无菌药物生产环境中微生物的检测及控制研究

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　　摘要：无菌室是生产无菌药物的主要场所。有效控制和检测无菌药物生产环境中的微生物含量是确保产品质量的重要指标。本文对无菌室微生物的种类及检测以及如何对无菌环境灭菌消毒进行了综述说明。
　　关键词：无菌药物;生产环境;微生物检测;研究控制
　　引言
　　伴随医药行业的迅猛发展，药品的质量控制标准变得越来越严格，新版GMP标准的推出对无菌药物的生产进行了更要级别的要求，GMP内容几乎完全与欧盟GMP标准接轨，不仅对无菌生产洁净级别提高了要求，同时对人员管理，生产质量管理等多方面进行要求。为此，本文主要对无菌室内微生物的控制和检测进行描述，为正确维持无菌室的环境提供参考与借鉴。
　　1微生物的种类及检测
　　按照微生物检测内容可将无菌室微生物分为沉降菌、浮游菌、人员菌。在新版GMP要求下不同级别的洁净区域内微生物检测的限度标准如下：
　　1.1通过培养板中的自然沉降原理（通常使用90mm直径的硼硅酸盐玻璃培养皿，俗称沉淀皿）沉淀细菌检测空气中收集的生物颗粒，经过一段时间后，让其在可见下繁殖到可见合适的条件对菌落进行计数，并且通过平板培养皿中的菌落数确定清洁环境中存活微生物的数量，并评估洁净室（区域）的清洁度。（1）取样方法：将制备的培养皿放在预定的取样点，打开培养皿盖，将培养基表面暴露0.5小时，然后盖上培养皿，然后翻转，置32.5℃士2.5℃培养48h，取出检查。（2）采样点的布置：工作区采样点位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
　　1.2浮游细菌检测漂浮的细菌，即悬浮在空气中的活微生物颗粒。该方法采用计数浓缩法，即将悬浮在空气中的生物颗粒收集在特殊介质中，并使其在适当的生长条件下繁殖到可见的菌落中，计数一段时间，从而确定清洁的环境。每单位体积空气中的活微生物数量用于评估洁净室（区域）的清洁度。常用的收集仪器有“漂浮细菌空气采样器”。采样方法及采样点布置：采样人员严格按照浮游菌空气采样器的操作规程进行采样。工作区测点位置离地0.8m～1.5m左右;送风口测点位置离開送风面30cm左右;可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。为防止交叉污染，在不同级别的环境下建议配备专门的空气采样器，并定期用无尘抹布和消毒剂对空气采样器表面进行擦拭，保证期检测数据真实可靠;在使用空气采样器采集浮游菌时，采集人员不要在仪器前走动，以免影响结果。安装培养皿时手要在侧面，不能放在培养皿的前方。
　　1.3人员菌的检测人员菌的检测主要为无菌室的工作人员进行更衣验证及离开无菌室的工作人员进行的微生物检测，即手部及洁净服的不同部位进行取点检测，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，并由菌落数量来反映工作人员在正常工作状态下所携带的微生物数量。采样方法及采样位点：对无菌室工作的人员进行更衣验证，取样位点头部、眼罩、腰部、手部、肘部、小腿等。手部检测时，受测人员用手指轻按培养皿停留5秒钟（五指平均分布于培养皿区域），双手都要取样;洁净服的取样点取样时停留时间同样要停留5秒钟，然后押迅速盖上平皿，送化验室培养。
　　2无菌环境微生物数量的控制方法
　　2.1规范人员的卫生操作规程人员是无菌环境中最大的污染源，据有相关调查表明，在无菌药品生产过程中，有70%的污染来自于人员。人体携带微生物的数目十分惊人，在没有消毒的情况下，手部大约有1000～6000个微生物/cm2，一个喷嚏可以射出100000～1000000个微生物;健康人群站立不动也可以每分钟向环境中散步100000个颗粒，移动时微粒数量会迅猛增加。
　　严格按照进入无菌室的穿衣规程穿戴洁净服。生产过程中出现人员菌检测不合格的工作人员应取消其进入无菌室的资格，并对其进行再次培训，直到无菌检测合格后方可恢复进入无菌室的资格;另外，要严格按照新版GMP对人员的要求，有效控制无菌室人员数量，并尽量避免人员在无菌室不必要的活动，减少人员对环境的污染。
　　2.2合理使用消毒剂无菌室内最普遍使用的消毒剂是75%的乙醇，另外常见的消毒剂还有70%异丙醇，酸性苯酚，碱性苯酚，杀孢子剂，新洁尔灭等，75%乙醇和70%异丙醇常作为人员及设备表面的消毒使用，碱性苯酚、酸性苯酚及杀孢子剂通常用于无菌环境地面的消毒。为防止微生物产生抗耐受性，通常将消毒剂周期性的交替使用，并保证其使用时限，例如在单周使用75%乙醇和酸性苯酚，而双周则使用70%异丙醇和碱性苯酚。为减少人员菌的数量，工作人员要按照规定间歇性的对手掌用消毒剂消毒。
　　2.3无菌室的日常管理建立安全卫生值日制度，定期对无菌环境进行清洁，当设备和地面出现散落的药物粉末或无菌水时，要及时用清理，并用消毒剂擦拭。一旦通风系统，墙壁，天花板，地板，门窗和普通媒体系统被发现损坏，及时报告并采取适当的维修措施，并及时记录存档。
　　2.4无菌环境消毒及设备的灭菌无菌环境的消毒常采用甲醛熏蒸的方法，为获得最佳的消毒效果，在熏蒸前对无菌室喷洒适量的水以增加环境的空气湿度，同时将无菌室内的物品以一定的空间角度摆放，以增加其表面积而使消毒更加彻底。设备灭菌使用高压蒸汽灭菌法（121℃、30min），对反应釜设备多次脉动式抽真空，由于反应釜设备较大，一般会存在冷点（灭菌时反应釜温度最低的位点），所以需要对反应釜设备安装多个温度探头来确定灭菌温度。设备冷点处温度超过122℃并维持30分钟蒸汽灭菌，保证设备灭菌效果。
　　3结语
　　微生物检测是反映无菌环境无菌性的重要指标，但无菌环境的微生物数量控制绝不能依赖检测，产品的无菌或其它质量特性也不能依赖于任何形式的检验及检测结果，而是应该改善无菌环境卫生及工作人员的操作规范，将微生物的数量控制在根源处，从根本上提高无菌药物的质量。
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