法测定保济丸中葛根素的含量
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作者: 许丽芬 秦春梅 张 雪
关键词：高效液相色谱法；保济丸,葛根素
摘要目的:运用高效液相色谱法测定保济丸中葛根素的含量。 方法: 色谱柱为Hypersil ODS C18柱（250mm×4.6m，m5mm），甲醇-水(25∶75)为流动相,检测波长为250nm。结果:葛根素在0.0325～0.3256mg线性关系良好（r＝0.9998，平均回收率为98.12%，RSD2.11％。结论:本法简单，结果可靠，重复性好，将为保济丸质量控制提供科学依据。
KEY WORD: HPLC;Baoji Pills;
ABSTRACT: AIM: To detemine the contents of puerarin in Baoji Pills by HPLC.
METHODS: In this method, Hypersil ODS C18 column was used, and methanol-water(25:75) as a mobile phase, the detection wavelength was at 250nm. RESULTS: Puerarin showed a good linear relationship at a range of 0.0325～0.3256mg，r＝0.9998.The average recovery was 98.12%,and RSD was 3.4%.CONCLUSION: The method is accurate and reliable, and can be used to control the quality of Baoji Pills.
保济丸具有解表，去湿，和中的作用。用于腹痛腹泻，噎食嗳酸，恶心呕吐，肠胃不适，消化不良，舟车晕浪，四时感冒，发热头痛。葛根在处方中用量较大，而葛根素是典型的水溶性成分的代表。本实验通过HPLC法测定保济丸中葛根素的含量来间接控制保济丸的质量。该方法处理简单、快速、结果稳定。
1.仪器、试剂和药品
Agilent 1100 型高效液相色谱仪，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他实际均为分析纯。葛根素对照品（中国生物制品检定所，批号为0752-9907），保济丸（广州王老吉药业股份有限公司）。
2.方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Hypersil ODS C18色谱柱（250mm×4.6mm，5mm）；柱温：30℃；测定波长：250nm；体积流量：0.8mL/min；流动相：甲醇-水（25:75）；进样量：5mL。
2.2对照品的配制：精密称取葛根素对照品4.07mg，置25 ml量瓶中，摇匀，甲醇定容25ml，精密吸取取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每ml含葛根素0.01628mg）。
2.3供试品溶液的制备：取本品2瓶，研细，取0.8g，精密称定，加甲醇50ml回流提取1小时，过滤，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液一并过滤，合并滤液和洗液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶，甲醇定容至刻度，即得供试品溶液，同法制得缺葛根的阴性对照溶液。
2.4系统适用性试验：在上述色谱条件下，分别取对照品溶液、供试品溶液及缺甘草总黄酮阴性对照品溶液进样，理论塔板数以葛根素计不低于3000。色谱图见图1。
图1 对照品溶液（A）供试品溶液（B）和阴性对照的HPLC图谱
Fig.1 HPLC chromatograms of reference Substances（A），Baoji Pills（B）and negative sample（C）
2.5 线性关系考察：准确吸取对照品溶液 2、5、10、15、20mL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，葛根素量为横座标，绘制标准曲线，计算得回归方程：y = 4742.8x + 7.9612，r＝0.9998，表明葛根素在0.03256～0. 3256mg与峰面积的线性关系良好。
2.6 精密度试验：取对照品溶液5uL，连续进样5次，测定峰面积值，计算得葛根素峰面积分值RSD为1.28％。
2.7 稳定性试验：取同一供试品溶液，于0、2、4、7、10h分别进样5 uL，测定葛根素峰面积值，计算得葛根素峰面积分值RSD为0.63％。
2.8 重现性试验：精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份，依法测定，计算，结果葛根素质量分数的RSD为2.09％。
2.9 加样回收率试验：精密称取已知含量的保济丸（批号：040301）适量5份，精密加入一定量的葛根素对照品溶液，按2.3项下操作，在上述色谱条件下进行HPLC分析，测定葛根素含量，计算加样回收率，结果，保济丸中葛根素的平均回收率为98.12％，RSD为2.11％。
2.10 样品测定：分别精密称取不同批号的保济丸适量，按2.3项下操作，在上述色谱条件下对3批保济丸进行HPLC分析，结果见表1。
表1 保济丸中葛根素的测定结果
Table1 Content of puerarin in Baoji Pills
批号 保济丸（mg/g）
030501 0.23
040103 0.35
040702 0.38
3 讨论
3.1 考察了用冷浸法、回流提取法和超声提取法这三种提取方法提取其中的葛根素，结果回流提取1小时的提取最完全，因方法简单易行，故选用回流提取1小时。
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