榉树茎段叶芽诱导影响因素研究

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　　摘  要：为了建立榉树无性繁殖体系，探讨榉树茎段叶芽诱导的影响因素，以榉树含叶芽茎段作为外植体，采用75%乙醇（30s）、2%次氯酸钠溶液（25min）消毒，接种于含不同激素种类及浓度的MS培养基上诱导茎段叶芽萌发。结果表明：榉树茎段作为外植体可以启动叶芽的形成;在诱导培养基中，BA浓度为5mg/L、NAA浓度0.2mg/L的条件下，茎段叶芽诱导率最高。
　　关键词：榉树;外源激素;叶芽;诱导
　　中图分类号 S79 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）08-0031-03
　　Abstract：In order to establish the asexual reproduction system of Zelkova schneideriana and explore the influencing factors of leaf bud induction of eucalyptus stems，we used Zelkova schneideriana leaf bud stem segments as explants，disinfected with 75% ethanol（30s）and 2% sodium hypochlorite solution（25min）. Leaf bud germination was induced on MS medium containing different hormone types and concentrations，and statistical culture results were observed. The results showed that the stem segment of Zelkova schneideriana can be used as an explant to initiate the formation of leaf buds. In the induction medium，the callus induction rate was the highest under the conditions of BA concentration of 5mg/L and NAA concentration of 0.2mg/L.
　　Key words：Zelkova schneideriana;Exogenous hormone;Leaf bud;Induction
　　櫸树（Zelkova schneideriana）为榆科（Ulmaceae）榉树属（Zelkova）落叶乔木，是国家重点的保护植物之一[1]。其株形高大、枝干优美，秋季色彩艳丽，是观赏价值较高的园林树种[2]。近年来，由于野生资源日渐稀缺，对榉树的保护与开发利用尤为重要[3]。本试验通过对榉树叶片在不同外源激素种类以及浓度配比的培养基上进行培养，从榉树茎段诱导叶芽，为进一步研究榉树无性繁殖提供理论依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 供试材料 取自校内栽培榉树含叶芽茎段外植体。
　　1.2 试验设计 试验采用L9（34）正交设计，详见表1。
　　1.3 试验方法 植物材料用75%乙醇浸泡15s，用2%次氯酸钠浸泡25min，最后用无菌水冲洗3次。处理结束后，用镊子取出材料放于托盘中，并用剪刀将茎段剪切含有1个芽的茎段，放于培养基上，每瓶5个茎段。将接种好的材料放于2000～3000lx光照培养箱中培养，光暗周期为14∶10。温度25℃。
　　1.4 数据统计及分析 采用SPSS软件进行数据分析和作图。
　　2 结果与分析
　　2.1 正交试验结果分析 实验数据处理后的结果如表2所示，水平极差（R）的大小可以说明试验中TDZ、BA、NAA三者对榉树榉树茎段叶芽诱导的影响程度，其影响程度分别是BA>TDZ>NAA。各种因素的水平均值（k）的大小可以表现出个激素浓度的影响下对榉树茎段叶芽诱导的影响，分别表现为TDZ浓度0.01mg/L>0mg/L>0.02mg/L，BA浓度5mg/L>2mg/L>1mg/L，NAA浓度0.2mg/L>0.1mg/L>0.05mg/L。因此，最适宜的培养基组合是A1B3C3。
　　2.2 不同浓度的TDZ对榉树茎段叶芽的诱导 从图1可以看出，当TDZ浓度在0mg/L时，榉树茎段叶芽诱导均值为0.5;当TDZ浓度在0.01mg/L时，诱导均值约为0.535;当TDZ浓度在0.02mg/L时，诱导均值为0.36。可见，TDZ浓度在0～0.01mg/L，榉树茎段叶芽诱导均值逐渐增大，而TDZ的浓度大于0.01mg/L后，榉树茎段叶芽诱导均值反而降低。
　　2.3 不同浓度的BA对榉树茎段叶芽的诱导 从图2可以看出：当BA浓度在1～5mg/L时，榉树茎段叶芽诱导均值呈上升趋势;当BA浓度在1mg/L时，茎段叶芽诱导均值约为0.315;当BA浓度在1mg/L时，诱导均值约为0.424;当BA浓度在5mg/L时，诱导均值约为0.655。当BA浓度在1～2mg/L时，诱导均值上升的幅度不及BA浓度在2～5mg/L时。
　　2.4 不同浓度的NAA对榉树茎段叶芽的诱导 从图3可以看出，当NAA浓度为0.2mg/L时，榉树茎段叶芽诱导均值最高，达到0.509;而NAA浓度在0.05mg/L和0.1mg/L时，诱导均值分别为0.438和0.448。并且NAA浓度在0.1～0.2mg/L时，诱导均值远大于NAA浓度在0.05～0.1mg/L时的。
　　2.5 不同的植物生长调节剂种类对榉树茎段叶芽的诱导由图4可知，TDZ对榉树茎段叶芽诱导影响为0.18，BA为0.34，NAA为0.07。可见，BA对榉树茎段叶芽诱导的影响最大，NAA最小。 　　3 讨论与结论
　　3.1 讨论 在榉树的各类繁殖方式中，组织培养应用前景广阔。虽然钟飞霞[4]、金晓玲[5]等对榉树无性繁殖做了很多工作，但对榉树茎段叶芽诱导的研究還有待进一步深入。本研究通过正交试验探讨了最适合榉树茎段叶芽诱导的培养基组合，分析了榉树茎段叶芽诱导过程中的各种影响因素，大大提高了试验效率。不同的植物生长物质具有不一样的作用，同一种激素的不同浓度的作用也不同，使用时一定要合理使用，根据试验结果做出正确的选择[6]。TDZ在许多植物组织培养中具有明显的促进植物生长的作用，尤其是对木本植物具有突出的效果[7]。TDZ能够显著促进桑树愈伤组织的产生和生长[8]。一定浓度范围的BA有利于叶芽的萌发，唐国涛研究表明，BA浓度在2mg/L时萌发出的芽的持续时间达到最高峰，此时是最适宜的浓度[9]。NAA是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞的分裂与扩大，诱导不定根的形成等。本试验发现NAA对榉树叶芽诱导影响较小。
　　3.2 结论 本试验结果表明，最适宜榉树茎段叶芽愈伤处理组合是A1B3C3，即最佳诱导培养基为BA5mg/L+NAA0.2mg/L。
　　参考文献
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　　[2]茹雷鸣，张燕雯，姜卫兵.榉树在园林绿化中的应用[J].广东园林，2007（6）：50-52.
　　[3]汪灵丹，张日清.榉树的研究进展[J].广西林业科学，2005，34（4）：188-191.
　　[4]钟飞霞.榉树无性繁殖技术研究[D].长沙：中南林业科技大学，2010：33-35.
　　[5]金晓玲，何平，张日清.榉树茎尖的培养[J].中南林学院学报，2005，25（1）：38-41.
　　[6]李素华，韩浩章，张丽华.BA和KT对香樟茎段腋芽诱导的影响[J].安徽农学通报，2016，22（17）：29-30.
　　[7]MOK M C，MOK D W S，Tumer J E. Biological and biochemical effects of cytokinin-active phenylurea derivatives in tissue culture systems[J].Hort Science，1987，22：1194-1197.
　　[8]黄艳红，牟志美，樊金会，等.噻二唑苯基脲对桑树愈伤组织诱导的影响[J].蚕业科学，2006，32（1）：103-105.
　　[9]唐国涛，张汉永，朱昔娇，等.樟树组织培养试验[J].福建林业科技，2013，40（2）：70-72.
　　（责编：张宏民）
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