金诃邦士片缓解体力疲劳功能的实验研究

来源:用户上传      作者:

　　【摘 要】 目的：研究金诃邦士片缓解小鼠体力疲劳的作用。方法：选用昆明种小鼠为研究对象，用金诃邦士片0.17、0.33、1.00g/kg·bw剂量（分别相当于人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍）分别给各组小鼠连续灌胃33d，测定各组小鼠负重游泳时间、血清尿素含量、肝糖原含量和血乳酸面积。结果：与阴性对照组比较，给予小鼠不同剂量的金诃邦士片，能显著延长小鼠负重游泳时间，减少疲劳小鼠血清尿素含量，降低游泳后小鼠血乳酸曲线下面积。结论：金诃邦士片具有缓解体力疲劳功能。
　　【关键词】 金诃邦士片;负重游泳;血清尿素;肝糖原;血乳酸
　　【中图分类号】R284.1
　　【文献标志码】A
　　【文章编号】 1005-0019（2019）14-063-01
　　金诃邦士片是以枸杞子提取物、淫羊藿提取物为主要原料，用以缓解体力疲劳的保健食品。配方中枸杞子含有胡箩卜素、维生素A、维生素C等多种维生素和钙、铁、锌等多种微量元素，有增强机体免疫功能、增强机体抵抗力、促进细胞新生、降低血中胆固醇含量、抗动脉粥样硬化、改善皮肤弹性、抗脏器及皮肤衰老等作用[1-4]。枸杞多糖（LBP） 作为补阴类中药枸杞的有效成分， 能够增加肝糖原、肌糖原贮备量， 提高运动前后血液乳酸脱氢酶（LDH） 的活力[5，6]。淫羊藿是我国传统补益类中药，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿以及提高免疫能力和抑制肿瘤等功效[7]，其含有的多糖成分，可以补充或延缓运动对内源性糖的消耗，从而有利于机体内糖原储备的提高[8]。中医药在缓解运动性疲劳方面已经显现出很大的优势，中药可通过加强机体抗氧化，清除自由基及减少机体由于疲劳引起的代谢产物堆积;或通过改善疲劳所致骨骼肌细胞超微结构改变、神经系统功能异常及调节免疫等发挥抗疲劳作用[9]。本实验以运动耐力训练大鼠为模型，研究金诃邦士片抗疲劳能力的影响。
　　1 材料与方法
　　1.1 受试样品
　　金诃邦士片由青海阿如拉藏医药研究开发有限公司提供，人体推荐剂量为2g/人·日（按60kg计），批号：301P11060601。
　　1.2 实验动物及分组
　　选用军事医学科学院实验动物中心提供的SPF级健康KM种雄性小鼠200只，体重18～22g，动物生产许可证：SCXK-（军）2007-0004，实验动物饲养室温度为22-25℃，相对湿度控制在55%一70%，实验环境控制为12h白昼、12h黑夜。实验动物使用许可证号为SYXK（鲁）2008-0005。
　　实验动物共分为四批进行实验，每批随机分为4组，12只/组。实验一批进行负重游泳试验，实验二批进行血清尿素的测定，实验三批进行肝糖原的测定，实验四批进行血乳酸的测定。
　　1.3 仪器与试剂
　　755分光光度计（2002001）、YSI1500乳酸测定仪（2003001）、VITALAB SELECTRA-E型生化分析仪（2005001）、ES-1000E电子天平（2003004）、ES500HA电子天平（2005007）、BS223S电子天平（2008007）、离心机（98090）、振荡器、游泳箱、铅丝、加样器、匀浆器、具塞试管。
　　尿素氮试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号：110841）。破膜液（YSI公司，批号：07F100143）、缓冲液（YSI公司，批号：06IJI086）、乳酸标准液（YSI公司，批号：11G100082）、三氯醋酸（北京化学试剂公司，批号：010225）、葡萄糖（Amresco，批号：2734B53）、浓H2SO4（北京化工厂，批号：20110208）、蒽酮（中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20031203）。
　　1.4 方法
　　金诃邦士片的推荐量为成人（按60kg体重计）每日2g，相当于0.033g/日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.17g/kg·bw、0.33g/kg·bw、1.00g/kg·bw为低、中、高剂量组。受试物以无菌水配制，每日一次经口给予，连续灌胃33天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.1ml/10g·bw。同时设一空白对照组（0g/kg·bw），用无菌水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物相同。各剂量组均给予基础饲料。参考卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中缓解体力疲劳功能检验方法[10]，实验结束进行各项抗疲劳指示的测定。
　　1.4.1 负重游泳实验
　　末次给小鼠受试物30min，将尾根部负荷5%体重铅丝的小鼠置于游泳箱中游泳。水深30cm，水温25.0℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间游泳时间为计量资料，若受试物组游泳时间明显长于空白对照组游泳时间，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有延長小鼠负重游泳时间的作用。
　　1.4.2 血清尿素测定
　　末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中游泳90min，休息60min后立即拔眼球采血0.5ml。置4℃冰箱约3h，血凝固后2000r/min离心15min取VG血清。于VITALAB SELECTRA-E型生化分析仪上测定。
　　所得数据为计量资料，若受试物组血清尿素含量明显低于空白对照组，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有减少疲劳小鼠尿素含量的作用。
　　1.4.3 肝糖原测定：蒽酮法
　　末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，加入4mlTCA，匀浆1min，将匀浆液倒入离心管，以3000r/min离心15mim，取上清液0.5ml，加95%乙醇2ml，充分混匀至两种液体间不留有界面，用干净塞子塞上，室温下竖立放置过夜。次日以3000r/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。用2ml蒸馏水溶解糖原待测。取0.25ml待测液和0.25ml葡萄糖标准液（50mg/dl）和0.375ml蒸馏水放入试管中，混匀。 　　将2.5ml蒽酮试剂用力加入各管，煮沸15min，然后移到冰水浴，冷却后在620nm波长下，用试剂空白管调零后测定吸光度。按下式计算肝糖原含量：
　　肝糖原（mg/100g肝）=DUDS×0.0625×VG×16×100×0.9式中：DU为样品管吸光度，DS标准管吸光度;V为提取液体积（ml），G为肝组织重量（g）;16为稀释倍数;0.0625：0.125ml葡萄糖标准液中的葡萄糖含量;0.9为将葡萄糖换算成糖原的系数。
　　所得数据为计量资料，若受试物组肝糖原含量明显高于空白对照组，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有促进小鼠肝糖原储备的作用。
　　1.4.4 血乳酸测定
　　末次给小鼠受试物30min后，采血20μl加入40μl破膜液中，震荡均匀。然后使小鼠在温度为30℃的水中游泳10min后停止，立即采血20μl，加入40μl 破膜液中，振荡均匀。休息20min后，再各采血20μl，加入40μl破膜液中，振荡均匀。用乳酸测定仪测定，所得值乘3即为血乳酸值（mmol/L）。按下式计算三个时间点血乳酸曲线下面积：
　　血乳酸曲线下面积=5×（游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值）。
　　所得数据为计量资料，若受试物组血乳酸曲线下面积明显低于空白对照组，且差异有显著性（P<0.05），可判定该受试物有减少小鼠游泳后血乳酸曲线下面积的作用。
　　1.5 统计学方法
　　采用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行方差分析，再用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法（Dunnet检验法）进行统计。
　　2 结果
　　2.1 金诃邦士片对小鼠体重的影响
　　2.2 金诃邦士片对小鼠负重游泳时间的影响
　　2.3 金诃邦士片对小鼠游泳后血清尿素的影响
　　2.4 金诃邦士片对小鼠肝糖原含量的影响
　　2.5 金诃邦士片对小鼠游泳后血乳酸值的影响
　　3 讨论
　　所谓抗疲劳就是延缓疲劳的产生和/或加速疲劳的消除。疲劳的主要表现是运动时体内能量降低和肌肉力量的下降， 测定机体持续运动到力竭的时间可以反映机体的耐力，而负荷运动引起机体的生化指标变化可反映疲劳的程度。在功能食品研究中营养素被称为营养强化剂，人体在运动和劳动过程中，会消耗大量的能源物质。而糖是人体的主要供能物质，机体内的糖主要是葡萄糖和糖原，二者在机体劳动或运动中被大量消耗，剧烈运动至衰竭时，肌糖原可降到最低水平。乳酸是糖原无氧代谢产物，在激烈的动力或静力性运动时，肌肉中乳酸增加约30倍，乳酸易于积累，由于乳酸肌肉中大量堆积，使肌肉中酸性物质增多，而导致疲劳。血清尿素是机体内蛋白质和氨基酸分解代谢的最终产物，反映机体蛋白质氨基酸分解代谢的状况，对于评价机体承受运动负荷的能力是一个非常灵敏的指标[11]。大鼠运动性疲劳模型的建立，游泳条件及环境的影响因素也是关键之一。有研究显示，当水温等于或稍低于动物正常体温时，动物游泳时间最长[12]。因此，本研究结果提示经口给予小鼠不同剂量的金诃邦士片33天后，与0g/kg·bw组比较，该受试物在1.00g/kg·bw组能延长小鼠的负重游泳时间（P<0.05）、减少疲劳小鼠血清尿素含量（P<0.05）、降低游泳后小鼠血乳酸曲线下面积（P<0.05）。受试物对小鼠体重增长无不良影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）对缓解体力疲劳保健食品的判定标准可知，金诃邦士片具有缓解体力疲劳的功能。
　　参考文献
　　[1] 杨毅，蒋兰.枸杞多糖抗肿瘤作用及机制研究进展[J]. 亚太传统医药. 2017（22）
　　[2] 董淑楠，朱柯蕙，印虹，孙桂菊.枸杞多糖的理化性质及其免疫调节研究进展[J]. 中国医药生物技术. 2013（01）
　　[3] 刘慧，开金龙.枸杞多糖抗衰老药理作用研究进展[J]. 中国社区医师（医学专业）. 2010（33）
　　[4] 江旭锋.枸杞子化学成分及其药理学研究概况[J]. 江西中医学院学报. 2013（03）
　　[5] 田昕.枸杞多糖的药理作用及其抗疲劳作用综述[J].甘肃科技， 2009， 25（24） ：139-142.
　　[6] 胡馨予，趙冰，孙晓琪， 等.枸杞子多糖抗疲劳活性研究[J]. 食品科技，2015，40（07），197-200.
　　[7] 刘凯杰，李超.淫羊藿药理研究进展（综述）[J].亚热带植物科学.2014，43（2）：183 ～ 186.
　　[8] 满姗姗，边育红，顾志敏，等.浅析中药的抗疲劳机制[J].天津药学，2014，26（02），62-65.
　　[9] 崔换天，王丽，王洪武，等.常用抗疲劳中药作用机制及研究进展[J].吉林中医药2015，35（04），415-418.
　　[10] 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].北京：中华人民共和国卫生部，2003：22-34.
　　[11] 张颖捷，杜万红.国内外抗疲劳研究进展[J].实用预防医学，2012，19（7）：1112-1116.
　　[12] 代朋乙，黄昌林.运动性疲劳研究进展[J].解放军医学杂志，2016，41（11）：955-961.
转载注明来源:https://www.xzbu.com/6/view-14927813.htm