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高效液相色谱法测定脉络宁颗粒中绿原酸含量

来源:用户上传      作者: 何玉川 郭琳 徐艳红

  [摘要] 目的 应用反相高效液相色谱法测定脉络宁颗粒中绿原酸的含量。 方法 以乙睛-0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为327 nm。采用C18化学键合硅胶为固定相,在327 nm进行测定。 结果 绿原酸在0.1~0.8 μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.52%。 结论 该方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。
  [关键词] 反相高效液相色谱法;脉络宁颗粒;绿原酸;含量测定
  [中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)03(c)-0055-02
  
  Determination of chlorogenic acid in Mailuoning granules by HPLC
  HE Yuchuan GUO Lin XU Yanhong
  Institute for Food and Drug Control of Jinzhou City in Liaoning Province, Jinzhou 121000, China
  [Abstract] Objective To determine the content of chlorogenic acid in Mailuoning granules by reversed-phase high performance liquid chromatography. Methods C18 column was used with the mixture of acetonitrile-0.4% Phosphoric acid solution (13:87) as the mobilephase at a flow rate of 1.0 mL/min with the detection wavelength at 327 nm. Results The method proved to be linear over therange of 0.1-0.8 μg. The recovery of the assay was 99.52%. Coclusion The method appears to be simple, reliable, accurate and can be used to the quality control of the preparation.
  [Key words] RP-HPLC; Mailuoning granules; Chlorogenic acid; Determination
  
  脉络宁颗粒由金银花、牛膝 、玄参、石斛、等中药材经提取精制而成[1],具有清热养阴,活血化瘀的功能,用于血栓闭塞性脉管炎,静脉血栓形成,动脉硬化性闭塞症,脑血栓形成及后遗症等。金银花主要活性成分为绿原酸,绿原酸含量测定方法成熟、简便准确,故采用《中国药典》2010版(一部)中金银花含量测定项下的方法和液相色谱条件[2]以及相关的文献[3-8]报道进行含量测定方法的研究,现报道如下:
  1 仪器与试药
  P200II高压恒流泵、UV200Ⅱ紫外可变波长检测器(大连依利特分析仪器有限公司),千谱色谱工作站;绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:110753-200413);样品:脉络宁颗粒(江西银涛药业有限公司;批号:1110011、1111012、1111013);乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂为分析纯。
  2 方法与结果
  2.1 色谱条件与系统适用性试验
  色谱柱:迪马C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);柱温:25℃;流动相:乙睛-0.4%磷酸溶液(13∶87);流速:1.0 mL/min;检测波长:327 nm;进样量:10 μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于3 000,分离度大于1.5。
  2.2 溶液的制备
  取本品0.6 g,精密称定,置具塞瓶中,精密加入50%甲醇50 mL,塞紧后称定重量,超声5 min使其溶解,放置至室温,再称定重量,滴加50%甲醇补充至相同重量,滤过,取续滤液过0.45 μm滤膜,作为供试品溶液。取绿原酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并制备成每1毫升含40 μg的溶液,摇匀,作为对照品溶液。取不含有金银花的阴性样品,依上述供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。
  2.3 方法学考察
  阴性干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL分别注入液相色谱仪,供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应的位置上有相应的色谱峰,而阴性对照品溶液色谱中在此位置并无相应的色谱峰,证明本方法可行。色谱图见图1。
  线性关系考察:取绿原酸对照品2.523 mg至25 mL容量瓶中加50%甲醇溶解并至刻度,摇匀,即得0.100 9 mg/mL的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液1、2、4、6、8 mL至10 mL容量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得不同浓度的线性关系对照品溶液,分别吸取上述各对照品溶液10 μL注入色谱仪中,测定峰面积,以绿原酸的量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线图,并计算回归方程。回归方程为y = 2 000 000x - 3 813.1,相关系数r = 0.999 95(n = 5),说明绿原酸对照品进样量在0.1~0.8 μg范围内线性关系良好。
  稳定性试验:取同一供试品(批号:1110011)依法制备供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h时依法测定,结果供试品平均峰面积平均值为715 605,RSD为1.3%(n = 8),说明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
  精密度试验:取同一对照品溶液(含量40.35 μg/mL)连续进样依法测定。结果主成分峰面积平均值为781 234.5,RSD为0.8%(n = 6),表明本方法的精密度较好。
  重复性试验:取同一批样品(批号:1111012)依法制备供试品溶液,依法测定。结果样品平均含量为3.058 mg/g,RSD为1.1%,表明本方法重现性良好。
  加样回收试验:取同一批号已知含量的样品(批号:1111012,含量为3.058 mg/g)0.3 g,6份,精密称定,置已经加了0.952 5 mg绿原酸对照品的三角锥形瓶中,精密加入50%甲醇50 mL,照样品制备方法制备,并测定绿原酸总量,计算加样回收率及平均回收率。结果平均回收率为99.52%,RSD为0.6%,说明本方法准确、可靠。结果见表1。
  2.4 样品含量测定
  精密吸取供试品溶液10 μL,按上述的色谱条件测定,以外标法计算绿原酸含量。结果批号为1110011、1111012、1111013的样品中绿原酸含量分别为3.042、3.058、3.050 mg/g。
  3 讨论
  取绿原酸对照品的50%的甲醇溶液(7.88 μg/mL),照中华人民共和国药典2010版(一部)紫外-可见分光光度法,经岛津UV-2550型紫外分光光度计在200~400 nm波长范围内扫描,结果绿原酸在327 nm波长处有最大吸收,因此选择327 nm作为检测波长。经过多次试验,高效液相色谱法测定脉络宁颗粒中绿原酸含量,使原标准得到了提高,有效控制了药品的内在质量。
  [参考文献]
  [1] 国家食品药品监督管理局. 国家食品药品监督管理局标准(试行)[S]. YBZ23932005.
  [2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:化学工业出版社,2010:205.
  [3] 吕沅珊,华伟义. 消痤颗粒剂中绿原酸的HPLC 法含量测定及二极管矩阵检测(PDA)对其纯度评估[J]. 中草药,1998,29(2):97.
  [4] 魏明,苏启表. HPLC法测定玉叶解毒颗粒中绿原酸含量[J] .中草药,2000,31(6):433.
  [5] 李文莉,汪文涛,曹湘萍,等. 高效液相色谱法测定脉络宁注射液中绿原酸的含量[J]. 中国药学杂志, 2003,24(3):210.
  [6] 廖夫生,姚雪莲. HPLC法测定金银花茶电绿原酸含量研究[J]. 江西化工,2011,27(4):43-45.
  [7] 聂翠翠,彭家钢,杨瑞芬,等. 高效液相色谱法测定清热解毒口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J]. 湖北中医药大学学报,2011,13(6):33-35.
  [8] 费扬,王慧,凌水花,等. 反相高效液相色谱法测定乌金胶囊中绿原酸的含量[J]. 药学实践杂志,2011,29(6):460-461.
  (收稿日期:2012-02-07)


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