头孢克肟聚合物检查方法建立
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摘要：本文建立了头孢克肟聚合物检查方法，采用TSK gel G2000SWxl凝胶色谱柱。本方法中，头孢克肟浓度在0.02μg/ml～32.40μg/ml范围内，与峰面积线性关系良好，线性方程为y=29153x-2740，r为0.9995，方法精密度、耐用性均良好。
关键词：头孢克肟 聚合物 方法学
【中图分类号】-3 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2019）02-012-03
Development of an analysis method for cefixime polymer
Zhou Jiali
Tianjin Vocational College Of Bioengineering 300000
Abstract： This study developed an analysis method for determination of cefixime by using TSK gel G2000SWxl column. In a range of 0.02 ug/mL to 32.40 ug/mL， the concentration is linear to the peak area， with y=29153x-2740， and r=0.9995. The accuracy and robustness of this method are very good.
Key words： cefixime， polymer， analysis method
头孢克肟（Cefixime）为口服用的第三代头孢菌素类抗生素，适用于治疗敏感菌所致的呼吸、泌尿和胆道等部位的感染。头孢克肟对革兰阴性杆菌产生的β-内酰胺酶高度稳定，对革兰阴性杆菌抗菌作用强于第一代和第二代头孢菌素，对革兰阳性球菌抗菌作用不如第一代和第二代头孢菌素。目前国家食品药品监督管理局批准的头孢克肟制剂有片剂、胶囊剂、分散片、干混悬剂和颗粒剂等多种剂型，均为处方药。
2015版《中国药典》未收载头孢克肟及其制剂的聚合物检查控制方法。《日本药局方（JP）》中收载有头孢卡品酯的聚合物控制，[1]采用以苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为基础的TSK gel G2000色谱柱，国内亦有文献报道采用苯乙烯为填料的TSK gel G2000SWxl色谱柱，控制注射用头孢地嗪钠等品种中聚合物的含量。本文拟定参照文献《高效液相色谱法测定注射用头孢地嗪钠有关物质Ⅱ（聚合物）及其方法学研究》[2]中聚合物测定方法测定头孢克肟中的聚合物含量，并对该方法进行了详细的方法学验证。
1聚合物检查方法与仪器设备
1.1方法：高效分子排阻色谱法（HPSEC，中国药典2015年版四部通则0514）
1.2仪器设备：色谱柱：凝胶色谱柱（TSK G2000 SWXL ）
检测器：紫外检测器；
1.3色谱条件：
流速：1.0ml/min
流动相：0.005mol/L磷酸盐缓冲液[0.005mol/L磷酸氢二钠溶液-0.005mol/L磷酸二氢钠溶液（61：39），以磷酸调节pH值至7.0]-乙腈（93：4）
0.1mol/L磷酸盐缓冲液：取无水磷酸氢二钠1.9g，磷酸二氢钾0.9g，加水溶解并稀释至200ml，混匀。
供试品溶液：称取本品约25mg，精密称定，加0.1mol/L磷酸盐缓冲液2ml使溶解，用水稀释成0.5mg/ml的供试品溶液；
对照品溶液：称取头孢克肟对照品约25mg，精密称定，加0.1mol/L磷酸盐缓冲液2ml使溶解，用水稀释成0.5mg/ml的对照品溶液。
1.4頭孢克肟对照品：中国食品药品检定研究院
头孢克肟胶囊：市售品A、市售品B、市售品C
2聚合物检查方法学验证
2.1系统适用性试验
精密量取上述供试品溶液、对照品溶液及空白溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果如下。
结论：上述结果显示，供试品色谱图中，本品主成分与主成分峰前的聚合物之间分离度符合规定，空白溶剂不干扰主成分峰及聚合物峰的检测；对照品色谱图中各色谱参数符合要求，本方法系统适用性良好。
2.2耐用性试验
取本品，照拟定聚合物检查法，于不同柱温、不同流速、不同流动相比例、不同流动相缓冲液pH值条件下进行测定，以考察方法的耐用性，试验条件及检测结果见下列表格。
结论：由上述结果可知，本品在拟定的色谱条件下，柱温、流速、流动相比例略有波动或不同型号的高效液相色谱仪检验本品，聚合物检出情况及各色谱参数均无明显差异，方法对上述条件耐用性良好。
2.3仪器精密度试验
按拟定配制方法配制对照品溶液，精密量取20μl，连续测定6次，试验结果如下
结论：本方法检查本品中的聚合物，对照品溶液连续测定6次，峰面积RSD均小于5.0%，保留时间RSD均小于2.0%，仪器精密度符合要求。
2.4灵敏度试验
取头孢克肟对照品适量，配制灵敏度试验溶液，以信噪比约为3：1计算检测限，信噪比约为10：1计算定量限。
结论：本方法用于检测头孢克肟中聚合物含量时，灵敏度符合规定。
2.5线性试验及范围
取头孢克肟对照品适量，精密称定，加0.1mol/L磷酸盐缓冲液适量溶解，并用水定量稀释制成定量限浓度至相当于供试品溶液浓度5.0%系列的样品溶液，作为线性考察溶液。分别精密量取各溶液20μl，照聚合物检查方法检查，记录色谱图，结果如下。
结论：本方法用于本品聚合物检查，头孢克肟浓度在0.02μg/ml～32.40μg/ml范围内，与峰面积线性关系良好，线性方程为y=29153x-2740，r为0.9995。
2.6溶液稳定性试验
按拟定方法配制供试品溶液及对照品溶液，均于室温条件下放置，分别于各考察时间点精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，检测结果如下。
结论：上述结果表明，本方法检查本品中聚合物时，各聚合物峰面积会随着时间推移而发生变化，拟定供试品溶液配制方法为临用前新制；对照品溶液室温放置12小时内稳定，对照品溶液可于该时限内重复使用。
2.7样品聚合物检查
采用聚合物检查方法，对本品中试规模三批样品进行聚合物检查，结果见下表。
结论：本方法用于市售品头孢克肟聚合物检查，方法灵敏、简单。
3聚合物方法学验证结果总结
4讨论
4.1在方法学研究中，使用了同一牌号的不同批号色谱柱进行试验，发现不同批号色谱柱初始使用的分离度、理论板数均有很大差异，有的批号分离度甚至不能符合要求，但是将不符合要求的色谱柱放置一段时间后再用，色谱系统性能明显提升，可满足分析需求。
线性和范围 头孢克肟浓度在0.02μg/ml～32.40μg/ml范围内，与峰面积线性关系良好，线性方程为y=29153x-2740，r为0.9995
4.2本方法使用的色谱柱，使用后需按说明书方法进行冲洗后保存，否则柱效易下降；保存宜在阴凉处。
4.3本方法仅针对头孢克肟聚合物进行研究，亦可用于头孢克肟制剂聚合物的研究。
参考文献
[1]JP XVII Official Monographs P612 Cefcapene Pivoxil Hydrochloride Hydrate
[2]周丽君，陈亮等. 高效液相色谱法测定注射用头孢地嗪钠有关物质Ⅱ（聚合物）及其方法学研究. 安徽医药 2011 May；15（5）
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