HS-SPME-GC-MS分析川芎茶调制剂不同剂型的挥发性成分

来源:用户上传      作者:

　　摘要：采用顶空固相微萃取（HS-SPME）与气质联用法（GC-MS）对川芎茶调制剂不同剂型的挥发性成分进行比较。结果表明，在川芎茶调颗粒中共分离出24个峰，鉴定出16种成分，占其总挥发性成分的89.13%;在川芎茶调片中分离出63个峰，鉴定出46种成分，占其总挥发性成分的80.91%;在川芎茶调丸（浓缩丸）中分离出94个峰，鉴定出69种成分，占其总挥发性成分的90.10%;在川芎茶调丸（水丸）中分离出101个峰，鉴定出68种成分，占其总挥发性成分的78.50%。川芎茶调制剂的不同剂型的挥发性成分和相对百分含量存在一定的差异。
　　关键词：川芎茶调制剂;剂型;HS-SPME-GC-MS;挥发性成分
　　Abstract： HS-SPME-GC-MS was used for analysis the volatile components of Chuanxiong Chatiao preparations in different dosage forms. The results showed that 16 components were identified in the 24 peaks separated by Chuanxiong Chatiao granule， which accounted for 89.13% of the total volatile components. 46 components were identified in the 63 peaks separated by Chuanxiong Chatiao tablet， which accounted for 80.91% of the total volatile components. 69 components were identified in the 94 peaks separated by Chuanxiong Chatiao pill （concentrated pills）， which accounted for 90.10% of the total volatile components. 68 components were identified in the 101 peaks separated by Chuanxiong Chatiao pill （water-bindered pills）， which accounted for 78.50% of the total volatile components. The volatile components in different dosage forms of Chuanxiong Chatiao Preparations were different in chemical compositions and content.
　　Key words： Chuanxiong Chatiao preparations; dosage form; HS-SPME-GC-MS; volatile components
　　川芎茶调散是中医临床经典的方剂，此方始载于《和剂局方·卷之二治伤寒》，组方为川芎、荆芥、白芷、羌活、细辛、防风、薄荷、炙甘草; 2015年版《中国药典》[1]收载有川芎茶调散、川芎茶调丸、川芎茶调丸（浓缩丸）、川芎茶调袋泡茶（川芎茶调袋泡剂）、川芎茶调片和川芎茶调颗粒等不同剂型;其功能与主治均为疏风止痛，用以外感风邪所致的头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。在近期的药理学研究[2-5]中发现川芎茶调散具有解热、镇痛、抗炎、耐缺氧、对帕金森多巴胺神经损伤保护等作用。目前对川芎茶调制剂的研究主要集中在临床和药理研究，尚未发现对川芎茶调制剂不同剂型的挥发性成分的分析。本试验首次应用HS-SPME-GC-MS技术对市面上川芎茶调制剂不同剂型的挥发性成分进行提取和比较，希望对川芎茶调制剂质量控制标准及功能主治方面有所帮助。
　　1 材料与方法
　　1.1 药品
　　川芎茶调颗粒，国药集团德众（佛山）药业公司，批号为18002;川芎茶调丸（浓缩丸），太极集团重庆中药二厂有限公司，批号为1804004;川芎茶调丸（水丸），山西华康药业股份有限公司，批号为20160604;川芎茶调片，成都地奥集团天府药业股份有限公司，批号为18050553。以上制剂都经粉碎过16目筛备用。
　　1.2 仪器
　　6890/5973型气相-质谱-计算机联用仪，美国Hewlett-Packard公司;手动固相微萃取装置，德国IKA公司;65 μm PDMS/DVB萃取纤维头，美国Supelco公司;顶空瓶（15 mL）。
　　1.3 方法
　　1.3.1 顶空固相微萃取（HS-SPME）条件 综合考察确定制剂的顶空固相微萃取的最佳条件：取以上4种制剂样品各0.6 g，分别置于15 mL顶空瓶中，插入装有65 μm PDMS/DVB萃取纤维头的手动进样器，在100 ℃下预平衡10 min，再萃取15 min，取出后立即插入色谱仪进样口解吸3 min。
　　1.3.2 气相色谱-质谱（GC-MS）条件
　　1）GC条件。色谱条件：HP-5MS石英毛细管柱（30 mm×0.25 mm，0.25 μm）;程序升温从50 ℃开始，以5 ℃/min升温至230 ℃，不分流进样;载气为高纯度He（99.999%），柱流速0.8 mL/min，进样口温度230 ℃。
　　2）MS条件。EI源;离子源温度230 ℃，电离能70 eV;四级杆温度150 ℃;工作模式为全扫描，扫描质量范围为35～550 m/z。
　　2 结果与分析
　　经化学工作站数据处理及色谱面积归一法从各总离子流中计算各组分相对百分含量，按各峰的质谱图经NIST08质谱数据库检索，并结合相对保留时间确定各个组分，结果从川芎茶调颗粒中分离出24个峰，鉴定出16种成分，占总挥发性成分的89.13%;从川芎茶调片中分离出63个峰，鉴定出46种成分，占总挥发性成分的80.91%;从川芎茶调丸（浓缩丸）中分离出94个峰，鉴定出69種成分，占总挥发性成分的90.10%;从川芎茶调丸（水丸）中分离出101个峰，鉴定出68种成分，占总挥发性成分的78.5%。具体结果见图1、图2、图3、图4及表1。 　　3 讨论
　　由图1、图2、图3、图4及表1可看出，川芎茶调制剂的不同剂型挥发性成分和含量存在一定的差异。其共有成分5种，壬醛、薄荷醇、5-甲基-2-（1-甲基亚乙基）环己酮、（1R，3S，6S）-3，7，7-三甲基二环[4.1.0]庚烷、对乙烯基愈疮木酚。从川芎茶调颗粒检测出的成分中鉴定出16种，占总挥发性成分的89.13%，其中含量最高的是薄荷醇（62.3%），其次分别为（2R，5R）-5-甲基-2-（2-丙烯基）环己烷（6.29%）、异薄荷酮（4.77%）、异蒲勒醇（2.45%）、（1R，3S，6S）-3，7，7-三甲基二环[4.1.0]庚烷（2.38%）、5-甲基-2-（1-甲基亚乙基）环己酮（1.68%）等。
　　从川芎茶调片检测出的成分中鉴定出46种，占总挥发成分的80.91%，其中含量最高的为薄荷醇（17.89%），其次分别为对乙烯基愈疮木酚（9.39%）、甲基丁香酚（4.33%）、噠嗪（4.16%）、5-甲基-2-（1-甲基亚乙基）环己酮（3.43%）、胡椒酮（3.31%）、异薄荷酮（2.36%）、2-乙酰基吡咯（2.20%）、苯戊酮（2.00%）、糠醇（1.99%）、麦芽醇（1.89%）、黄樟素（1.75%）、5-羟甲基麦芽酚（1.71%）等。
　　从川芎茶调丸（浓缩丸）检测出的成分中鉴定出69种，占总挥发成分的90.10%，其中含量最高的是薄荷醇（26.73%），其次分别为3，4，5-三甲氧基甲苯（11.14%）、5-甲基-2-（1-甲基亚乙基）环己酮（6.61%）、哒嗪（6.44%）、薄荷烯（4.92%）、薄荷酮（3.13%）、肉豆蔻醚（3.09%）、胡椒酮（3.04%）、3，5-二甲氧基甲苯（2.94%）、黄樟素（2.92%）、2-乙酰基吡咯（1.80%）等。
　　从川芎茶调丸（水丸）检测出的成分中鉴定出68种，占总挥发性成分的78.50%，其中含量最高的是薄荷醇（14.43%），其次分别是甲基丁香酚（7.09%）、5-甲基-2-（1-甲基亚乙基）环己酮（5.28%）、3，5-二甲氧基甲苯（4.13%）、哒嗪（3.62%）、黄樟素（3.51%）、肉豆蔻醚（2.79%）、薄荷酮（2.65%）、3，4，5-三甲氧基甲苯（1.98%）、苯戊酮（1.96%）、d-荜澄茄烯（1.91%）、甘菊蓝（1.76%）、4，7-二甲基-1-（1-异丙基）-1，2，4a，5，6，8a-六氢化萘（1.76%）等。
　　通过对4种制剂进行对比发现，4种制剂检测出的挥发性成分中含量最高的均为薄荷醇，且占总挥发性成分的百分比较高。据相关研究发现[6-11]，薄荷醇具有保护神经细胞、抗气道炎症、改变气道平滑肌张力、抗惊厥、消炎止痛、抑制年轻女性四肢冷诱导血管舒张程度等药理作用，这与川芎茶调方在《和剂局方》中主治风邪头痛、恶寒发热的功效具有很大程度的相关性。其他成分同样具有一定的药理作用，如哒嗪具有抗病毒作用，肉豆蔻醚具有抗炎抗菌作用，甲基丁香酚具有镇静催眠和抗菌作用[12，13]，这都与川芎茶调方中疏风止痛的功效有关。
　　值得注意的是，川芎茶调制剂与其君药川芎的挥发性成分无论从组成还是相对百分含量都具有显著差异。根据王书妍等[14]对川芎挥发性成分的研究，川芎的主要挥发性成分为Z-藁本内酯、1-甲氧基-4-（丙烯基）苯、正丁烯基苯酞、4-N-庚基苯酚、左旋β-芹子烯、匙叶桉油烯醇等。本试验在川芎茶调制剂中未发现这些成分或百分含量较低。这可能与制剂工艺或萃取条件有关。
　　本试验为首次采用HS-SPME-GC-MS技术对川芎茶调制剂的挥发性成分进行分析，且这些挥发性成分的药理作用大多与其功能主治相关。而2015版《中国药典》对川芎茶调制剂的含量测定仅以阿魏酸、甘草酸或是两者为指标，对于成分多样且复杂的中成药制剂来说，这种含量测定的指标是否充足;挥发性成分同样也是制剂中的较不稳定成分，川芎茶调制剂的组方药味中，绝大部分都富含挥发性成分，川芎茶调制剂的含量测定指标是否也可以增加一些挥发性成分;不同剂型的川芎茶挥发性成分的组成存在一定差异，药典上这些制剂的功能主治是相同的，但实际上其药效和药理作用是否存在差异，以上这些问题需要进一步试验研究与论证。
　　参考文献：
　　[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：一部[M]. 2015版. 北京：中国医药科技出版社，2015.
　　[2] 张 林. 川芎茶调散解热作用研究[J]. 黑龙江医药，2016，29（3）：434-436.
　　[3] 李治淮，杜冠华，孙丰润. 川芎茶调散的解热镇痛抗炎作用[J]. 滨州医学院学报，1992（1）：18-19.
　　[4] 邓治文，刘家玉，王文烈，等. 川芎茶调散袋泡剂的药理作用研究[J]. 中药药理与临床，1992（1）：11-15.
　　[5] 舒 丹，何金彩，陈江帆. 川芎茶调散对帕金森病小鼠多巴胺神经元损伤的保护作用及机制研究[J]. 中国中药杂志，2009，34（19）：2494-2497.
　　[6] 王 静，王 霆，韩智涛，等. 薄荷醇抑制β淀粉样蛋白聚合保护神经细胞的实验研究[J]. 中国医药，2018，13（2）：227-230.
　　[7] 王亚苹，邹文静，蔡 霜，等. 薄荷醇下调肺组织P物质改善哮喘气道炎症及气道高反应性的研究[J]. 第三军医大学学报，2017，39（22）：2151-2156.
　　[8] 郅 琳，臧文华，张雪鹏，等. 基于TRPM8通道薄荷醇对小鼠气道平滑肌影响的实验研究[J]. 科学技术与工程，2019，19（5）：72-76.
　　[9] 姜圆圆，赵 岩，王士杰，等. 薄荷中L-薄荷醇的抗惊厥活性研究[J]. 食品工业科技，2018，39（15）：5-9.
　　[10] 陈光亮，佘玉宝，李冬梅. 薄荷油及其有效成分药理作用的研究概况[J]. 中国中医药信息杂志，2000（2）：33-34.
　　[11] KIM S，LEE J Y. L-Menthol attenuates the magnitude of cold-induced vasodilation on the extremities of young females[J].  Journal of physiological anthropology，2018，37（1）：14.
　　[12] MOHAMMED A，KARAM A S，HASSAN A A. Synthesis and evaluation of some new 1，3，4-oxadiazoles bearing thiophene， thiazole， coumarin， pyridine and pyridazine derivatives as antiviral agents[J].  Acta pharmaceutica，2019，69（2）：261-276.
　　[13] 张爱武，刘乐乐，何学敏，等. 肉豆蔻化学成分与药理活性的研究进展[J]. 内蒙古医科大学学报，2014，36（1）：85-88.
　　[14] 王书妍，张 丽，包玉敏，等. 川芎挥发油化学成分GC/MS分析[J]. 光谱实验室，2010，27（6）：2174-2176.
转载注明来源:https://www.xzbu.com/8/view-15285783.htm