转录因子SOX4、SOX9与浸润性乳腺癌形成及发展的关系探讨
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摘要：目的 探讨转录因子SOX4和SOX9与乳腺癌形成及分化的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测SOX4和SOX9蛋白在浸润性乳腺癌、导管原位癌（DCIS）和普通型导管上皮增生（UDH）中的表达情况。 结果 SOX4和SOX9在浸润性乳腺癌和DCIS中的阳性表达率均明显高于UDH，且SOX4在高级别DCIS中的表达高于低中级别组，SOX4、SOX9在浸润性癌中的表达与DCIS相比无明显差异;浸润性乳腺癌中SOX4表达升高与临床分期晚和腋窝淋巴结转移有关，SOX9表达升高与肿块体积大、组织分化差、临床分期晚、腋窝淋巴结转移及激素受体三阴有关。 结论 转录因子SOX4和SOX9主要参与乳腺癌的早期形成，在进展阶段与恶性程度增加及分化转移关系密切。
SOX（SRY-related high-mobility-group box）基因是近年来倍受关注的一类编码转录因子的发育基因，其突变和异常表达与许多肿瘤的发生、发展相关。本研究检测转录因子SOX4和SOX9在浸润性乳腺癌及导管内癌中的表达，探讨SOX转录因子表达改变在乳腺癌形成及进展的作用，为早期诊断和治疗提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集杭州市萧山区第一人民医院2012-2014年间经手术切除的乳腺癌根治标本149例，均为女性，术前未经过放化疗。患者平均年龄52.29+0.851岁。其中浸润性导管癌138例，浸润性小叶癌7例，其他类型4例。浸润性导管癌组织学分级I级14例，II级98例，III级26例。临床TNM分期，I、II、III期分别为51、69、29例。伴有淋巴结转移者66例，无淋巴结转移者83例。乳腺普通型导管上皮增生（UDH）40例，导管原位癌（DCIS）78例，其中低级别11例，中级别30例，高级别37例。
1.2 研究方法 采用免疫组化SP法检测SOX4和SOX9两种蛋白在乳腺UDH、DCIS、浸润性癌中的表达情况。兔抗人多克隆抗体SOX4，克隆号ab86809，购自Abcam（香港）有限公司，稀释浓度为1：300，脑胶质瘤为阳性对照。鼠抗人单克隆抗体SOX9，克隆号ab76997，购自Abcam（香港）有限公司，稀释浓度为1：700，扁桃体组织为阳性对照。以PBS代替一抗作为空白对照。
1.3 结果判断 SOX4以细胞核出现浅棕、棕黄或棕褐色即视为阳性表达，反之为阴性。SOX9着色于细胞浆或细胞核，以出现棕黄或褐色为阳性表达。
1.4 统计学处理 所获数据采用SPSS15.0统计学软件进行统计学分析，计数资料采用x2和（或）Fish’s精确概率法检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 乳腺不同病变中SOX4、SOX9表达情况：40例UDH中无SOX4阳性表达，8例出现SOX9表达，阳性率20%。78例DCIS中SOX4呈弱阳性表达，阳性表达23例，阳性率29.5%，与UDH相比明显升高，其中低中级别组8例阳性（34.8%），高级别组15例阳性（65.2%），两组差异有统计学意义。DCIS中40例表达SOX9，以弱阳性为主，阳性率为51.3%，显著高于UDH组，其中低中级别DCIS有21例阳性（52.5%），高级别DCIS有19例阳性（47.5%），两组无显著差异。149例浸润性乳腺癌中SOX4阳性表达39例，阳性率为26.2%。SOX9阳性表达75例，阳性率为50.3%。两者阳性率及阳性强度均显著高于UDH组，但与DCIS无明显差异。
2.2 SOX4和SOX9表达与乳腺浸润性癌各临床病理指标的关系：SOX4蛋白在肿瘤分期晚（P=0.009）、腋窝淋巴结出现转移（P=0.001）的乳腺癌表达显著高于分期早、无腋窝淋巴结转移的乳腺癌。与肿瘤大小、患者年龄、组织学分级、类型、ER、PR、Her-2表达状况无明显相关。SOX9蛋白在肿瘤直径>2cm（P=0.041）、组织学分化差（P=0.000）、临床分期晚（P=0.006）和伴有腋窝淋巴结转移（P=0.004）的乳腺癌中表达明显高于肿瘤≤2cm、分化好、临床分期早和无腋窝淋巴结转移者，且ER、PR、C-erB-2三阴组中SOX9表达高于对应阳性组（P=0.002）。
3 讨论
SOX4基因属于SOX基因C亚族，已有报道其异常表达与多种类型的肿瘤发生有关。有研究者发现SOX4通过调节上皮-间质转化（EMT）过程而促进乳腺癌进展，异位过表达SOX4足以使人类乳腺上皮细胞获得间质组织性状，从而增强细胞迁移和侵袭的能力，并指出它可作为一项判断预后的新的生物标记【1】。SOX9是目前SOX家族中研究最为广泛的转录因子之一。Weinberg研究指出【2】：Slug和SOX9能合作决定乳腺干细胞（MaSC）状态，两者共表达将促进人类乳腺癌细胞的发展及转移发生的能力，并导致病患生存率下降。
SOX4和SOX9在DCIS中的表達明显高于UDH，它们的异常表达可能是引发恶性病变的潜在因素。SOX4在高级别DCIS中的表达更为明显，提示其在细胞的恶性转化中发挥更为显著的作用。浸润性乳腺癌中SOX4和SOX9表达明显高于UDH，但与DCIS比并无显著提高，推测这两种转录因子在乳腺癌形成的早期阶段作用更为明显或直接，在恶性转化阶段可能发挥间接的协同作用，可能某些关键的下游因子不受SOX4、SOX9转录因子的调控，或部分肿瘤的形成绕过这两种转录因子调控的基因。我们发现，随肿瘤增大、分化程度的降低和淋巴结转移，SOX4和SOX9表达增强，说明这两种转录因子上调使得乳腺癌在浸润发展过程中更具侵袭性，预后更差。三阴性的乳腺癌SOX9表达明显增加间接提示转录因子SOX9可能在促进乳腺癌进展及转移能力方面发挥正向作用。
综合分析表明，转录因子SOX4和SOX9表达上调与乳腺癌的早期形成及恶性程度增加关系密切，在此过程中二者的作用既有相互协同又各有侧重。
参考文献：
【1】Jian CZ，Qian L，Yang L，et al. SOX4 induces epithelial-mesenchymal transition and contributes to breast cancer progression. Cancer Res，2012，72（17）：4597-608.
【2】Guo W，Keckesova Z，Donaher JL，et al. Slug and Sox9 cooperatively determine the mammary stem cell state. Cell，2012，148（5）：1015-1028.
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