重庆巫山独活最佳采收期研究

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　　摘要：目的  比较重庆巫山独活不同采收期产量性状及蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯含量，为确定合理的采收期提供参考依据。方法  采用田间小区试验法，于2015年9月5日-2016年3月3日，每20 d采收1次，共10个不同采收时期，以独活主根长、根直径、鲜重、干重、折干率为考察指标，以蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯为指标成分，应用HPLC对其进行测定，并运用主成分分析法进行综合评价。结果  随着采收期的延迟，独活主根长、直径、鲜重、干重、折干率呈先增加后降低的趋势;蛇床子素含量前期不断增加，12月中旬到达最高值，随后逐渐降低;二氢欧山芹醇当归酸酯含量呈曲线变化，分别于11月下旬和2月中旬出现高峰，但差异不明显。结论  重庆巫山独活单株鲜重和蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯含量与采收期有一定关系;结合鲜重和指标成分含量，其最适合的采收期应为12月中旬。本研究可为独活采收期的选择提供依据。
　　 关键词：独活;采收期;产量性状;蛇床子素;二氢欧山芹醇当归酸酯;高效液相色谱法;含量测定
　　 中图分类号：R282.4    文献标识码：A    文章编号：1005-5304（2019）06-0070-05
　　 Abstract： Objective To compare yield characteristics， contents of osthole and columbianadin of Angelicae Pubescentis Radix of different collecting time in Wushan of Chongqing; To provide references for reasonable collecting time. Methods Adopting small plot experiment in the field， taking the main root length， root diameter， fresh root weight， dry root weight and drying rate as investigation basis， collecting time from September 5th 2015 to March 3rd 2016 was divided into ten collecting time， collecting every 20 d. Taking osthole and columbianadin as the index components， the HPLC was used to determine them， and the principal component analysis method was used for comprehensive evaluation. Results Root length， root diameter， fresh root weight， dry root weight and drying rate increased first then decreased along with the collecting time. Osthole increased first， then decreased gradually after reaching a peak value in the middle of December. The change of columbianadin was a quadratic curve with the collecting time， and reached the peak at the end of November and mid-February， but there was not significant difference. Conclusion The fresh root weight and contents of osthole and columbianadin in Angelicae Pubescentis Radix has a certain relationship with the collecting time， combined with the fresh root weight and index components， the optimum collecting time of Angelicae Pubescentis Radix in Wushan of Chongqing is mid-December， which can provide theoretical basis for the choice of collecting time of Angelicae Pubescentis Radix.
　　 Keywords： Angelicae Pubescentis Radix; collecting time; yield characteristics; osthole; columbianadin; HPLC; content determination
　　 獨活是伞形科植物重齿毛当归Angelica pubeseeas Maxim. f. biserrata Shan et Yuan的干燥根，始载于《神农本草经》，列为上品，具祛风除湿、通痹止痛之功效[1]。迄今为止，国内外学者对独活资源[2]、本草考证[3-5]、化学成分[6-10]、药理作用[11]、临床应用[12]和栽培技术[13-15]等方面进行了大量研究，其研究结果对独活资源的有效利用具有重要的理论价值。采收期对中药材的产量、有效成分量、临床疗效等方面均有直接影响[16]，2015年版《中华人民共和国药典》规定独活药材“春初苗刚发芽或秋末茎叶枯萎时采挖”，有关独活不同采收期产量、指标成分含量的变化及其合理采收期选择等方面的研究目前尚未见相关报道。为适时采收高产、优质独活，从而提高临床疗效，本研究在重庆巫山独活基地采集10批次不同采收期的独活药材样品，对其产量性状、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯、总灰分和酸不溶灰分进行测定，为该地独活最佳采收期的确定提供参考。 　　1  仪器与试药
　　 LC-20AT型高效液相色谱仪，日本岛津;CPA225型分析天平，德国赛多利斯;SX2-8-10型箱式电阻炉，上海龙跃仪器设备有限公司;DJ-04B型中药粉碎机，上海淀久中药机械制造有限公司;DHG-9623A型立式鼓风干燥器，上海龙跃仪器设备有限公司;KQ-1000DE型数控超声波清洗器，江苏昆山超声仪器有限公司;1810型摩尔纯水机，上海摩勒科学仪器有限公司。
　　 蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯对照品（批号分别为110822-201308、111583-201304），中国食品药品检定研究院。乙腈（色谱纯），成都科龙化工试剂厂，甲醇为分析纯，水为现制超纯水。供试材料经重庆市药物种植研究所刘正宇研究员鉴定为重齿毛当归Angelica pubeseeas Maxim. f. biserrata Shan et Yuan干燥的根。
　　2  方法与结果
　　2.1  测量指标与方法
　　 选取巫山独活基地（海拔1788 m，31°36'14"N，109°89'40"E）的两年生独活，于2015年9月5日-2016年3月3日分批采样，每20 d采收1次。每次随机采挖试验小区的独活各20株样品，用水洗净，晾干表皮水分，用游标卡尺测量鲜重、主根长、根直径，40 ℃干燥恒重后称干重，计算折干率。取每一单株干燥独活根的中部，粉碎后过100目筛，保存备用，按2015年版《中华人民共和国药典》独活项下分析方法[1]测定蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯、总灰分及酸不溶灰分含量。
　　2.2  不同采收期对独活产量性状的影响
　　 10个不同采收期的独活主根长为25.38～33.88 cm，1月最长（33.88 cm），9月5日最短（25.38 cm）;主根长在9-12月依次较上一采收期增加11.78%、8.89%、3.01%、-2.22%、2.46%，表明主根长在进入11月后增长速度减慢。不同采收期的根直径为2.92～4.25 cm，1月根直径为4.15 cm，根直径在9-12月依次较上一采收期增加14.29%、23.21%、8.70%、21.33%、1.10%。不同采收期鲜重变化较明显，9-12月依次较上一采收期增加22.32%、26.84%、11.07%、10.95%、17.25%，12月单株鲜重最重（P<0.05），此后，鲜重不再增加，表明其生长停止，处于休眠期。干重在9-12月依次较上一采收期增加26.05%、33.53%、15.14%、11.34%、23.62%。折干率是衡量中药材质量的重要指标[17]，不同采收期的独活折干率介于22.46%～26.73%，其动态变化与鲜重、干重基本一致。独活单株鲜重、干重、折干率均随采收期的延迟而增加，12月的鲜重、干重、折干率最高，1月后逐渐下降，可能是独活为来年萌发消耗了一部分物质。整体来看，不同采收期独活主根长、根直径、鲜重、干重、折干率呈先增加后降低的趋势（见表1），表明在该试验区采收过早或过晚均影响独活产量。
　　2.3  不同采收期对指标成分的影响
　　 根据不同采收期10批独活样品的HPLC图色谱峰面积计算样品中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量，并对总灰分、酸不溶性灰分进行常规测定，结果见表2。可以看出，独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量在不同采收期有很大差异。蛇床子素含量于9月下旬-12月中旬，呈递增趋势，分别较上一采收期增加202.13%、33.06%、37.03%、35.16%、10.67%，蛇床子素含量于1月初-3月初呈递减趋势，分别较上一采收期增加-4.63%、-13.48%、-9.28%、-8.29%;二氢欧山芹醇当归酸酯含量呈较为复杂的曲线变化，于9月下旬-3月初出现了2次高峰期，分别是11月下旬和2月中旬，9月下旬较9月初分别增加了12.05%，10月中旬较9月下旬增加12.94%，11月初较10月中旬增加-12.38%，11月下旬较11月上旬增加94.62%，12月中旬较11月下旬增加-29.30%，1月初较12月中旬增加-25.93%，1月下旬较1月初增加78.77%，2月中旬较1月下旬增加6.27%，3月初较2月中旬增加-5.82%。从蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量总和来看，9月初-3月初呈先增加后降低的趋势，12月中旬到达最高值。不同采收期独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量变化趋势见图1。可见，9月初-12月中旬呈现极为明显的增加趋势，1月初-3月初逐渐降低。除9月初，不同采收期独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量均高于2015年版《中华人民共和国药典》规定。
　　2.4  各指标间相关性分析
　　 独活产量性状及指标成分含量的相关性见表3。不同采收期独活各指标间具有较强的相关性。主根长与根直径、鲜重、干重、折干率呈极显著正相关，根直径与鲜重、干重呈极显著正相关，鲜重与折干率呈极显著正相关。蛇床子素含量与主根长、根直径、鲜重、干重、折干率呈极显著正相关，二氢欧山芹醇当归酸酯含量与主根长、根直径、鲜重、干重、折干率呈显著正相关。提高独活产量和质量应综合考虑各指标间的相关性。
　　2.5  不同采收期独活主成分分析
　　 采用DPS7.05软件对独活产量性状与指标成分含量进行主成分分析，其规格化特征向量、特征值、贡献率、累计贡献率见表4、表5。
　　3  讨论
　　 重庆栽培独活面积较大，由于缺少系统的采收期质量评价，而不同采收期独活收购价格相同，导致药农采收独活时间较为随意，难以保证药材质量，也不利于打造独活地方品牌。独活属根茎类药材，其产量高低与地下根的性状有密切关系。本研究结果表明，9月初-12月中旬，独活单株鲜重不断增加，11月独活开始倒苗后，地上部分营养向下运输，根部继续生长，直至12月中旬达到高峰，因此单株鲜重最高时期为12月中旬。1月下旬后獨活鲜重逐渐下降，可能是为初春萌发作准备，根部贮存的大量营养物质开始分解，指标成分含量有所降低。本试验对单株产量性状进行分析，其结果是否适用于大田群体产量尚待深入研究。 　　 不同采收期植物次生代谢物的积累量存在明显差异[18]。药材质量的优劣是气候、土壤、生物、地形等各环境因子综合作用的结果[19]，药用植物次生代谢物是中药发挥疗效的重要物质基础[20]，而蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯属于香豆素类化合物，是独活的指标成分。2015年版《中华人民共和国药典》规定，独活药材总灰分≤8.0%，酸不溶性灰分≤3.0%，蛇床子素含量≥0.50%，二氢欧山芹醇当归酸酯含量≥0.080%[1]。本研究中，不同采收期独活总灰分为4.41%～7.90%，酸不溶性灰分为0.1%～2.2%，均符合药典规定;除9月初蛇床子素含量低于0.5%外，其余采收期蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量均高于药典规定。地理环境、气候、土壤等环境因子不同，则独活的生长发育进程不同，不同产地独活的采收期存在差异符合自然规律。由于本研究材料仅取自重庆市巫山县，其结论是否适合于其他产地有待进一步研究。
　　 实际生产中，在有效成分含量达到药典要求的基础上，产量越高则经济效益越高。为了实现经济效益最大化，可同时兼顾产量与指标成分含量，确定合理的采收期，才能保证药农增产增收。本研究结果表明，独活在同一田间管理、生态环境下，产量、指标成分与采收期有较大关系，确定药材最佳采收期应从药材的产量与质量等多方面考虑[20-21]，故12月中旬是独活的最佳采收期。不同采收期独活成分含量差异可能与不同时期植株生长所处的土壤营养、环境温度、光照强度、光照时间、降雨量等因素密切相关，还有待进一步深入研究。
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　　（收稿日期：2018-07-10）
　　（修回日期：2018-11-08;编辑：陈静）
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