超高效液相色谱串联质谱法测定不同厂家生产的多潘立酮片中多潘立酮的含量

来源:用户上传      作者:

　　[摘要] 目的 建立超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定多潘立酮片中多潘立酮含量的方法，比较不同厂家生产的多潘立酮片中多潘立酮的含量。 方法 采用BEH C18色谱柱（ 2.1 mm × 50 mm，1.7 μm），流动相为甲醇：2 mmol/L乙酸铵水溶液（85∶15，V/V），进样量2 μL，柱温30℃，流速0.2 mL/min。采用多重反应监测模型（MRM）方式进行正离子模式检测。 结果 多潘立酮在3.0 min内分离良好，在10.6～5300 ng/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程为Y = 85.362 X + 30 067，r = 0.9959;其检测限为1.06 ng/mL，定量限为10.6 ng/mL，加样回收率为99.2%，相对标准偏差（RSD）为1.7%。不同厂家生产的多潘立酮片中多潘立酮的含量分别为10.016、10.147、10.092、10.123、10.109、10.075 mg，均符合2015年版《中华人民共和国药典》（二部）的要求。 结论 该方法简便、快速，重复性好，灵敏度高，适用于多潘立酮片的快速定量分析。
　　[关键词] 超高效液相色谱串联质谱法;不同厂家;多潘立酮;含量测定
　　[中图分类号] O657.63;TS207.5          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）03（a）-0033-04
　　[Abstract] Objective To establish a method for the determination of domperidone in Domperidone Tablets by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）， and to compare the contents of domperidone in Domperidone Tablets produced by different manufacturers. Methods BEH C18 column （2.1 mm × 50 mm， 1.7 μm） was used. The mobile phase was methanol∶2 mmol/L ammonium acetate aqueous solution （85∶15， V/V）. The injection volume was 2 mL， the column temperature was 30℃， and the flow rate was 0.2 mL/min. Multiple Reaction Monitoring Model （MRM） was used for positive ion pattern detection. Results Domperidone was well separated within 3 min and showed a good linear relationship with peak area in the concentration range of 10.6-5300 ng/mL. The linear regression equation was Y = 85.362 X+30 067. The limit of detection was 1.06 ng/mL， and the limit of quantitation was 10.6 ng/mL. The average recoveries was 99.2% with the relative standard deviation （RSD） being 1.7%. The contents of domperidone in Domperidone Tablets produced by different manufacturers were 10.016， 10.147， 10.092， 10.123， 10.109 and 10.075 mg respectively， which met the requirements of the 2015 edition of the Pharmacopoeia of the People′s Republic of China （Part Ⅱ）. Conclusion The method is simple， rapid， reproducible and sensitive. It is suitable for rapid quantitative analysis of domperidone.
　　[Key words] Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; Different manufacturers; Domperidone; Content determination
　　多潘立酮片是一種合成的苯丙咪唑类衍生物，为外周多巴胺受体阻滞剂，作用较强，主要作用于胃壁上的多巴胺受体而发挥胃动力效应，可增加食道下部括约肌张力，防止胃-食管反流，增强胃蠕动，促进胃排空，协调胃与十二指肠运动，抑制恶心、呕吐，并能有效地防止胆汁反流，不影响胃液分泌[1-4]。现大多采用高效液相色谱法测定多潘立酮片的含量[5-9]，而采用液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）测定其血药浓度的较多[10-12]。目前，国内共有多个厂家拥有多潘立酮片的生产批文，但其质量可能不完全一致。为保证临床用药、安全有效，本研究采用超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定不同厂家生产的多潘立酮片中多潘立酮的含量。此法简便易行，准确度高，精密度灵敏度好，有利于更好地控制产品质量。 　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　ACQUITY型UPLC系统（包括Xevo TQ检测器、MassLynxTM 质谱工作站软件、自动进样器、在线脱气机和四元泵溶剂系统，美国Waters公司）、SCQ-250超声波清洗器（上海盛普机械制造有限公司）、MS105电子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）、Drict-Q5超纯水机（法国Millipore公司）。
　　1.2试药
　　多潘立酮对照品（纯度：99.7%，批号：100304-201103），购自于中国食品药品检定研究院。多潘立酮片购自市售药品市场上6个生产厂家，分别为Y1药业（山西好医生药业集团有限公司，批号：201703005），Y2药业（江苏豪森药业，批号：20161215），Y3药业（修正药业，批号：160635），Y4药业（湖南千金湘江药业，批号：1704154），Y5药业（上海信谊药厂有限公司，批号：150902），Y6药业（江西捷众制药有限公司，批号：84170101）。上述药品规格均为10 mg。甲醇（色谱纯，德国Merck公司），水为超纯水，乙酸铵为分析纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm），甲醇-2 mmol/L乙酸铵水溶液（85∶15，V/V）为流动相，进样量2 μL，柱温30℃，流速0.2 mL/min。
　　2.2 质谱条件
　　离子源为电喷雾电离源（ESI）;检测方式为正离子模式;检测电压：3.5 kV;离子源温度：120℃;脱溶剂温度：350℃;脱溶剂气体流速：500 L/h。采用多反应监测（MRM）方式，多潘立酮：m/z 426.32→175.21，锥孔电压60 V，碰撞能量30 V。在上述条件下所测多潘立酮的MRM色谱见图1～2。
　　2.3 溶液的制备
　　2.3.1 对照品溶液制备  精密称取多潘立酮对照品适量，加适量的甲醇溶解后定容，制成浓度为1.06 mg/mL的对照品储备液。临用前吸取上述储备液适量，并用甲醇稀释，配制成相应浓度的对照品溶液，用于后续线性关系的考察等。上述所有对照品溶液均在4℃的条件下贮藏。
　　2.3.2 供试品溶液制备  分别取6个不同厂家多潘立酮片各20片，精密稱定，用研钵研细，精密称取适量相当于多潘立酮（10 mg）的重量。加适量甲醇溶解于50 mL容量瓶中，超声处理20 min，使其充分溶解，放冷，以甲醇定容，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液100 μL，定溶至10 mL，即得供试品溶液。
　　2.4 方法学考察
　　2.4.1 线性范围考察  取“2.3.1”项下对照品储备液适量，稀释成一系列不同浓度的对照品溶液，即分别为10.6、106、265、530、2120、5300 ng/mL;按“2.1”项下色谱及“2.2”项下质谱方法分别进样2 μL，记录其峰面积。以对照品浓度为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得线性回归方程Y = 85.362 X + 30 067（r = 0.9959）。结果表明多潘立酮浓度在10.6～5300 ng/mL与峰面积线性关系良好。
　　2.4.2 检测限、定量限考察  取上述“2.4.1”项下稀释所得对照品溶液，按“2.1”“2.2”项下的色谱、质谱条件，分别进样测定，以信噪比S/N=3、10时对照品浓度分别作为检测限（LOD）、定量限（LOQ），其LOD值为1.06 ng/mL，LOQ值为10.6 ng/mL。结果表明对照品线性范围良好，仪器检测灵敏度较高，适合多潘立酮片的定量分析。
　　2.4.3 精密度考察  取“2.3.1”项下的对照品溶液（530 ng/mL），按“2.1”“2.2”项下的色谱、质谱条件连续进样6次，以多潘立酮的峰面积计算其RSD（n = 6）为1.8%，结果表明仪器的精密度较好，符合测定要求。
　　2.4.4 重复性试验  按照“2.3.2”项下方法，取Y2厂家多潘立酮片（批号：20161215）平行制备6份供试品溶液。按“2.1”“2.2”项下的色谱、质谱条件，分别进样2 μL进行多潘立酮含量测定，计算多潘立酮峰面积的RSD值，其RSD值为1.5%，表明该测定方法的重复性良好。
　　2.4.5稳定性试验  取Y2厂家多潘立酮片（批号：2016 1215），按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h时按“2.1”“2.2”项下的色谱、质谱条件测定多潘立酮的含量，多潘立酮的峰面积RSD值为3.6%（n = 6），结果表明供试品溶液在室温条件下24 h内基本稳定。
　　2.4.6 加样回收率试验  精密称取已知含量的多潘立酮片6份，每份约1 mg，分别精密加入浓度为0.0212 mg/mL的多潘立酮对照品溶液50 mL，超声提取制备供试品溶液，按“2.1”“2.2”项下的色谱、质谱条件测定，计算多潘立酮片的含量。公式：加样回收率%=（C-A）/B×100%（C为加入标准物质的样品测得量，A为样品中该物质的测得量，B为加入的标准物质的量）计算加样回收率，考察该方法的准确度和可靠性。多潘立酮的平均回收率为99.2%，RSD为1.73%（n = 6），结果表明该方法的加样回收率符合规定，测定结果准确可靠。见表1。
　　表1   多潘立酮加样回收率试验（n = 6）
　　2.5 样品测定
　　分别取各个厂家的多潘立酮片，精密称定，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”“2.2”项下的色谱、质谱条件平行测定6次，利用已建立的标准曲线，计算不同厂家多潘立酮片中多潘立酮的含量及其平均含量、RSD值，结果见表2。 　　表2   不同厂家多潘立酮片中多潘立酮的含量（n = 6）
　　3 讨论
　　3.1 色谱、质谱分析条件的优化
　　本研究比较了不同的色谱柱，并选择了两种不同型号，结果显示，与ACQUITYTM UPLC BEH C18（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）色谱柱比较，ACQUITYTM UPLC BEH C8（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）色谱柱的保留及分离效能更好[13]。本研究还考察了不同的流动相体系及比例，如甲醇-2 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%的乙酸）、甲醇-5 mmol/L乙酸铵水溶液、乙腈-2 mmol/L乙酸铵水溶液;流动相中有机相与水相的比例（体积比）主要考虑了85∶15、70∶30、60∶40。通过比较不同流动相及其比例，发现选择甲醇作为有机相时峰形较好;考虑色谱柱清洗等因素，发现流动相可不加乙酸;不同的流动相比例验证，发现流动相中有机相与水相的比例为（85∶15，V/V）时，其保留时间较为合适，且峰形也较好。故本研究最终选择甲醇-2 mmol/L乙酸铵水溶液（85∶15，V/V）作为流动相[14]。参考相关文献[15-17]，选择ESI+模式下测定多潘立酮，在此模式下所测定的成分响应值较好，后采用IntelliStart功能自动扫描确定相应质谱参数，所得参数能较好的应用于本研究的含量测定。
　　3.2 提取时间的选择
　　参考相关文献[18]，分别对样品超声处理20、30、40 min，样品中多潘立酮的含量基本一致，故选择超声处理20 min。
　　3.3 含量测定
　　本研究采用UPLC-MS/MS法对6个厂家的多潘立酮片中多潘立酮含量进行测定，测得各厂家的每片含量分別为10.016、10.147、10.092、10.123、10.109、10.075 mg，分别为标示量的100.16%、101.47%、100.92%、101.23%、101.09%、100.75%。所有厂家生产的多潘立酮片均符合2015年版《中华人民共和国药典》（二部）的要求，其要求含多潘立酮应为标示量的90.0%～110.0%。
　　3.4 小结
　　UPLC-MS/MS的使用越来越广泛，因其优良的性能及操作性，其也较多应用于药物的含量测定，这有利于药企把控药品的品质。本研究选择6个不同厂家的多潘立酮片中的多潘立酮作为检测指标建立其分析方法，样品处理简单易行，且该检测方法重复性好，灵敏度高，分析时间短（3 min），可考虑用作多潘立酮片的质量控制方法。本研究上述六个厂家的多潘立酮片中多潘立酮的含量均符合要求，但并不能说明它们内在品质一致，其临床药物浓度以及生物利用度等还有待考证。为有效控制产品质量、保证消费者的用药安全与有效，统一质量标准和工艺势在必行[19-23]。
　　[参考文献]
　　[1]  张凤，韩利文，侯彩平，等.多潘立酮的临床应用和致心脏不良反应研究进展[J].药物评价研究，2017，40（3）：420-423.
　　[2]  汪传臻，蔡朝敏.铝碳酸镁联合多潘立酮治疗胆汁反流性胃炎的效果观察[J].河南医学研究，2018（13）：1.
　　[3]  袁溢苒，童明霞，周丽峰，等.多潘立酮联合用药治疗胆汁反流性胃炎的疗效观察[J].中国处方药，2018，16（1）：52-53.
　　[4]  李艳华.多潘立酮联合复方消化酶治疗功能性消化不良的疗效观察[J].中国现代医生，2017，55（28）：39-41.
　　[5]  宋颖，陈敏纯，贾艳艳，等.多潘立酮口腔崩解片在健康人体的药动学和生物等效性[J].中国医院药学杂志，2012， 32（10）：775-779.
　　[6]  庄晓庆.HPLC法测定多潘立酮片含量及含量均匀度[J].齐鲁药事，2007，26（5）：278-280.
　　[7]  庄瑞，李绍峰.HPLC法测定多潘立酮片的含量及含量均匀度[J].数理医药学杂志，2009，22（4）：487-488.
　　[8]  贺玉峰.HPLC法测定多潘立酮片的含量[J].中国药品标准，2006，7（4）：40-42.
　　[9]  易路遥，熊蔚.高效液相色谱法测定马来酸多潘立酮片的含量[J].实用中西医结合临床，2016，16（10）：77-79.
　　[10]  李鹏飞，王燕，童卫杭，等.液相色谱-串联质谱法测定人血浆中多潘立酮浓度[J].中国临床药理学杂志，2012， 28（3）：208-211.
　　[11]  余鹏，阳国平，冉黎灵，等.LC-MS/MS法测定人血浆中多潘立酮的浓度[J].药物分析杂志，2011，31（4）：619-624.
　　[12]  程小桂.基于代谢酶的威麦宁胶囊与多潘立酮相互作用研究[D].南京：南京中医药大学，2014.
　　[13]  吴憩，姚鑫.UPLC-MS-MS测定不同厂家银杏叶提取物中4种萜内酯的含量[J].中国实验方剂学杂志，2016， 22（15）：60-63.
　　[14]  吴婷，张军，居文政，等.HPLC-MS-MS法测定人血浆中多潘立酮浓度的不确定度分析[J].中国药事，2012， 26（5）：459-462.
　　[15]  王秋石，李湘晖，纪宏宇.LC-MS/MS法测定人血浆中多潘立酮的浓度[J].中国药师，2012，15（2）：224-226.
　　[16]  罗亚男，许毓，李娜.HPLC-MS/MS检测人血浆中多潘立酮[J].光谱实验室，2011，28（6）：2969-2972.
　　[17]  谢君，吕玲燕，冯星月，等.UPLC-MS/MS法测定多潘立酮口腔崩解片的含量[J].实用药物与临床，2018，21（3）：302-304.
　　[18]  张宏伟，龚韬，严文利，等.高效液相色谱法测定不同厂家银翘解毒片中连翘酯苷A的含量[J].中国医药导报，2013，10（6）：102-104.
　　[19]  孙冬梅，林晓燕，李素梅，等.复方芪麻胶囊的质量标准研究[J].中国药房，2017，28（18）：2553-2556.
　　[20]  姚艺新，华芳，洪远林，等.川芎药材、饮片及其中成药抗血小板聚集活性的生物检定方法学研究[J].中草药，2017，48（11）：2249-2254.
　　[21]  赵军，徐媛，王庆伟，等.复方木香丸质量标准的提高[J].中国医药导报，2017，14（6）：146-150.
　　[22]  张肖建，朱梅羿，常云凤，等.不同厂家川芎配方颗粒的质量对比分析[J].中国医院用药评价与分析，2018，18（6）：736-738，742.
　　[23]  姚东，包永睿，王帅，等.芦黄参花胶囊质量标准研究[J].中国医药导报，2017，14（1）：8-11.
　　（收稿日期：2018-05-22  本文编辑：王   蕾）
转载注明来源:https://www.xzbu.com/6/view-14765782.htm