲酸\脱氢乙酸\糖精钠同时检测方法探讨

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　　摘要：本文研究应用紫外检测器，反相C18柱，以甲醇∶乙酸铵溶液（0.02mol/L）（8∶92）作为流动相，通过230nm波长检测，同时检测食品中山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、糖精钠食品添加剂，提高了试验的效率和可操作性。
　　关键词：食品添加剂检测高效液相色谱
　　
　　1、前言
　　食品添加剂是食品工业的基础原料，对食品的生产工艺和安全卫生都起到至关重要的作用。食品添加剂的种类越来越多，但滥用以及超标准使用添加剂，都会给消费者的健康带来损害.食品添加剂的检测，目的在于监督和保证正确合理地使用食品添加剂。近年来高效液相色谱法也已经被广泛研究，但均只能对该单一物质进行检测， 如果沿用国家标准逐一分开检测，不但增加了工作成本，而且降低了工作效率，在对食品质量的监督抽查中，会涉及传统防腐剂山梨酸、苯甲酸，甜味剂糖精钠等食品添加剂的检测.本方法探讨了用高效液相色谱法同时对山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、糖精钠的检测。
　　2、材料和方法
　　2.1主要仪器及试剂
　　液相色谱仪：UV98-1型，配有紫外检测器,北京温分分析仪器；紫外可见分光光度计：TU-1810，北京谱析通用仪表有限责任公司.离心机：5000r/min，TGL-16A高速离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司；甲醇：色谱纯，国药集团；乙酸铵：优级纯，国药集团；氢氧化钠：优级纯，科密欧试剂；
　　标准储备液(1 g/L):分别准确称取0.100 0 g山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸,用10mL的氢氧化钠溶液(0.5 mol/L)溶解,用超纯水定容至100 mL
　　2.2样品处理
　　2.2.1固态食品
　　称取粉碎5.00 g(准确到0.1 mg)试样于25 mL的比色管中,加10 mL超纯水,超声提取10min,再振荡提取10 min后用超纯水定容至25 mL,摇匀. 蛋白质含量高的样品在定容前需加人少量亚铁氰化钾及乙酸锌以沉淀蛋白质，以4000 r/min速度离心5min,上清液经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,供高效液相色谱测定。
　　2.2.2液态食品
　　直接称取10.00 g(准确到0.1 mg )液态食品于25 mL的比色管中(如含有二氧化碳微温搅拌除去,如果含有乙醇,水浴加热除去),超声提取10 min,再振荡提取10 min后用超纯水定容至25 mL摇匀，蛋白质含量高的样品在定容前需加人少量亚铁氰化钾及乙酸锌以沉淀蛋白质. 以4000 r/min速度离心5min,上清液经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,供高效液相色谱测定。
　　2.3色谱条件
　　色谱柱：Kmmasil-C18-5um 4.6×250mm；流动相：甲醇-乙酸铵溶液（0.02mol/L）（8:92）；流速：0.8mL/min；检测器：紫外检 测器，230nm波长， 进样量：100uL。
　　2.4工作曲线
　　将标准储备液用超纯水配制成质量浓度为10、20、50、100、200、300 mg/L的混合标准溶液系列,经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,按照仪器工作条件,用高效液相色谱仪测定。
　　2.5样品测定
　　处理后的样液经水系0.45μm微孔滤膜过滤后,按照仪器工作条件,在高效液相色谱仪上测定,以保留时间定性,峰面积定量。
　　2.6结果计算
　　样品中添加剂含量（g/kg）=C×V×10-3/m式中，C为样品中添加剂浓度（mg/L），V为样液体积（mL），m为样品质量（g）。
　　3、结果
　　3.1流动相的选择
　　采用甲醇和0.02 mol/L乙酸铵水溶液做流动相,流速为0.8 mL/min。实验结果表明在甲醇-乙酸铵溶液体系里,随着甲醇在流动相中比例增大(从5%逐渐升至20%),4种添加剂保留时间都缩短。当甲醇在流动相中比例为8%时, 4种添加剂分离效果最好；改变流动相流速发现:随着流速降低,4种添加剂保留时间都增长,当流速为0.8 mL/min时,保留时间和灵敏度都比较理想。
　　3.2样品的提取
　　防腐剂、甜味剂都是以易溶于水的盐的形式添加到食品当中的，所以本方法采用直接用水溶解样品并加以提取，减少使用有机物方法提取的污染，重要是保证了样品的高回收率。
　　3.3波长的选择
　　用紫外检测器.通过波长扫描发现,波长在214 nm附近,只有糖精钠有良好的吸收,波长在293 nm附近,只有脱氢乙酸有良好的吸收,而波长为230 nm时山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸均有良好的吸收。
　　3.4标准曲线及线性范围
　　按照工作曲线方法配制6种不同浓度的混合标准溶液,按照色谱条件测定，结果表明:山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、糖精钠的浓度在0~300 mg/L内呈线性关系,线性回归方程及相关系数见表1.
　　
　　3.6重现性及回收率
　　分别称取同一样品（n=3），按本方法加标测定，加标回收率为98.1%~102.7%结果见表2.
　　
　　3.7检出限
　　检出限为最低相应值（3倍仪器噪音水平）与绝对相应值的比值.经实验证明，该法检测山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸，糖精钠的检出限分别为0.15、0.25、0.55、0.22 mg/kg.
　　4、结论
　　食品添加剂的检测，一直以来都是各个检测机构重要的检测项目.在优化高效液相色谱条件下,成功地对山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸食品添加剂进行同时检测，实验结果表明, 高效液相色谱方法快速、简便、灵敏度高、重现性好，值得在食品日常监督检测中推广应用。
　　参考文献:
　　[1] GB/T5009.29- 2003.食品中山梨酸、苯甲酸的测定.
　　[2] GB/T23495-2009.食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法
　　[3] GB/T 23377-2009.食品中脱氢乙酸的测定高效液相色谱法.
　　

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