高效液相色谱法测定面粉中过氧化苯甲酰
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摘要：目的建立一种快速、准确测定面粉中过氧化苯甲酰含量的高效液相色谱法，并应用于益阳市面粉中过氧化苯甲酰含量的专项监测工作中。方法：样品经甲醇提取面粉中过氧化苯甲酰,再由50%KI将过氧化苯甲酰还原为苯甲酸，利用苯甲酸作标准对照品，用二极管阵列检测器进行定性，外标法定量。结果：苯甲酸浓度在0~100μg/mL的范围，峰面积与浓度呈现良好的线性关系(r=0.9998)。加标回收率为90.1%～102.4%。精密度 1.83%-4.49%。结论： 本方法快速、准确、分析成本低，能满足面粉中过氧化苯甲酰的快速分析。
关键词：高效液相色谱；过氧化苯甲酰；面粉
过氧化苯甲酰是一种面粉增白剂，添加于面粉中可起到脱色漂白的作用，但过量使用既会破坏维生素等营养成分，又会产生有害物质苯甲酸。长期食用过量添加过氧化苯甲酰的面粉和面制品会使苯甲酸积聚于人体，增加肝脏负担。2011年5月1日起国家禁止在面粉生产中添加过氧化苯甲酰【1】。目前，对面粉和面制品中增白剂过氧化苯甲酰的含量的检测多依据GB/T 18415-2001《小麦粉中过氧化苯甲酰的检验方法》规定的气相色谱法进行。但使用该方法，样品前处理过程复杂，耗时长。笔者采用液相色谱法进行试验，结果证明，该方法既保证了分析的准确性，又缩短了检验时间，提高了工作效率。
1 试验材料与方法
1.1 仪器与试剂
岛津：LC-20AT高效液相色谱仪、二元梯度泵、流路在线脱气机、系统控制器、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（PDA）、LC-Solution 工作站、超声波清洗机、漩涡混合器、真空抽滤器；
甲醇： HPLC级
苯甲酸标准储备液：苯甲酸含量为1.0mg/ mL；
碘化钾溶液：50%水溶液（质量浓度）
乙酸铵缓冲液（0.02mol/L）：称取乙酸铵1.54g用水溶解并稀释至1L，混匀后用0.45 μm的滤膜过滤，然后用超声波清洗器超声脱气20min备用。
1.2苯甲酸标准工作溶液的配制
准确吸取标准储备液，用甲醇稀释至0.0,2.0,4.0, 8.0，14.0, 18.0μg/mL苯甲酸标准系列溶液。
1.3 色谱条件
色谱柱：C18反相柱4.6mm×150mm；
流动相：甲醇:0.02mol/L乙酸铵=10:90(V:V)
流速：1.0 mL/min
进样量：10 μL
柱温：40℃
检测器：二极管阵列检测器（PDA）,190-800nm,检测波长：230nm
应用上述条件【2】，苯甲酸标准品进样。
1.4 样品处理
称取1g（准确至0.1mg）于10mL具塞比色管中，加2.0mL甲醇，在漩涡混合器上混匀1min，静置5min,加50%碘化钾水溶液1.0mL,在涡旋混合器上混匀1min,放置10min，加水至10mL，混匀静置，吸取上层清夜通过0.222μm滤膜，滤液置于样品瓶中备用
2结果与讨论
2.1 流动相的选择
分别实验了甲醇、水体系和甲醇、0.02mol/L乙酸铵水溶液体系，结果证明当流动相比例为：甲醇：0.020mol/L乙酸铵水溶液=10：90时，苯甲酸的峰形最好。且出峰时间也较短【3】。
2.2 样品的定性
液相色谱分析的定性方法常采用绝对或相对保留时间判定，但这种定性较粗略。在此基础上利用光谱图，可以对色谱峰再次进行定性确认，从而在一定程度上可以克服单纯保留时间定性带来的假阳性。
2.3标准曲线方法的最低检出浓度
将0.0,2.0,4.0,8.0,14.0,18.0μg/mL苯甲酸标准系列溶液，经过0.22μm孔径滤膜过滤，取10μL进样，进行HPLC分析，测定保留时间和峰面积，每种浓度平行测3次，取平均值，然后以峰面积为纵坐标，苯甲酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线【4】。结果表明在所测浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数r＞0.9998，回归方程为Y=3.797869×10-5 X-0.2529511。检出限以3倍信噪比计算，检出限为0.5（mg•kg-1）。
2.4 方法的精密度和回收率试验
对2个样品按试验方法处理后各进样6次，进行精密度试验，并计算其相对标准偏差。选取3种面粉样品，分别添加标样到0.02 g/kg、0.05 g/kg、0.10g/kg做三种浓度的加标回收试验，回收率为 90.1%～102.4%.
3结论
采用高效液相色谱法检测面粉中的过氧化苯甲酰的含量，利用二极管阵列检测器提供的光谱扫描图和保留时间对待测组分进行双重定性鉴别，在一定程度上可以克服单纯保留时间定性带来的假阳性，提高了定性的准确性，保证方法既有较高的灵敏度、准确性，而且操作简便，适用于面粉中的过氧化苯甲酰含量的测定。
参考文献
1GB2760-2011 食品添加剂使用卫生标准【S】.中国标准出版社，2011
2GB/T22325-2008 小麦粉中过氧化苯甲酰的测定【S】.中国标准出版社，2008
3奚星林，李宪华，陈毓芳，等。梯度洗脱HPLC法同时测定小麦粉中过氧化苯甲酰和苯甲酸【J】，中国卫生检验杂志，2007,17（3）:411
4戚丽，胡颖蕙，张正竹高效液相色谱法测定面粉中过氧化苯甲酰含量【J】安徽农业大 学学报，2006,33（4）:560
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