二甲双胍通过降低miR-34a抵抗心肌缺血再灌注损伤的刍议

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　　[摘要] 目的 分析二甲双胍通过降低miR-34a抵抗心肌缺血再灌注损伤的应用效果。方法 选择周龄6～8周的清洁级雄性SD大鼠60只作为研究对象，根据区组随机化法将其分成3个组别（参照组、手术组、二甲双胍组），其中参照组不对冠状动脉左前降支进行結扎，手术组在对冠状动脉左前降支结扎45 min后，再进行灌注，二甲双胍组在进行与手术组相同操作的同时，给予其二甲双胍，观察并对比3组SD大鼠的血清生化指标与miR-34a水平。 结果 二甲双胍组肌红蛋白、α羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB以及miR-34a数值分别为（99.02±24.78）ng/mL、（320.41±29.73）U/L、（327.83±30.74）U/L、（1 671.92±570.24）U/L、（626.31±227.72）U/L以及（5.16±0.44），明显优于参照组，差异有统计学意义（t=19.505，P=0.000;t=6.069，P=0.000;t=11.883，P=0.000;t=12.136，P=0.000;t=8.994，P=0.000;t=14.769，P=0.000）。结论 二甲双胍可有效调节miR-34a的表达，对于改善血清生化指标具有积极意义，可以控制心肌缺血再灌注损伤。
　　[关键词] 二甲双胍;心肌缺血;再灌注损伤;miR-34a;血清生化指标
　　[Abstract] Objective To analyze the effect of metformin on miR-34a resistance to myocardial ischemia-reperfusion injury. Methods Sixty clean male SD rats aged 6 to 8 weeks were selected as the research objects， and they were divided into three groups according to the block randomization method（reference group， surgery group， metformin group）， in the reference group， the left anterior descending coronary artery was not ligated. In the surgery group， the left anterior descending coronary artery was ligated 45 minutes before reperfusion. The metformin group was given the same operation as the surgery group， and was given metformin. Serum biochemical indicators and miR-34a levels in SD rats were observed. Results The values of myoglobin， α-hydroxybutyrate dehydrogenase， lactate dehydrogenase， creatine kinase， creatine kinase MB and miR-34a in the metformin group were （99.02±24.78） ng/mL， （320.41±29.73） U/L， （327.83±30.74） U/L， （1 671.92±570.24） U/L， （626.31±227.72） U/L， and （5.16±0.44） were significantly better than the reference group with significant differences （t=19.505， P=0.000; t=6.069， P=0.000; t=11.883， P=0.000; t=12.136， P=0.000; t=8.994， P=0.000; t=14.769， P=0.000）. Conclusion Metformin can effectively regulate the expression of miR-34a， has positive significance for improving serum biochemical parameters， can control myocardial ischemia-reperfusion injury， and is worthy of further research and promotion.
　　[Key words] Metformin; Myocardial ischemia; Reperf usion injury; miR-34a; Serum biochemical indicators
　　心血管病患者的致死原因之一为急性心肌梗死，其病症救治的关键在于梗死动脉的疏通与心肌血液供应的恢复，但是根据相关研究显示[1]，心肌缺血情况得以恢复血流灌注时，会加重患者心肌损伤的严重性，极易引发患者发生心肌顿抑、心律失常以及心功能不全等并症状，即心肌缺血再灌注损伤。因此，在恢复患者冠状动脉血流通畅的同时，怎样避免心肌缺血再灌注损伤情况的发生，成为心血管疾病临床研究的热点[2]。近年来，随着医疗技术的不断发展，相关文献报道[3]，miRNAs作为碱基组成的一种内源性非编码小RNA，能够对RNA降解起到促进效果，并可控制mRNA翻译，对于靶基因的表达具有调控作用。因此，该研究针对二甲双胍通过降低miR-34a抵抗心肌缺血再灌注损伤的应用效果进行分析，现报道如下。
　　1  对象与方法 　　1.1  研究对象
　　选择周龄6～8周的清洁级雄性SD大鼠60只作为研究对象，根据区组随机化法将其分成3个组别（参照组、手术组、二甲双胍组），每组20只，所有SD大鼠均由齐齐哈尔医学院提供，且所有参与实验的SD大鼠均接受人道对待，实验中的相关操作均符合美国国立卫生研究院颁布的《实验动物管理和使用指南》中的相关规定，同时，该研究经过齐齐哈尔医学院实验动物伦理委员会的审核，获得其批准后开展，其3组SD大鼠的基础信息进行对比，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
　　1.2  方法
　　参照组不对冠状动脉左前降支进行结扎，手术组在对冠状动脉左前降支结扎45 min后，再进行灌注，灌注时间为120 min，二甲双胍组在进行与手术组相同操作的同时，给予其二甲双胍（国药准字：H20023370），剂量为5 mg/kg。
　　在对3组实验动物进行取材时，需要对其进行腹腔注射麻醉，麻醉药物为浓度为20%的乌拉坦，剂量为0.12 g/100 g，于股动脉进行放血处死，然后将其胸腔迅速打开，取出实验动物的心脏，利用预冷生理盐水进行冲洗，预冷温度为4℃，观察实验动物的心肌组织，利用形态学对其需要的心肌组织进行检查，剩余的心肌组织需要将其放在液氮中，并转移到零下80℃的环境中进行保存[4];同时，将实验动物固定在手术板上，选择一侧抽取其股静脉血，剂量为5 mL，抽取后将其置入20 mL离心管内，并于37℃恒温环境中静置30 min，然后进行离心操作，离心参数设置为4 000 r/min，离心时间为15 min，将其分离的血清小心放置另一离心管中，进而便于血清生化指标的测试[5]。此外，利用MTT试验（MTT比色法）、流式细胞术、免疫印迹、免疫荧光检测等方法，观察缺血再灌注损伤过程中mir-34a的变化。
　　1.3  观察指标及判定标准
　　根据3组SD大鼠治疗后的临床指标对其治疗效果进行评估，将参照组数据最为比较标准，分别对比3组SD大鼠的血清生化指标与心肌细胞miR-34a相对表达水平，其中血清生化指标主要包含肌红蛋白、α羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB。
　　1.4  统计方法
　　在研究完成后，将研究中涉及的相关数据进行整理 ，应用SPSS 20.0统计学软件对研究数据予以处理和分析，计量资料以（x±s）表示，組间比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
　　2  结果
　　2.1  血清生化指标
　　二甲双胍组在肌红蛋白、α羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB方面的数据，明显优于手术组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
　　2.2  心肌细胞miR-34a相对表达水平
　　二甲双胍组心肌细胞miR-34a相对表达水平，明显优于优于手术组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。
　　3  讨论
　　心肌缺血再灌注损伤主要因急性心肌梗死患者在溶栓或经皮冠状动脉介入治疗所引发的一种心肌损伤病症，属于心肌继发损伤，目前尚无有效的缓解办法[6]。二甲双胍是国际以及中国糖尿病防治指南中推荐的2型糖尿病的一线药物，其药物不良反应小，因此更具安全性[7]。近年来，相关研究表明，二甲双胍对于减少梗死面积具有积极作用，其药物不仅能够作用糖尿病合并急性心肌梗死患者，还作用于非糖尿病心肌梗死患者，在缩小患者梗死面积的同时，能够改善患者血清生化指标，对于降低患者心肌缺血再灌注损伤以及改善心肌梗死后心肌重塑的情况具有积极意义[8]。同时，临床关于二甲双胍在抗癌方面的研究越来越多，其老药新用的模式推动了临床医学对于二甲双胍药物的研究[9]。microRNA作为一种广泛表达于所有组织和个体各个发展阶段，调节各种生理病理过程的功能性小分子，对于心血管疾病如心肌肥大、心衰、心肌梗死等病症的调节过程也具有一定影响;因其对于疾病的调控效果，在肿瘤的治疗方案也具有一定的效果，而miR-34a作为其中的一个热门小分子，在P53的影响下能够参与到癌细胞的凋亡过程中，进而发挥抗肿瘤的效果[10];同时，查找相关文献发现miR-34a可以通过调节肿瘤坏死因子抑制凋亡，保护缺血再灌注损伤的心肌细胞。林光柱等[11]研究中表明，二甲双胍组实验对象的心肌梗死面积、天门冬氨酸氨基转换酶、肌酸激酶以及乳酸脱氢酶分别为（27.3±6.5）%、（898.3±167.3）U/L、（997.4±261.7）U/L、（2 260.2±431.7）U/L，其数据明显优于缺血再灌注假模型组别，表明二甲双胍对于改善心肌缺血再灌注损伤时的血清生化指标，对调控冠脉血流量具有积极效果;该次研究中二甲双胍组肌红蛋白、α羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB的数据分别为（99.02±24.78）ng/mL、（320.41±29.73）U/L、（327.83±30.74）U/L、（1 671.92±570.24）U/L、（626.31±227.72）U/L，明显优于手术组;同时，二甲双胍组心肌细胞miR-34a相对表达水平为（5.16±0.44），明显优于参照组（P<0.05），表明二甲双胍能够改善患者血清生化指标，并可调控心肌细胞miR-34a相对表达水平，进而减少心肌细胞的凋亡，达到抵抗心肌缺血再灌注损伤的效果;该研究数据与上述研究结果具有一致性，说明二甲双胍可在心肌梗死的临床治疗中有应用价值。
　　综上所述，二甲双胍可有效调节miR-34a的表达，对于改善血清生化指标具有积极意义，可以控制心肌缺血再灌注损伤。
　　[参考文献]
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　　（收稿日期：2020-02-07）
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