化妆品中种α-羟基酸检测方法研究
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化妆品中5种α-羟基酸检测方法研究
陈雪君（东莞出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心，广东 东莞 523900）
摘 要：建立高效液相色谱法测定化妆品中5种α-羟基酸。方法：流动相为0.1mol/L磷酸二氢铵缓冲溶液，磷酸调pH为2.65，用带有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪，Inertsil?ODS-SP（4.6×250mm，5um）色谱柱检测化妆品中5种α-羟基酸，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。结果表明在100-1000mg/L的浓度范围内，线性相关系数均大于0.99，回收率在96.5%～102.4%之间，RSD<2.5%（n=6）。本方法准确可靠，灵敏度高，操作简便，可满足检测工作需求。
关键词：高效液相色谱;化妆品;α-羟基酸
0 引言
α-羟基酸[1]是指在α位有羟基的羧酸，是一组弱的吸湿性有机酸，是一类小分子物质，极易被皮肤吸收，具有保湿，抗皱，美白等效果，被广泛应用于化妆品中，但大量使用α-羟基酸会有刺激性作用[2]，甚至导致皮肤发红、起泡及灼伤，国家食品药品监督管理局在《化妆品安全技术规范》（2015版）[3]中已明确规定在化妆品中添加α-羟基酸及其盐类和酯类限量为6%，因此建立准确可靠的化妆品α-羟基酸检测方法具有重要意义。本文对化妆品限用组分中的5种α-羟基酸进行了探讨与分析。
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
LC-30A高效液相色谱仪附带二极管阵列检测器;分析天平;超声波清洗器;高速离心机;pH计;纯水仪。磷酸二氢铵（分析纯）;磷酸（优级纯）;标准品是酒石酸、乙醇酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸，实验用水为一级水。
1.2 色谱条件
色谱柱为岛津Inertsil? ODS-SP（4.6×250mm，5μm），进样量10μL，柱温为室温，检测波长214nm，流动相为0.1mol/L磷酸二氢铵缓冲溶液，磷酸调pH为2.65，流速0.8mL/min。
1.3 标准溶液配制
秤取各种α-羟基酸标准品适量，用水溶解配制成2000mg/L的混合标准储备液，再用储备液稀释成100、200、500、800和1000mg/L的混合标準系列溶液。
1.4 样品处理
准确秤取1.0g样品于10mL具塞比色管中，水浴去除挥发性有机溶剂，加水定容至刻度，超声提取20min， 10000r/min高速离心15min，上清液经0.45μm滤膜过滤，上机。
2 结果与讨论
2.1 结果
1：酒石酸（4.210min）;2：乙醇酸（4.473min）;3：R-苹果酸（5.316min）;4：乳酸（6.405min）;5：柠檬酸（8.436min）;6：L-苹果酸（10.152min）
质量浓度为200mg/L的5种α-羟基酸混合标准品的色谱图，见图1。
2.2 流动相浓度及pH的选择
配制0.06～0.12mol/L不同浓度和2.45～3.0不同pH的流动相做实验，发现低浓度时，酒石酸受溶剂峰的干扰比较大，出现严重的前沿现象，分离效果不理想，在高浓度时，酒石酸与乙醇酸重叠且其它目标峰出现拖尾现象，结合溶剂峰的干扰和分离度的情况考虑，得出流动相浓度为0.1mol/L时分离效果最好。流动相pH值在2.45～2.60时，酒石酸与乙醇酸重叠，分离度较差，流动相pH值在2.70～3.0时，酒石酸与乙醇酸能完全分开，但与溶剂峰重叠，且其他目标峰出现前沿或拖尾现象，结合分离度和峰形的情况考虑，得出流动相pH值为2.65时5种α-羟基酸的分离情况最好且具有良好的峰形。
2.3 线性范围及检出限
5种α-羟基酸混合标准储备液用水稀释成浓度为100、200、500、800和1000mg/L的混合标准系列溶液，按照试验所设定的色谱条件进行测定，以α-羟基酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做线性回归方程。5种α-羟基酸的线性回归方程、线性范围、相关系数和检出限见表1，检出限以3倍信噪比来计算。
2.4 精密度和回收率
准确称取同一化妆品样品1.0g共20份，其中2份按照实验方法正常操作，另外18份分成3组，分别添加含有5种α-羟基酸的混合标准储备液，制成1000、2000和5000mg/kg 3组不同浓度的样品做三水平六平行的添加回收试验，实验结果是5种α-羟基酸的回收率都在96.5%～102.4%之间，RSD<2.5%（n=6），平均回收率和精密度见表2。
3 结论
本文采用高效液相色谱法对化妆品中5种α-羟基酸进行检测，该方法不仅前处理简单，操作方便，而且具有分离效果好，分析快速，低检出限，高灵敏度、准确度和精密度等特点，能够符合实验室对化妆品的检测要求。
参考文献：
[1]李杨杰，吴震，肖树雄，方继回.高效液相色谱法同时测定化妆品中的10种α-羟基酸[J].中国卫生检验杂志，2017，27（19）：2757-2760.
[2]杨艳伟，朱英，董兵.化妆品中α-羟基酸的使用情况分析[J].中国卫生检验杂志，2018，18（1）：133-134.
[3]化妆品安全技术规范2015版[S].北京：中华人民共和国国家食品药品监督管理总局，2015.
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