奶粉中三聚氰胺快速测定液相色谱法

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　　摘 要:本文应用LC-10AT vp plus 单泵液相色谱仪液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺含量,该方法具有操作简便快速，重复性、回收率好的优点，且极少出现假阳性现象。
　　关键词：奶粉 三聚氰胺 液相色谱法
　　
　　1 前言
　　奶粉中添加三聚氰胺导致的婴幼儿食品安全事故使如何检测奶粉中三聚氰胺成为关注热点。国标22388中规定的检测方法过程繁杂，检测成本高，一般地区实验室因为无条件配备质谱更无法排除假阳性的现象，个别实验室回收率不理想，本方法具有操作简便快速，重复性、回收率好的优点，且极少出现假阳性现象。
　　2 实验部分
　　2.1 试剂和材料
　　除另有说明，所有实验试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。
　　2.1.1 乙腈：色谱纯。
　　2.1.2 磷酸。
　　2.1.3磷酸二氢钾。
　　2.1.4 乙腈：分析纯。
　　2.1.5 磷酸盐缓冲溶液：0.05 mol /L.
　　称取6.8g磷酸二氢钾（2.1.3），加水800 mL完全溶解后，用磷酸（2.1.2）调节PH值至3.0，用水稀释至1L，用滤膜（2.1.9）过滤后备用。
　　2.1.6 三聚氰胺标准物质：纯度大于或等于99%。
　　2.1.7 三聚氰胺标准贮备液：浓度1mg/mL。
　　准确称取100 mg三聚氰胺标准物质（精确至0.1 mg），用水完全溶解，转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，于4℃避光下保存。
　　2.1.8三聚氰胺标准使用液：浓度0.2mg/mL。
　　准确移取20 mL三聚氰胺标准贮备液（2.1.7）于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
　　2.1.9 微孔滤膜：0.45цm。
　　2.1.10 针式过滤器：0.45цm。
　　2.2 仪器
　　2.2.1 液相色谱仪，配紫外检测器。
　　2.2.2 酸度计。
　　2.2.3分析天平：感量0.0001g。
　　2.2.4溶剂过滤器。
　　2.2.5超声波水浴。
　　2.2.6电动振荡器。
　　2.2.7高速离心机。
　　2.3 分析步骤
　　2.3.1 试样处理
　　称取混匀样品1~2g，于50mL具塞刻度试管中，加入30mL乙腈（2.1.5），于电动振荡器上振荡10min,再于超声波水浴上超声提取10 min，加水至满刻度，充分混匀后静止至溶液分层，取上清液于具塞离心管中高速离心10min,上清液经针式过滤器（2.1.10）过滤后供高效液相色谱测定。
　　2.3.2 色谱条件
　　2.3.2.1色谱柱：ZORBAX SCX 300 阳离子交换柱。
　　2.3.2.2流动相：磷酸盐缓冲溶液（2.1.5）－乙腈（2.1.1）（70：30，体积比），混匀。
　　2.3.2.3 流速：1.5mL/min。
　　2.3.2.4 柱温：室温。
　　2.3.2.5 检测器：紫外检测器，波长240nm。
　　2.4 测定
　　配制浓度分别为0.20、0.50、2.00、5.00、20.0、50.0 mg /mL 的标准溶液，进20цL 标准系列中各浓度于高效液相色谱仪中，以浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
　　同时进20цL试样溶液，以测得的峰面积与标准曲线比较定量。
　　注：必要时应采用其他方法进一步定性确证。
　　2.5 结果计算
　　2.6.2 回收率
　　在添加浓度0.20 mg /mL~20.0 mg /mL范围内，回收率在97%~114%之间，各实验室需测定自己的添加回收率。
　　参考文献
　　GB/T22388-2008 《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》
　　GB/T22400-2008 《原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法》
　　NY/T1372-2007 《饲料中三聚氰胺的测定》
　　注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文

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