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广东省15个不同产地五指毛桃药材中补骨脂素含量测定

作者:未知

  摘  要:目的 建立五指毛桃药材中补骨脂素的高效液相色谱测定方法,测定广东省15个不同产地五指毛桃药材中补骨脂素含量,了解广东省不同产地五指毛桃药材质量情况。方法 采用反相高效液相色谱法测定补骨脂素的含量,Waters  C18 色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-水(60∶40),流速为1.0mL/min,柱温:35℃;检测波长:245nm。结果 补骨脂素在9.4~198.5?g/mL范围内,线性关系良好,平均回收率为99.94%,RSD为0.64%。广东省不同产地五指毛桃的补骨脂素含量范围为0.165~1.187mg/g,说明广东省不同产地五指毛桃质量较好。结论 五指毛桃药材中补骨脂素的HPLC分析方法结果准确,重现性好,可作为五指毛桃药材的质量评价方法。
  关键词:五指毛桃  补骨脂素  含量测定
  中图分类号:R282.5                                文献标识码:A                        文章编号:1672-3791(2019)02(c)-0201-02
  五指毛桃為岭南常用草药、煲汤材料,俗称牛奶木、五指龙、土黄芪,以桑科榕属植物粗叶榕(Ficus hirta Vahl)的根入药,性平,味甘、辛,具有益气健脾、祛痰化湿、舒筋活络的作用,用于肺虚痰喘、脾胃气虚、肢倦无力[1],主要分布于广东、广西、福建、海南、贵州、云南等地,以广东河源人工种植面积最广,其中河源已经建立起多个五指毛桃的GAP种植基地,为五指毛桃的规范化种植提供了技术支持。研究表明,五指毛桃主要含有香豆素类[2]、黄酮类[2]、甾体及其他挥发性成分,其中,补骨脂素、佛手内酯在不同产地、不同采收年份、不同采收季节、不同农家类型品种的五指毛桃含量显著较高,可作为五指毛桃内在质量评价和鉴定的依据[3-4]。五指毛桃的质量标准目前收载于《广东省中药材标准 第一册》(2004年版)第35页、《广西壮药品种质量标准(第二卷)》第47页、《湖南省中药材标准(2009年版)》,只有《广西壮药品种质量标准》对五指毛桃做出了补骨脂素的含量测定要求,但其流动相使用了乙腈,毒性较大,成本较高。根据五指毛桃化学成分与药理作用研究,发现补骨脂素是其主要活性成分之一,具有抗菌[5]、镇咳平喘[5]、抗炎镇痛[5]、对急性肝损伤的保护[6-7]、免疫调节[8]等作用。为了分析和评价广东省不同地区五指毛桃的质量,该研究采用高效液相色谱法分别对广东省15个不同地区五指毛桃中补骨脂素的含量进行检测,为制定五指毛桃质量标准提供依据。
  1  仪器与试药
  戴安U3000高效液相色谱仪;电子分析天平(梅特勒-托利多);密理博milli-Q Direct 8 纯水仪(美国Millipore公司);超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);粉碎机(泓荃制药机械公司);甲醇(色谱纯),补骨脂素对照品购于中国食品药品检定研究院,五指毛桃药材采收于广东省15个不同地区(见表1)。
  2  方法与结果
  (1)色谱条件。Waters  C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:水-甲醇(40:60),流速为1.0mL/min,进样体积为10μL,柱温:35℃;检测波长:245nm。
  (2)对照品溶液的制备。精密称取补骨脂素对照品适量,加甲醇制成每1mL含50.2?g/mL的溶液即得。
  (3)供试品溶液的制备。取五指毛桃粗粉0.5g,精密称定,置于50mL具塞锥形瓶中,精密加入10mL甲醇,称定质量,超声(功率100W,频率40kHz)提取30min,冷却至室温后用甲醇补足失质量,摇匀,经0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
  (4)线性关系考察。分别精密称取补骨脂素对照品适量,加甲醇制成浓度为9.4μg/mL、24.6μg/mL、50.2
  μg/mL、100.1μg/mL、198.5μg/mL的溶液,分别10μL,按“(1)”项下色谱条件测定峰面积,以峰面积(Y)为纵坐标,以浓度(X)为横坐标,进行线性回归,得补骨脂素标准品回归方程为Y=0.838X+0.116,R2=0.999;线性范围为9.4~198.5μg/mL。
  (5)精密度试验。取“(2)”项下对照品溶液10μL,注入液相色谱仪中,测定峰面积,重复测定6次,峰面积分别为42.159、43.106、42.841、41.984、42.562、42.618,RSD为0.98%,表明仪器的精密度良好。
  (6)稳定性试验。取第8号样品,按“(3)”项下方法制备供试品溶液,按“(1)”项下色谱条件,分别于0、1、2、3、8、12、24h时测定峰面积,为49.203、50.541、49.956、50.025、50.952、49.991、50.124,RSD为1.08%,结果表明补骨脂素在24h内测定,稳定性良好。
  (7)重复性试验。取第8号样品6份,按“(3)”项下方法制备供试品溶液,按“(1)”项下色谱条件进行测定,峰面积为49.203、49.985、50.125、50.518、49.251、50.458,RSD为1.15%,表明该方法重复性良好。
  (8)加样回收试验。取已测定补骨脂素含量的第8号五指毛桃样品9份,每份0.3g,其中3份分别精密加入“(2)”项下对照品溶液5mL,另外3份分别精密加入“(2)”项下对照品溶液8mL,剩下3份分别精密加入“(2)”项下对照品溶液10mL,按“(3)”项下方法制备供试品溶液,按“(1)”项下色谱条件,进行测定,分别计算低、中、高浓度组样品的加样回收率和RSD。结果显示,低浓度组平均加样回收率为100.09%,RSD为1.19%;中浓度组平均加样回收率为99.88%,RSD为0.50%;高浓度组平均加样回收率为99.85%,RSD为0.22%,这说明了此方法中补骨脂素的加样回收率良好。
  (9)样品测定。分别取五指毛桃粗粉,按“(3)”项下方法每批样品平行制备供试品溶液2份,按“(1)”项下色谱条件进行测定,利用“(4)”项下建立的标准曲线,计算五指毛桃样品中补骨脂素的含量,结果见表1。
  3  结论
  补骨脂素是五指毛桃的主要活性成分之一,具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤、免疫调节等作用,该研究发现补骨脂素在五指毛桃中含量较高,稳定性好,可作为制定五指毛桃质量标准的指标性成分。五指毛桃药材中补骨脂素的HPLC分析方法结果准确,重现性好,可作为五指毛桃药材的质量评价方法。
  4  讨论
  该研究测定了广东省15个不同地区五指毛桃中补骨脂素的含量,发现不同地区的五指毛桃中的补骨脂素含量差别较大,在制定其质量标准时,应加大样本量进行研究,并进一步研究不同生长时期对补骨脂素含量的影响。
  参考文献
  [1] 广东省中药材标准(第一册)(2004年版)[S].
  [2] 轧霁,张晓琦.五指毛桃黄酮和香豆素类成分研究[J].林产化学与工业,2008,28(6):49-52.
  [3] 郑蓉蓉,轧霁.五指毛桃的化学成分研究[J].中国中药杂志,2013,38(21):3696-3700.
  [4] 魏刚,刘春玲,何建雄,等.五指毛桃GC-MS特征指标成分群探讨[J].中医药学刊,2005,23(7):1249-1251.
  [5] 陶敬奇,闻莹莹.五指毛桃指纹图谱的高效液相色谱-质谱联用研究[J].华南师范大学学报:自然科学版,2011,8(3):78-81.
  [6] 周添浓,王艳,唐立海,等.五指毛桃抗炎镇痛及对急性肝损伤的保护作用研究[J].今日药学,2008,18(2):55-58,1692-1693.
  [7] 吕颖坚,贾凤兰,阮明,等.五指毛桃水提物对二甲基甲酰胺所致小鼠急性肝损伤的保护作用[J].中药材,2008,31(9):1364-1368.
  [8] 刘春玲,徐鸿华,吴清和,等.五指毛桃对小鼠免疫功能影响的实验研究[J].中药材,2004,27(5):367-368.
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